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1、实验一鸡胚接种一、实验目的一、实验目的了解鸡胚接种的优缺点。了解鸡胚接种的优缺点。掌握鸡胚接种病毒掌握鸡胚接种病毒操作方法。操作方法。鸡胚用于病毒培养的优缺点鸡胚用于病毒培养的优缺点一优点一优点1、组织分化程度低、组织分化程度低2、可选择不同的日龄和接种途径、可选择不同的日龄和接种途径3、病毒易于增殖、病毒易于增殖4、感染病毒的组织和液体中含大量、感染病毒的组织和液体中含大量病毒病毒5、容易采集和处理、容易采集和处理6、来源充足、来源充足7、设备和操作简便易行、设备和操作简便易行二缺点二缺点1、胚内可能污染细菌和病毒、胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城沙门氏菌、禽白血病病毒、
2、新城疫、禽脑脊髓炎病毒疫、禽脑脊髓炎病毒2、母源抗体、母源抗体3、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针性的感染指针二、鸡胚的结构与功能二、鸡胚的结构与功能1 1、卵壳卵壳卵壳卵壳 上有细孔，进行气体交换上有细孔，进行气体交换上有细孔，进行气体交换上有细孔，进行气体交换2 2、壳膜壳膜壳膜壳膜 使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。3 3、气室气室气室气室 呼吸和调节压力呼吸和调节压力呼吸和调节压力呼吸和调节压力 4、绒毛尿囊膜绒毛尿
3、囊膜 起胚胎呼吸器官的功能，起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。而进行的。5、尿囊腔尿囊腔 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。天后，尿囊液开始变得混浊。6、羊膜与羊膜腔、羊膜与羊膜腔 其中盛有羊水，胎体浸泡于其中盛有羊水，胎体浸泡于其中其中7、卵黄、卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。在胚胎发育早期供给鸡胚营养。8、卵白、卵白 在
4、胚胎发育晚期供给鸡胚营养。在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。接种途径接种途径 1、绒毛尿囊膜接种、绒毛尿囊膜接种 2、尿囊腔接种、尿囊腔接种3、卵黄囊接种、卵黄囊接种4、静脉接种、静脉接种 蓝舌病毒蓝舌病毒5、羊膜腔接种、羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒正粘病毒和副粘病毒6、脑内接种、脑内接种 狂犬病毒狂犬病毒7、眼球接种、眼球接种1、鸡胚、鸡胚 9-11日龄日龄2、病毒、病毒 新城疫病毒新城疫病毒3、照蛋灯、照蛋灯4、打孔器、打孔器5、石蜡、石蜡6、注射器、注射器7、蛋座、蛋座8、酒精棉球、碘酊棉球、酒精棉球、碘酊棉球三、实验材料三、实验材料四、四、鸡胚接种方法鸡胚接种方法实验前准备实验前准备1 1
5、、用检卵灯检查鸡胚活力。、用检卵灯检查鸡胚活力。2 2、用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在、用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。将要接种的部位做好记号。3 3、对鸡胚进行消毒。、对鸡胚进行消毒。一卵黄囊接种法一卵黄囊接种法 主要用于虫媒披膜病毒以及主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的别离和增殖。的别离和增殖。方法一：方法一：1 1取取6-86-8日龄鸡胚，用检卵灯日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置后，照视画出气室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上垂直放置在卵座上(大头向上大头向上)2 2用碘酊和酒精消毒气室端用碘酊和酒精消毒气室端3
6、 3用钢锥在气室中央锥一小孔用钢锥在气室中央锥一小孔 4 4用注射器吸取病毒悬液，沿用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔垂直刺入气室端所穿小孔垂直刺入3cm3cm，注入注入0.1-0.5ml0.1-0.5ml病毒液。病毒液。5 5用熔化的石蜡封孔，置孵卵用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，每天翻卵箱内继续孵育，每天翻卵1-21-2次，次，24h24h内死亡者废弃。内死亡者废弃。4、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。1、用检卵灯检查鸡胚活力。收毒前将鸡胚直立放置于4冰箱半小时以上，冻死胚胎，防止出血。一优点1、组织分化程度低2、可选择不同的日龄和接种途
7、径3、病毒易于增殖4、感染病毒的组织和液体中含大量病毒5、容易采集和处理6、来源充足7、设备和操作简便易行5、尿囊腔 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。根据接种途径的不同，收获相应的材料一优点1、组织分化程度低2、可选择不同的日龄和接种途径3、病毒易于增殖4、感染病毒的组织和液体中含大量病毒5、容易采集和处理6、来源充足7、设备和操作简便易行二缺点1、胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒2、母源抗体3、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针主要用于虫媒披膜
8、病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的别离和增殖。4用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.3、气室 呼吸和调节压力4、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。方法二：12同一3将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。方法二：方法二：1 12 2同一同一3 3将卵横放在卵座上，胚将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。在卵长径的胎位置向下。在卵长径的1/21/2处用碘酊和酒精消毒。处用碘酊和酒精消毒。4 4用钢锥打一小孔，将针用钢锥打一小孔，将针头刺入约头刺入约1.5cm1.5cm，注入病毒，注入病毒液液0.1-0.5ml0.1-0.5ml。5 5用熔化的石蜡封孔，置用熔化的石蜡封孔，
9、置孵卵箱内继续孵育，孵卵箱内继续孵育，24h24h内内死亡者废弃。死亡者废弃。二绒毛尿囊膜接种二绒毛尿囊膜接种主要用于痘主要用于痘V V和疱疹和疱疹V V的别的别离和增殖。离和增殖。方法一：方法一：1 1取取10-1210-12日龄鸡胚，日龄鸡胚，画出气室部，消毒画出气室部，消毒2 2在气室端的卵壳上开在气室端的卵壳上开一一1.51.5cm1.51.5cm的口的口3 3用灭菌眼科镊子撕去用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜。一小片内壳膜。4 4滴入接种物。滴入接种物。5 5用胶布或透明胶纸封用胶布或透明胶纸封闭切口。闭切口。方法二：要做人工气室方法二：要做人工气室方法二：要做人工气室方法二：要做人工
10、气室1 1 1 1、在胚胎附近近气室处，选择血、在胚胎附近近气室处，选择血、在胚胎附近近气室处，选择血、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用电烙器在卵壳管较少的部位，用电烙器在卵壳管较少的部位，用电烙器在卵壳管较少的部位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约上烙一个直径约上烙一个直径约上烙一个直径约3-4mm3-4mm3-4mm3-4mm的烤焦圈。的烤焦圈。的烤焦圈。的烤焦圈。2 2 2 2、用碘酊和酒精消毒后，小心用、用碘酊和酒精消毒后，小心用、用碘酊和酒精消毒后，小心用、用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳，造成卵窗。刀尖撬起卵壳，造成卵窗。刀尖撬起卵壳，造成卵窗。刀尖撬起卵壳，造成卵窗。
11、3 3 3 3、在气室端中央钻一个小孔。、在气室端中央钻一个小孔。、在气室端中央钻一个小孔。、在气室端中央钻一个小孔。4 4 4 4、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。加生理盐水于刺破处。加生理盐水于刺破处。加生理盐水于刺破处。5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而形成人工
12、气室，此时可见滴于壳膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐水迅速渗入。膜上的生理盐水迅速渗入。6 6、用、用1ml1ml注射器滴注射器滴2-32-3滴接种物于绒毛尿囊滴接种物于绒毛尿囊膜上。膜上。7 7、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用石蜡密封。室中央的小孔用石蜡密封。8 8、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。窗向上。三三 尿囊腔接种尿囊腔接种 主要用于正粘主要用于正粘V V和副粘和副粘V V，如流感，如流感V V、新、新城疫
13、城疫V V的别离和增殖。的别离和增殖。1 1、选用、选用10-1110-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位日龄的鸡胚，画出气室和胚位2 2、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒3 3、用钢锥穿一小孔、用钢锥穿一小孔4 4、将注射器沿小孔插入、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm0.5-1.0cm，注入，注入0.1-0.1-0.2ml0.2ml接种物接种物5 5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵一次，并检卵一次，24h24h内死亡者废弃。内死亡者废弃。五、新城疫病毒接种鸡五、新城疫病毒接种鸡胚后病变胚后病变1、
14、鸡胚停止生长。、鸡胚停止生长。2、全身出血头颈部，背部等。、全身出血头颈部，背部等。3、尿囊液增量。、尿囊液增量。4、病毒经尿囊腔接种后、病毒经尿囊腔接种后36h，最高滴度可，最高滴度可达达107个鸡胚致死量。个鸡胚致死量。5、鸡胚死亡病毒接种量大。、鸡胚死亡病毒接种量大。六、收毒六、收毒 收毒前将鸡胚直立放置于收毒前将鸡胚直立放置于4冰箱半小冰箱半小时以上，冻死胚胎，防止出血。时以上，冻死胚胎，防止出血。根据接种途径的不同，收获相应的材根据接种途径的不同，收获相应的材料料1、绒毛尿囊膜接种、绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿收获接种部位绒毛尿囊膜囊膜2、尿囊腔接种、尿囊腔接种 收获尿囊液收获尿囊液58ml3、卵黄囊接种、卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体收获卵黄囊或胚体4、羊膜腔接种、羊膜腔接种 收获羊水收获羊水0.51ml