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1、课题 3 血红蛋白的提取和分离关于血红蛋白的提取和分离的基础知识1凝胶色谱法分配色谱法相对分子质量的大小凝 胶 色 谱 法 也 称 作 _，是 根 据_分离蛋白质的有效方法。2缓冲溶液酸碱12 种缓冲剂水使用比例(1)缓冲溶 液的作用：在一定范围 内能够抵御 _ 和_对溶液 pH 值的影响。(2)配制：缓冲溶液通常由 _溶解于_中配制而成的。调节缓冲剂的_就可以得到不同 pH 值范围内的缓冲液。3电泳琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(1)概 念：电泳是指 _ 在 电场 的作 用下 发生 的_过程。带电粒子迁移(2)两 种 常 用 的 电 泳 方 法 是 _ 和_，在测定蛋白质分子量时通常使用_
2、。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带_的多少以及_等因素。净电荷分子的大小SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳血红蛋白的提取和分离的实验1流程：蛋白质的提取和分离一般分为四步：_、粗分离、_和纯度鉴定。纯化2样品处理：(1)红细胞的洗涤：目的是_，以利于后续步骤分离纯化。去除杂蛋白甲苯血红蛋白的水溶液(2)血红蛋白的释放：在蒸馏水和_的作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：将混合液离心后，试管中的溶液分为 4 层，第 3 层是红色透明液体，这是_。样品处理3粗分离：透析可以去除样品中_的杂质，或用于更换样品的_。4纯化：凝胶色谱操作。分子量较小缓冲液分离的种类相对分子质量直径
3、大小运动方式运动速度运动路程洗脱次序大分子物质大大于凝胶颗粒空隙，分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间垂直向下的运动较快 较短先小分子物质小小于凝胶颗粒空隙，分子可以进入凝胶颗粒内部垂直向下的运动，无规则的扩散运动较慢 较长后凝胶色谱法分离蛋白质的原理比较项目DNA 的粗提取与鉴定血红蛋白的提取与分离材料选择鸡血细胞等含 DNA 丰富的生物组织哺乳动物成熟的红细胞破碎细胞的方式动物细胞：吸水涨破；植物细胞：洗涤剂、食盐搅拌研磨等加蒸馏水和甲苯搅拌去除杂质的方式用不同浓度的 NaCl 溶液处理；用酒精处理；用蛋白酶处理等透析处理；纯化处理鉴定方式二苯胺；沸水浴SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测
4、定蛋白质的相对分子质量DNA 与血红蛋白的提取和分离的实验过程比较血红蛋白的提取与分离【例 1】选用哺乳动物红细胞作分离蛋白质的实验材料，有何好处()A红细胞无细胞核B红细胞无细胞膜C红细胞蛋白质含量高D红细胞 DNA 含量高【名师点拨】：哺乳动物的红细胞没有细胞核，提取时杂质较少，能得到更纯净的血红蛋白。【答案】：A【配对练习 1】洗涤红细胞时，分离所用方法为()A低速长时间离心B低速短时间离心C高速长时间离心D高速短时间离心解析：洗涤红细胞时，分离所用方法为低速短时间离心。答案：B用疑胶色谱法分离蛋白质【例 2】用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质()A路程较长，移动速度较慢B路程较
5、长，移动速度较快C路程较短，移动速度较慢D路程较短，移动速度较快【名师点拨】：在凝胶小球体内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。【答案】：D【配对练习 2】凝胶色谱柱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是()A改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C将酶或细胞固定在凝胶中D与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度解析：凝胶的种类较多，但每一种凝胶内部
6、都有空隙，相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质经过的路径比相对分子质量较大的蛋白质经过的路径要长，由此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。答案：A聚丙烯酰胺凝胶电泳法【例 3】用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取血清蛋白的实验操作中，错误的是()A点样时将样品小心加到电泳样品槽的胶面上B电泳时，将稳压稳流电泳仪的电流稳定在 10 mAC染色时用 0.05%考马斯亮蓝 R250 染色液D脱色用 7%乙酸浸泡漂洗数次，直至蓝色背景褪去【名师点拨】：用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取蛋白质的实验操作顺序为点样电泳染色脱色制干胶板。点样用微量注射器取 0.5 L 样品小心地将样品加在样品槽的胶面上。电泳时打开电泳仪开关，电流调在 10 mA，待样品进入分离胶时将电流调至 2030 mA。溴酚蓝到达分离胶底部上方约1 cm 处，关闭电源。【答案】：B【配对练习 3】SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入 SDS 的作用是()A增大蛋白质的相对分子质量B改变蛋白质的形状C掩盖不同种蛋白质的电荷差别D减少蛋白质的相对分子量解析：SDS 可以消除净电荷对迁移率的影响。答案：C