《实验报告(α-氨基酸的测定及蛋白质生物降解).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验报告(α-氨基酸的测定及蛋白质生物降解).pdf（4页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！实验 一、实验课题：-氨基酸的测定及蛋白质生物降解 二、指导老师：吴嘉新 三、实验时间：2010 年 1 月 1619 日 四、实验地点：实验楼生化实验室 五、实验目的：蛋白质酶解技术是生物工程高新科技的一个重要领域，通过本实验，要完成实验全过程和-氨基氮的测定法来检测动手能力，使之在今后的社会实践，工业生产中能应用现代生物工程技术解决实际问题，开发更多新产品，更好的服务于社会。六、实验内容：1、牛肉蛋白质降
2、解氨基酸测定 2、鸡蛋清蛋白质降解氨基氮测定 3、明胶蛋白质降解氨基氮测定 七、实验原料：蛋白质的降解，原料选择的是以富含蛋白质较高的原料。目前使用鸡蛋、牛肉。八、主要仪器和药品：酸度计、（PH 试纸）、温度计、烧杯、吸管、容量瓶、三角瓶、电炉、水浴锅、电子称、滴定管、磁力搅拌器 九、试剂规格 实 际 名 称 类别 甲醛 盐酸 苯二甲酸氢钾 氢氧化钠 明胶 化学式 HCHO HCL KHC8H4O4 NaOH 规格 分析纯 工业用CP 分析纯AR 分析纯AR 分析纯AR 纯度W/W 36-38%36-38%96%96%36%产地 湖 北 大 学化工厂 上海化工厂 天津化工厂 河南开封试剂厂 上
3、海化学试剂厂 十、实验过程：、NaOH 配置和标定。、酱油-氨基氮测定实验 1、先用移液管吸取20ml 酱油，再用量筒加入60ml 蒸馏水，然后用标定的欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！NaOH 溶液进行滴定，滴定至PH 值接近8.2 时，记下消耗NaOHde 体积V1,然后再加入70ml 甲醛，继续滴定至PH 值接近9.2 时，记下消耗NaOH的体积V2。2、空白实验，用移液管吸取80ml 蒸馏水，用 NaOH 标准溶液滴定至PH 值接近 8.2，记下消耗NaOH 的体积V1,加入10ml 甲醛后，继续用NaOH 标准液滴定至PH
4、接近至9.2，记下此时消耗NaOH 标准液毫升数V2、不同底物溶度下的酶解 1、分别称取40g、80g、120g、160g 牛肉放入4 支烧杯中，加入蒸馏水200ml，然后加入45 度水浴锅保温。2、再分别量取40ml、80ml、120ml、160ml 蛋清放入4 支烧杯中，加蒸馏水至 200ml，然后放入45水浴锅保温。3、称取30g 左右木瓜蛋白酶和0.5gL-半胱氨酸，溶解到200ml，即所需酶液;向上述8 支烧杯中分别加入等量的酶液5ml，水解6 个小时，每隔1小时取样测其氨基酸的含量。、不同温度，同酶溶度，同底物溶度下的酶解 1、分别称取40g、40g、40g 牛肉放入3 只烧杯中，
5、加入蒸馏水至200ml，然后放入55、65、75水浴锅保温。2、再分别量取80ml、80ml、80ml 蛋清加入3 只烧杯中，加入蒸馏水至200ml，然后放入55、65、75水浴锅中保温。3、称取30g 左右木瓜蛋白酶和0.5gL-半胱氨酸，溶解到200ml，即所需酶液，向上述6 只烧杯中分别加入等量的此酶液5ml，水解6 个小时，每隔一小时取样测其氨基酸的含量。欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！问题讨论：1、蛋白质水解催化剂的选用 蛋白质在酸或碱或酶的作用下可以进行水解。牛肉的液化酶法降解蛋白质用酶做催化剂，木瓜蛋白酶亦如此，但是由于酶解产物会对酶起抑制作用，且在水解过程中酶常常会逐渐变性失活，还可以使酶蛋白质本省的氨基酸释放出来，因此采用L-半胱氨酸来作催化剂。2、本实验用甲醛法来测定氨基氮含量 由于氨基酸为酸性电解质，当用酸来滴定其羧基时，氨基酸的羧基与氨基相互作用生成两性离子，又由于氨基酸的氨基能与甲醛反应生成羧甲衍生物，形成氨基化合物，再用氢氧化钠滴定使用测得氨基氮的含量。