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1、资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值微生物新手培训教材（一）微生物新手培训教材（一）菌落总数菌落总数作者：麦兜伴你走资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值菌落总数所使用标准食品企业一般会用到的两个做菌落总数的标准。（当然还有其他标准）食品国家标准：GB 4789.2-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定生产用水：GB-T5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法微生物指标以这两个标准来说，它们的
2、检测方法是差不多，主要区别在于培养基的不同和样品的状态不同（食品中有固态和液态，生活应用水只有液态）。食品的是使用PCA，生产用水的使用NA。资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值培养基成分PCA（平板计数琼脂培养基）胰蛋白胨 5.0g酵母浸膏 2.5g葡萄糖 1.0g琼脂 15.0g蒸馏水 1000mL注：胰蛋白胨提供碳源和氮源；酵母浸粉提供B族维生素；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂。NA（营养琼脂）蛋白胨 10g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 14g（标准10g-20g）蒸馏水 1000mL注：蛋白胨
3、和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值检测方法：资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值操作注意细节细菌总数是比较常规的微生物检测项目，也是比较容易做的一个微生物检测方法，主要注意无菌操作，与稀释液均匀性，在出现空白出现菌落的时候需要去分析哪一步出现问题，人机料法。当然空白出现菌落的时候，那么该批次的菌落总数数据都作废处理。在制样和做样的
4、时候需要在百级的环境（百级的洁净工作台）下进行。稀释液的均匀性，这个会影响结果，刚开始的时候可能会造成同一梯度的两个结果相差有点远，这个是因为做的时候没有把稀释液均匀。如果前后两个梯度没有梯度性，那么就是在做稀释做不好。这个都是靠多做，技术才会提高的。（当然还有一种情况，样品是中添加了抑菌物质，这样没有梯度性。）资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值计数1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。2
5、选取菌落数在 30CFU300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU的平板记录具体菌落数,大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。（这（这个是很多新手会问的一个问题）个是很多新手会问的一个问题）4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数
6、，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值计数（标准上有）1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每 g(mL)样品中菌落总数结果。2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。4 若所有稀释度的平板菌落数均小于
7、30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。6 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 时,则以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值菌落总数的问题（是一些新手问的问题）1.有新人可能会拿着菌落总数的平板去问别人这是什么菌？有新人可能会拿着菌落总数的平板去问别人这是什么菌
8、？答：这是看不出来的，菌落总数只能检测出样品卫生情况，一个样品的细菌数量，不能验证出什么菌。这是一个不应该犯的误区。2.若所有稀若所有稀释释度的平板菌落数均不在度的平板菌落数均不在 30CFU300CFU 之之间间,其中一部分小于其中一部分小于 30CFU 或大于或大于300CFU 时时。就会有人不知道怎么去判定那个梯度更接近。就会有人不知道怎么去判定那个梯度更接近30-30-300300。举例：一个梯度：28/28；另梯度：305/305，那么那个数据更接近呢？两个方法（网友提供）：a、直接做差比较：28-30=-2，他们相差2；305-300=5，他们相差5。2比5要小，那么采取28相应的
9、梯度。b、恢复为同稀释度做差比较：把两个梯度换算成同一个梯度，一般把28换算成280。280-300=-20，相差20；305-300=5，相差5。20比5要大，那么采取305相应的梯度。（个人意见：我是更偏向于第二种，因为要在同一个梯度上做比较才能体现出数据的可靠性，同时我偏向采用前一个梯度的数字，那么这个数值可以减少一步步骤带来的误差，数据可能更加接近样品的情况）资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值3.有时候会出现这么一个情况，最低稀释梯度中一个平板出现1个菌落，另一个无菌落生长。那么结果怎么出呢？答：
10、（以固态为例子）在过去也有讨论过，有人认为报告写5，也有认为报告写10（比较两个平板均无菌落生长的时候报10）这个两个报告方法其实也是可以采用。（我是采用第一种）4.在做菌落总数的时候，有时候会样品和菌落分不清的（老前辈不会这样），那么如何区分两种物质呢？答：在培养基中添加TTC（一般2%浓度1mL加到400mL的培养基中，TTC的浓度不要过高，会有抑制作用）。TTC的原理：TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲月赞。那么生长的菌落会变成红色，这样就可以区分菌落与样品。还有一个方法：观察菌落的形态特征，老前辈们基本靠这个去区分的。资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的
11、，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值5、菌落总数计数包括霉菌吗？答：菌落总数的概念是这么规定的，食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度、培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。所以也包括在PCA上生长的霉菌和酵母等微生物。6、培养基温度不好控制？答：前提是培养基灭菌好了放在水浴锅内保温65摄氏度左右（具体需要根据室内的温度，冬天可以选择调高）。使用时一个同事在外面把培养基从水浴锅拿到传递窗，培养基表面喷酒精杀菌，然后开启传递窗的紫外灯5min（这一步是对培养基表面杀菌，减少对洁净房的污染同时也能让培养基进行降温）。里面
12、的同事5min之后拿起来放在手心人体不觉烫手，这样的温度最佳到平板。资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值7、有些朋友不理解菌落总数的单位CFU的意思。答：CFU的含义是形成菌落的菌落个数，不等于细菌个数。（比如两个相同的细菌靠得很近或贴在一起，那么经过培养这两个细菌将会形成一个菌落，此时就是2个细菌，1CFU）。菌落总数往往采用的是平板计数法，经过培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数，从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，于是以CFU/ml或CFU/g报告之。8、菌落超标的危害。答：食品的
13、菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，很容易患痢疾等肠道疾病，可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。但需要强调的是，菌落总数和致病菌有本质区别，菌落总数包括致病菌和有益菌，对人体有损害的主要是其中的致病菌，这些病菌会破坏肠道里正常的菌落环境，一部分可能在肠道被杀灭，一部分会留在身体里引起腹泻、损伤肝脏等身体器官，而有益菌包括酸奶中常被提起的乳酸菌等。但菌落总数超标也意味着致病菌超标的机会增大，增加危害人体健康的几率资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的
14、函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值9、培养后的培养基出现干裂情况。答：干裂是由于培养基里面的水份导致，所以当出现干裂情况，先要观察干裂平板的数量和位置。看是否是培养箱内部温度不稳定导致（一般平皿一栋可以放置八个，同时要注意每栋之间需要保留一点空隙让其通风）；排除仪器的原因之后，看是培养基否倒得太薄（初学者可以拿三角瓶装水进行练习）；还有其他原因，其实在出现干裂的情况下，结果是无效的（除非干裂情况不严重）。排查出问题所在，可以避免我们下次再犯错。10、培养基的配置。答：培养基的瓶子上（标准上）都会写着先煮热溶解再分装，那么是不是一定要煮热溶解呢？首先瓶子上的配置方法是直接配置一升的PCA，这里是必须要煮热溶解（防止不均匀，使得部分培养基不凝固）。其实配置培养基有两个方法：第一个：用一个大容器配置培养基，然后加水煮热溶解（注意搅拌，防止烧焦），带溶解完成之后进行分装（这里需要注意安全），再去灭菌。第二个方法就是使用500mL三角瓶（其他容器也可以）配置300ml的培养基，加水稍微溶解（此步不需要加热），再拿去灭菌。资金是运动的价值，资金的价值是随时间变化而变化的，是时间的函数，随时间的推移而增值，其增值的这部分资金就是原有资金的时间价值谢谢大家ps：如果对ppt有什么意见或者有什么需要帮助可以电话联系我