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1、临床微生物标本采集方法一 导管尖培养标本采集 物品准备：无菌试管、标本标签、无菌剪刀、无菌手套操作者进行卫生消毒，戴帽子、外科口罩戴无菌手套，将拔除的中央导管用无菌剪刀剪长约5CM，导管尖端放入无菌试管内。脱手套，洗手，标本及时送检二、留置导尿管患者中段尿培养标本采集物品准备：治疗车、速干手消毒剂、治疗方盘内有盖培养试管1支、打火机一支、无菌手套一副、0.5%碘伏消毒液棉球（置换药碗内）数个、无菌镊子1个、弯盘1个、酒精灯1盏（A）操作人员准备：着装规范（卫生手消毒、帽子、口罩、口罩、）;患者准备：确认患者（核对姓名、床号、腕带），导尿管已夹住松开患者导尿管，弃其前段尿液使用0.5%碘伏溶液棉
2、球消毒导尿管的采样部位操作者用速干手消毒剂手消毒后戴无菌手套，使用无菌注射器斜刺入导尿管的采样部位抽取10-20ml尿液，退出注射器 协助者点燃酒精灯，用燃烧法消毒试管管口和盖子将注射器内尿液注入试管（避免污染）协助者再次用燃烧法消毒试管管口和盖子，随即盖紧试管（标本不得倒置，以免污染），熄灭酒精灯，贴好检验单标签清理好用物，手卫生，尿标本及时送检注意事项1、采集指征：怀疑有尿路感染时，应考虑做尿培养。2、采集时机：抗菌药物使用之前，留置导尿管者须 夹管30min以上。3、采样部位：应选择尿管采样口或靠近尿道的导尿 管管壁。4、采样部位的消毒：使用0.5%碘伏液棉球沿采样点 由内而外消毒，每个
3、棉球只使用一次。5、无菌物品需检查包装和有效期，确保合格。6、采样过程中避免污染。三、开放性伤口培养标本采集物品准备用生理盐水彻底冲洗伤口用拭子深入伤口基底部或伤口与正常组织边缘处采集两个标本，分别用于革兰染色和培养将用于革兰染色的标本置于无菌标本杯中将用于培养的标本置于需氧运送培养基中，密闭保存分别标注患者及标本信息，30min内送检，否则置4冰箱冷藏，24h内送检四、使用中紫外线灯辐照度值测定法方法：紫外线强度照射指示卡测定法物品准备：标尺、紫外线强度照射指示卡放好标尺，开启紫外线灯开启紫外线灯5min后，将指示卡置于紫外线灯下垂直距离1m处，有图案一面朝上照射1min后，关掉紫外线灯，观
4、察指示卡色块的颜色，进行结果判定。将指示卡色块的颜色与“灯管强度90uW/CM”、“灯管强度70uW/CM”标准色块进行比较，判定测定结果 五、消毒剂染菌量采样用物准备：碘伏、含9ml中和剂试管、无菌注射器、酒精灯、手消毒剂、记号笔手消毒：按六步洗手法搓揉至干燥消毒试管口：将试管放在酒精灯上旋转进行消毒，此为重要步骤。无菌法取注射器用无菌注射器抽取使用中的消毒剂1ml将抽取的消毒剂注入含9ml中和剂的试管内，注意不接触试管口再次用酒精灯消毒试管口将消毒剂与中和剂振荡充分混匀用记号笔在试管壁编写号码，送检备注：中和剂的选择：1、醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和。2、含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧
5、化物消毒 剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂。3、氯与定、季铵盐类消毒剂用含0.3%吐温-80和0.3卵磷脂的中和剂。4、醛类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂。5、含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中 加入吐温-80到0.3%，也可使用经该消毒剂消毒 效果监测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。六、洁净手术室空气沉降菌采样一、采样前准备1、当日术毕，按常规对手术间所有物表及地面进行湿式清洁和擦拭。2、检查净化空调系统运作是否正常，当日完成手术间清洁后，调节空调系统处于待机状态，次晨打开系统运行30min。自净后采样。二、采用平板沉降法1、采样时间:在净化空调开启30min进行采样，采样时洁净手术室大
6、门应保持关闭，以维持手术室正压状态和洁净度。2、采样护士准备：在采样前应洗手（或手消毒）戴口罩，帽子，穿无菌衣。操作时应轻稳，避免污染培养皿。3、采样方法：把琼脂平板放在室内各采样点，采样时把平板盖打开扣放于平板少许边沿上，同时培养皿下垫灭菌疗巾，暴露30min后，盖上平板盖，并作好手术间标志及平板上注明手术区和周边区，固定培养皿，放指定容器内。防再次污染。4、采样顺序：采样时平板应从科室最靠内的房间放置，依次向外布放，每个手术间也是从最靠里的位置放置平板，最后放置最靠门的采样点。采样点分布均匀，收取平板顺序相反。5、布点要求：百级手术间，手术区（手术台两侧0.9m以内，两端0.4m内）呈对角
7、线，东南西北中5点，周边区（距墙1m，每边2个）8点，共需13个培养皿；千级手术间，手术区（手术台两侧0.6m以内，两端0.4m以内）呈单角线3点，周边区（距1机，长边2个，短边1个）6点，共需9个培养皿；万级手术间:手术区（手术台4边，0.4m以内）呈对角线3点，周边区（距离1m每边1个）4点，共需7个培养皿。检测时可做一次空白对照和模拟操作。模拟操作将一个对照皿打开后立即封盖，两个对照结果必须为阴性，整个操作过程应符合无菌要求。6、采样高度：洁净手术间的手术区采样高度为0.8-1.2m,周边区在地面或0.8m采样，与医院洁净手术部建筑技术规范要求高度相符。7、培养条件：采样后的培养基按要求
8、送至化验室（细菌定）在37培养箱培养，24h观察结果。8、判断结果：（1）百级洁净手术间手术区小于 0.2cfu/30min,周边区小于0.4cfu/30min（2）千级洁净手术间手术区小于 0.75cfu/30min,周边区小于 1.5cfu/30min。（3）万级洁净手术间手术区小于 2cfu/30min,周边小于4cfu/30min.（4）普通手术间小于5cfu/30min.百级手术间 千级手术间万级手术间十万级手术间注意事项：1、平皿的取送与放置方法：拿取平皿时，大在下，小在上，采样时要大在上，小在下，大的斜盖在小的平皿上，不能两个平皿同时向上。2、在化验单上注明平皿暴露时间。七、非洁
9、净环境空气沉降菌采样待测房间准备，静止至少10min物品准备根据待测房间面积大小，按GB15982要求放置培养皿田暴露时间 产房.导管房.新生儿.重症监护室.器官移植房.血液病病区.烧伤病房:15min普通病房:5min从里到外逐个打开培养皿盖，扣放于平皿旁（注：手、头等严禁从培养基上方越过）暴露规定时间后，按打开反方向盖上平皿盖，及时送检八、物体表面采样医院物体表面采样的对象：一切与医疗活动相关的物体表面均可以作为采样的对象：治疗台、治疗车、器械车、器械台、麻醉机、新生儿暖箱、诊疗仪器、床头柜、床尾桌、监护仪按钮、血压器袖带、听诊器、床栏、遥控器、门把手、电脑键盘、鼠标、电话机、病历夹等。采
10、样时间：常规：消毒处理后进行采样暴发流行：未处理表面，随机采样采样面积：常规:100cm时，全部表面；100cm时取100cm。暴发流行：不限，尽可能多采。九、卫生手消毒效果采样医务人员手采样的意义：1、引起医源性感染的因素很多，医务人员手可以充当医源性感染的媒介，手的微生物污染是造成医院感染的最直接的传播途径，由于医务人员的手传播的细菌而造成的医院感染约占30%。因此医护人员做好手的清洁消毒是控制医院感染的重要措施之一。2.促进医务人员手卫生的依从性。3.进行流行病学调查。物品准备酒精灯外焰烧灼采样试管管口，用无菌棉签蘸取中和试剂被检者卫生手消毒后，双手五指并拢，用棉拭子在一手曲面从指跟到指
11、端往返涂擦2遍，涂擦过程中同时转动棉拭子；同法采集另一只手取无菌剪刀，酒精灯外焰烧灼采样试管管口剪去棉拭子手接触部分投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内；酒精灯外焰烧灼试管管口后盖上瓶盖十、外科手消毒效果采样物品准备：无菌棉拭子、试管架、含中和剂的无菌洗脱液、灭菌剪刀、酒精灯、打火机、采样单、采样记号笔、手消毒剂被检者着装规范，外科手消毒后保持双手位于胸前并高于肘部取无菌棉签2根浸蘸含相应中和剂的洗脱液一根棉签，涂擦一手五指曲面，从指跟开始至指端，每指跟到指端往返转动涂擦2次，一个手涂擦面积约30c；另一只手同样涂擦剪去棉签手接触部位，两个棉签投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内试管塞用酒精灯烫后塞住试管口在试管上标记被检者姓名、采样时间填写手卫生消毒效果检测申请单，及时送检