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1、菊花的组织培养菊花的组织培养指植物指植物离体离体的器官、组织或细胞，在的器官、组织或细胞，在一定一定营养物质、激素和其他外界条件营养物质、激素和其他外界条件的作用下，发的作用下，发育成完整植株的一种无菌培养技术。育成完整植株的一种无菌培养技术。一、一、植物组织培养的概念植物组织培养的概念概念：概念：原因：原因：植物组织培养原理：植物组织培养原理：植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。完整个体的潜能。是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质的全套遗传物质1.什么
2、叫分化？其实质是什么什么叫分化？其实质是什么?2.什么叫脱（去）分化、再分化？什么叫脱（去）分化、再分化？3.愈伤组织的细胞有什么特点？愈伤组织的细胞有什么特点？4.如何控制细胞的脱分化与去分化？如何控制细胞的脱分化与去分化？P33阅读阅读32页解决下列问题：页解决下列问题：二、植物组织培养的基本过程二、植物组织培养的基本过程基因的选择性表达基因的选择性表达 使用植物激素人为控制使用植物激素人为控制外植体外植体P34愈伤组织愈伤组织三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：1、外植体的选取、外植体的选取不同植物的组织培养难度不同不同植物的组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难
3、度不同同一种植物的不同组织培养难度不同2、培养基的配制、培养基的配制(MS培养基培养基)大量元素：大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物：有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等生长素、细胞分裂素、赤霉素等未开花植物的茎上未开花植物的茎上部新萌生的侧枝部新萌生的侧枝调节渗透压调节渗透压3、不同植物激素使用顺序、不同植物激素使用顺序使用顺序使用顺序 实验结果实验结果 先生长素，先生长素，后细胞分裂素后细胞分裂素 有利于细胞分裂但不分化有
4、利于细胞分裂但不分化 先细胞分裂素，先细胞分裂素，后生长素后生长素 细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化 同时使用同时使用 分化频率提高分化频率提高 4、不同植物激素使用量、不同植物激素使用量生长素生长素/细胞分裂素比值细胞分裂素比值结果结果 比值高时比值高时 促根分化，抑芽形成促根分化，抑芽形成 比值低时比值低时 促芽分化，抑根形成促芽分化，抑根形成 比值适中比值适中 促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长 思考：思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素生长素生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素高高高高 利于根的分化利于根的分化利于根的分化
5、利于根的分化比例适中比例适中比例适中比例适中 利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成生长素生长素生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素低低低低 利于芽的分化利于芽的分化利于芽的分化利于芽的分化5、pH、温度、光照、温度、光照（菊花组培）（菊花组培）pH=5.8温度：温度：1822每日光照每日光照12h制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽冲洗冲洗酒精酒精无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌水冲洗至无菌水冲洗至少三次之上少三次之上配制各种母液配制各种母液配制培养基配
6、制培养基灭毒灭毒无菌操作无菌操作形态学上端朝上形态学上端朝上无菌箱，定期消毒无菌箱，定期消毒pH=5.8温度：温度：1822每日光照每日光照12h打开封口膜炼苗打开封口膜炼苗流水清洗培养基流水清洗培养基移植到蛭石或珍珠岩壮苗移植到蛭石或珍珠岩壮苗移植到土壤，移植到土壤，浇水、施肥浇水、施肥配制各种母液配制各种母液大量元素：大量元素：配制成配制成1010倍的母液，使用时再稀释倍的母液，使用时再稀释1010倍。倍。1 1、按照配方表中用量依次分别称取扩大按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的量：倍的量：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4.7H2O、CaCl2.2H2O2、所有药品称
7、取完毕后用蒸馏水逐个溶解，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，3、待全部溶解后，最后定容至待全部溶解后，最后定容至1000ml，4、转入转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，名称、放大倍数、配制日期，5、置于冰箱中保存备用。置于冰箱中保存备用。（根据（根据P84的的MS培养基来计算）培养基来计算）微量元素：微量元素：配制成配制成100倍的母液，使用时再稀释倍的母液，使用时再稀释100倍。倍。激素类、维生素类以及用量较小的有机物：激素类、维生素类以及用量较小的有机物：按按1mg/mL的质量浓度单独配制成母液。的质量浓度单独配制成
8、母液。1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对
9、照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格课题延伸（略）课题延伸（略）练习练习P361.答：植物组织培养所利用的答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物。用于植物组织培养的组织培养的培养基同样适合于某些微生物的培养基同样适合于某些微生物的生长生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化好，容易诱导脱分化和再分化。菊菊花花的的组组织织培培养养再分化再分化材料性质、营养物质、材料性质、营养物质、调节物质、环境条件调节物质、环境条件外植体的消毒外植体的消毒接种接种基本原理基本原理:细胞的全能性细胞的全能性基本过程基本过程:脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织影响因素：影响因素：操作流程：操作流程：配制配制MS固体培固体培养基养基培养培养移栽移栽栽培栽培