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1、65.020.20B 05DB1308承德市地方标准DB1308/T 316 2022香菇固体转液体菌种生产技术规程2022-10-31 发布2022-11-01 实施承德市市场监督管理局发 布DB1308/T 3162022I前言本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由承德市农业农村局归口。本文件起草单位：平泉市希才应用菌科技发展有限公司。本文件主要起草人：梁希才、张永峰、柳凤玉、刘海军、王丽波、刘绍苍、梁宏丽、张亚红、张晨光、孟凡飞、王彦玲、石建军、王帅。DB1308/T 3162022香菇固体转液体菌种生产技术规程1
2、范围本文件规定了香菇固体转液体菌种生产的前期准备、操作流程以及各步骤的操作方法指示。本文件适用于香菇固体转液体菌种生产过程管理。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。本文件没有规范性引用文件。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4前期准备4.1培养基小米谷粒、0.5%食品级甘油、葡萄糖粉、食品级酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。4.2仪器设备高压灭菌锅、超净工作台、液体发酵罐、生化培养箱、摇床、pH酸度计、比重计、打浆
3、机、液体接种枪、0.9立方塑料桶、50目网筛、750 ml塑料原种瓶、PDA平板培养基、无棉盖体、摇瓶、接种工具等。5操作流程谷粒选择谷粒浸泡滤水添加石膏装瓶灭菌接菌菌丝培养摇瓶后续养菌低温处理谷粒菌种悬浮液制备悬浮液过滤转罐扩大培养检验备用。6操作方法6.1谷粒选择选择带皮小米谷粒，籽粒饱满、无杂质、直径为0.1 cm0.15 cm，破碎率控制在2%以内。6.2谷粒浸泡使用塑料桶或箱作为容器，将谷粒倒入容器中，加水浸泡，水与谷粒的体积比为 2:1。环境温度 20DB1308/T 3162022左右，浸泡 4 h；环境温度 15左右，浸泡 10 h；环境温度 10左右，浸泡 24 h。以谷粒浸
4、透无白心为宜。6.3滤水浸泡完成后滤水，将谷粒置于 50 目筛子上进行滤水；以筛底没有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手为宜。6.4添加石膏按照谷粒干重的1%比例添加石膏，搅拌均匀。6.5装瓶选择 750 ml 塑料原种瓶，采用机械或手工装瓶，装料高度至瓶肩；装瓶后的重量在 1.3 kg1.4kg。使用无棉盖体扣盖封口，作为培养基。6.6灭菌装瓶后的培养基在4 h内进行灭菌，防止培养基变酸；采用高压灭菌方式灭菌，温度达到121时保持4 h，确保灭菌彻底。6.7接菌灭菌完成后，待培养基温度降到25左右时在超净工作台无菌的条件下进行接菌，每支20 mm200mm的斜面试管PDA培养基母种转接4瓶培养基。6
5、.8菌丝培养接菌完成后，在培养温度为22，空气相对湿度为60%，二氧化碳浓度不超过0.2%的条件下进行培养。6.9摇瓶当菌丝长到培养基1/4左右时进行摇瓶，使得长有菌丝部分的培养基与没长菌丝的培养基再次混合，以加快菌种的生长速度。6.10后续养菌待培养基中长满菌丝后，继续培养10 d12 d，令菌丝长入培养基内部，充分分解谷粒培养基，使谷粒充分软化，培养成为谷粒原种。该阶段的管理要加强通风换气，二氧化碳浓度不要高于0.15%。6.11低温处理将长好菌丝的谷粒菌种在4环境下放置6 h。6.12谷粒菌种悬浮液制备在无菌的条件下，使用打浆机对低温处理的谷粒菌种进行充分破碎，在破碎过程中加入温度为4的
6、0.5%的无菌甘油溶液，使破碎后的谷粒菌种变成悬浮浆液，其中谷粒菌种与甘油溶液的体积比为1:1。打浆机对谷粒菌种进行破碎时采用间歇模式，每旋转30 s停顿10 s，以旋转10次为限，防止打浆过程中温度升高。DB1308/T 31620226.13悬浮液过滤三角瓶消毒，安装消毒后的50目筛片，打浆结束后倒入三角瓶中过滤。6.14转罐扩大培养在无菌条件下，将过滤后的谷粒菌种悬浮液转入到盛装培养液的液体发酵罐中进行液体发酵培养，悬浮浆液与培养液的体积比为1:1200。发酵罐培养液成分按质量配比为：玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的无菌水。发酵罐内培养条件为温度25，罐内
7、压力0.01兆帕，培养6 d。6.15检验6.15.1取样在扩大培养即将结束时检验一次即可，即在培养 6 d 取样检验。6.15.2感官检查6.15.2.1看将样品静置桌上观察。一看菌液颜色和透明度；二看菌丝形态和大小；三看上清液与沉淀的比例中菌丝体占比达到80%以上；6.15.2.2旋手提样品瓶轻轻旋转一下，观其菌丝体的特点。醪液的粘稠度高，说明菌种性能好；稀薄表明菌球少，不宜使用。菌丝的悬浮力好，放置5 min不沉淀，表明菌种生长力强；反之，如果菌丝极易沉淀，说明菌丝已老化或死亡。6.15.2.3嗅在旋转样品后，打开瓶盖嗅气味。培养好的优质液体菌种，均具有芳香气味；染杂菌的培养液则散发出酸、甜、霉、臭等各种异味。6.15.3理化试验6.15.3.1菌丝干重量取液体菌种10 ml，用水分测试仪烘干至含水量18%，然后称量，菌丝干重2 g为合格。6.15.3.2液体粘稠度将液体菌种置于量筒中，使用比重计进行粘稠度测量，比重超过1.2为合格。6.15.3.3pH 值测定将液体菌种取出后，使用pH值酸度计进行精准测量，pH值在44.2范围值内为合格；6.15.3.4菌丝活力将液体菌种菌丝球转接与平板PDA培养基上，28恒温培养24 h，菌丝球正常萌发菌丝为合格菌种。DB1308/T 31620226.16备用液体菌种经检验合格可备用。_