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1、程序文件的管理和维护制度3标本接收、贮存、处理标准操作程序5HIV抗体初筛检测过程标准操作程序7新仓ELISA （夹心法）试剂9万泰ELISA （夹心法）试剂11检测数据记录标准操作程序13结果解释与报告标准操作程序16室内质量控制标准程序18实验室清理与消毒标准操作程序22存档管理与追踪标准操作程序24HIV初筛实验室安全标准操作程序27保密标准操作程序29职业暴露处理标准操作程序30酶标仪使用与维护标准操作程序35洗板机使用与维护标准操作程序38实验室人员配置及培训程序40测量仪器设备校准程序42实验室试剂、耗材购买管理程序43普通冰箱使用、维护和保养标准操作程序45移液器使用和维护标准操
2、作程序47移液器校准操作程序48普通离心机使用和维护操作程序49垃圾处理记录表 -50程序文件的管理和维护制度1 .目的:HIV程序文件是指导HIV检测及相关环节的法规性文件,属内部受控文件,不得 擅自修改、涂改,不得遗失、外借翻印。为保持其现行有效和持续适应性，并确立因条件变 化进行修改的程序。2 .编写依据:全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2004 年版）3 .适应范围:HIV初筛实验室程序文件及标准化操作程序4 .内容：程序文件应包含下列内容:文件名称、编号、页号、总页数例:页眉编号文件名称程序文件的管理
3、和维护日期 年 月 日版本责任部门第页共页页底应有:编写人:XXX批准人:XXX生效日期：XX年XX月XX日。5 .编制及职责：程序文件由HIV实验室负责人主持编写、修订、审核并保持它的现行有效 性。由科主任批准和颁布实施，并负责解释。6 .发放与持有者责任：程序文件由科主任批准发放，发放与回收要登记签字，由HIV实验 室负责人保管,并组织全室工作人员认真学习,了解内容,熟悉其中各项规定,程序文件执 行情况纳入实验室目标管理，与奖惩挂钩。持有者调任时，要收回该程序文件。7 .修订:科室任何工作人员均可提出对程序文件的修改建议,文件修改须经有关人员讨论, HIV实验室负责人根据条件变化提出是否修
4、改的决定,如作小的修改则可在修改页上进行, 修改文件经科主任审核批准后,并填写入程序文件修改页。如果文件须作重大修改,HIV实 验室负责人可进行改版。新版程序文件经科主任批准后生效,收回旧版，并予以销毁,登记 签字后发出新版，保证工作现场只有唯一的,最新的使用版本。标本接收、贮存、处理标准操作程序编号:HIV/SOP/001!范围本章规定了用于艾滋病病毒（HIV）检测的血清、血浆和全血样品的采集和处理方法,适 用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、CD4+/CD8+淋巴细胞测定和HIV分离培养。2规范性引用文件Guidelines for Using HIV Testing Technolo
5、gies in Surveillance WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16 UNAIDS/01.22E ISBN 9713-92-063-7.3操作步骤3.!样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液,包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为 测试样品。本室主要进行HIV抗体的酶标检测，采用血清标本。常用的血液样品的采集和 处理方法如下:3.1.1 血清样品采集和处理3.1.1.1 用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置2h,待血 液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min,分离出血清备用。3.1.3采集样品注意事项3.1.3.1 采集样
6、品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。3.1.3.2 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液; 直接接触H1V感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作,应戴双层手套。3.2 接收标本3.2.1 标本采集:生化管抽取静脉血。.5ml以上3.2.2 标本性状:无溶血、细菌污染、脂血及黄疸，严重溶血或污染的标本应重取。3.2.3 检查标签上姓名、床号、科室字迹是否清晰,是否与H1V抗体检测单一致,如不一致 必须与临床科联系,并予改正。如标本均符合以上要求可接收签名。3.2.4 送确认的标本要求重新抽取新鲜标本，分离出血清后及时送检。如要
7、做病毒载量和淋 巴细胞亚群，抽取EDTA抗凝血10毫升，新鲜标本及时送检。3.3 样品的保存3.3.1 用于抗体检测的血清或血浆样品,应存放于20C以下,短期（1周）内进行检测的 样品可存放于立式冰箱专用的试管架上2-8。如标本要保留一个月以上,必须将血清样本 冻存于80C以下。3.3.2 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于20以下，进行病毒RNA检测的 样品如需保存3个月以上应置于80。3.3.3 用于CD4+/CD8.淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检 测。3.4 废弃标本处理对于检测过的样本要求放在专用4冰箱保存一周,以便核查。一周以后要丢弃的标本
8、倒入专用容器中，加入5000mg/L次氯酸钠浸泡，然后送医院统医疗垃圾处理点处理。 对于抗体初筛阳性或可疑标本分离出血清冻存，以便送确认，残余的标本也按上法预处理 后送医院统医疗垃圾处理点处理。HIV抗体初筛检测过程标准操作程序编号:HIV/SOP/002!范围本章规定了 HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略,适用于本院针对 临床患者的HIV抗体初筛实验室,不适合作为献血员检测。可作为对HIV感染者/AIDS病 人的诊断、报告和处理的实验室依据。2规范性引用文件Revised recommendations for the selection and use of HIV ant
9、ibody tests.WHO/UNAIDS Revised version 2001.实验室生物安全通用要求(GB 19489-2004)。3 HIV抗体检测的目的和要点3.1 HIV抗体检测的目的3.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。3.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群H1V感染率及其变化趋势而进行的检测,检 测的人群包括各类髙危人群和一般人群。3.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体H1V感染状况而进行的检测,包括临床检测和 自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。3.2 HIV抗体检测的要点3.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告,只能报告“ H1
10、V抗体待复查”3.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。3.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。3.2.4 注意防止样品间交叉污染。4检测4.1 试剂:所用试剂应为国家批准注册,并经中国药品生物制品检定所“批批检”合格,且 在有效期内的一流国产或是进试剂检测。本室采用厦门新创和北京万泰两家的试剂。4.2 操作:接收标本后用双抗原夹心酶联免疫法H1VEL1SA （新创）试剂或双抗原夹心法 HIV ELISA （万泰）试剂进行检测,详见（H1V/SOP/003）和（HIV/SOP/004）4.3 模式:要求用先用个厂家试剂进行初筛，有可疑标本再用两个厂家试剂双孔复查,具 体过程见下面图解:5
11、报告5.1 阴性报告：经种试剂检测为阴性反应，报告:H1V抗体阴性。5.2 阳性报告，对于H1V抗体初筛阳性或可疑阳性的标本不能够直接发阳性报告单，必须报 告为：H1V抗体待复查，且同时送确认，军队患者送全军H1V确认实验室，地方患者送 广西壮族自治区疾控中心确认实验室。地方患者不愿送确认的定期送到桂林市疾控中心进行复核。新创ELISA （夹心法）试剂编号:HIV/SOP/0031 设备和材料（详见附件）1 .!英科新创（厦门）科技有限公司方法:人类免疫缺陷病毒抗体（双抗原夹心酶联免疫法）原理:本试剂盒采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的HIV1/2型抗体,采用多 种H1V-I和HIV
12、-2型特异性抗原制作预包被板及酶结合物。当被检样本中存在HIV抗体时, 在反应过程中形成“固相HIV抗原一HIV抗体酶标记HIV抗原”的免疫复合物,加入底 物后形成显色反应。适应范围:人类免疫缺陷病毒（HIV1/2型）抗体辅助检查及献血员筛查。2 工作流程:2.1 开紫外线灯照射30分钟,开空调排出臭氧,并平衡温度至室温。2.2 标本的准备:将被检标本自冰箱中取出,至少平衡30分钟,如为刚抽取的血标本,先 酉37水浴箱中30分钟，待自然沉降或直接离心析出血清。如为冻存血清标本，放37水浴 箱复溶，检查水浴箱温度并记录。2.3 试剂盒的准备:将试剂盒自冰箱中取出，室温至少平衡30分钟。检查试剂盒
13、的批号、 效期和防伪标记，过期试剂不得使用。2.4 仔细阅读说明书，根据待检标本数和试剂盒要求的对照数设计加样的位置和顺序，做好 加样蓝图。注意预留外部对照的位置,以备做质控图时所需。2.5 洗液配制:浓缩液如有结晶，应置于37复溶至晶体消失并摇匀，将浓缩液用蒸储水 或去离子水按1： 19稀释。2.6 编号:取所需数微孔条固定于支架，按顺序编号。标本上编号与申请单上编号一致2.7 加样:设计加样蓝图,按顺序分别在相应孔中加入50 U1待测样品及阳、阴性对照血清。2.8 温育:置37温育30分钟。2.9 洗涤:用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干，（每次保持3060秒）浸泡。所有废液要 置于含消毒
14、剂的废液瓶中。洗板机洗，共洗涤5次,每次浸泡30秒，洗涤液要注满每孔 （约300U1/孔），最后一次吸出,在吸水纸上拍打,除去残留液体。2.10 加酶:分别在每孔中加酶标记抗原100U1。2.11 温育:置37温育30分钟。2.12 洗涤:用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干,（每次保持3060秒）浸泡。2.13 显色:每孔加底物A、B各50U1,轻拍混匀，37静置20分钟。2.14 终止:每孔加入终止液50 U1,混匀。2.15 测定;用酶标仪单波长450nm或双波长450/ 630nm测定OD值。2.16 计算结果：每块板分开计算。3 实验的有效性:3.1 PCxNCx值0.60以上且NCx
15、小于0.10方可认为本次实验有效。如实验结果不符上述要求，需重复检测。绘制质控图,外部对照还应满足外部对照未失控,否则要重复操作。3.2 临界值计算CutoffValue=0.10+NCx （若 NCx 均小于 0.05,以 0.05 计）3.3 结果判定标本OD值CutoffValue为阴性标本OD值CutoffValue为阳性阳性者取双孔复试,复试阳性者送HIV确认室进行免疫印迹法确认3.4 填写“ HIV抗体检测原始实验记录”，“仪器使用登记表”，“质控登记表”4 报告检测结果为阴性报告“H1V抗体阴性”，如检测为可疑阳性的标本应送区疾病预防控制中心 或全军HIV确认室确认,并出具“HI
16、V抗体待复查”的报告。5 完成实验5 .!未用完的试剂盒放入封口袋中封好,放回冰箱。5.2 关闭酶标仪和洗板机。5.3 处理各种废物,清洁和消毒工作区。5.4 保存标本:阳性或可疑阳性的标本要离心吸取血清，并分装数管冻存，以备复检或送检。6 注意事项6.2 检查水浴箱的温度（37）,移液器的准确性。6.3 加标本和质控时要注意，冻融或长期存放的标本加样前应摇匀,有絮状沉淀时应离心取 上清。6.4 每次试验应包括空白，2孔阴性对照，2孔阳性对照。空白对照只加底物和终止液。所有 使用过的吸头要放入盛有消毒剂的容器内。6.5 未用完的板条应置于有干燥剂的密封袋中。6.6 显色后注意避光。加样要求准确
17、，加酶、A液、B液、终止液时尽量用移液器加。6.7 读数（程序见 HIV/SOP/006）终止显色后在30分钟内读数，酶标仪用检测波长450nm,参考波长为630nm。7 附件清单7.2 新创HIV抗体双抗原夹心法检测试剂盒说明书7.3 HIV抗体ELISA检测记录表万泰EL1SA （夹心法）试剂编号:HIV/SOP/0041 设备和材料（详见附件）1.1 北京万泰生物药业股份有限公司人类免疫缺陷病毒抗体（双抗原夹心酶联免疫法）检测原理:本试剂盒应用双抗原夹心酶联免疫法原理ELISA检测血清或血浆样品中人类 免疫缺陷病毒HIV （1+2型）抗体,预包被高度基因重组HIV （1+2型）抗原，可与
18、样品 中抗HIV抗体反应，加入HRP标记HIV （1+2型）抗原，然后用TMB底物作用显色。 通过酶标仪检测吸光度（A值）从而判定样品中HIV抗体的存在与否。适应范围：人类免疫缺陷病毒（型）抗体辅助检查及献血员筛查。2 工作流程:2.1 用去离子水或蒸储水20倍稀释浓缩洗涤液。2.2 将所需数量的条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和 阴性对照孔（每次试验必须设空白对照1孔,阳性对照2孔,阴性对照3孔）。在样品孔中 加100111测样品，空白孔不加任何液体，阴性阳性对照孔分别加入100111阳性对照血清， 轻拍混匀。2.3 置37水浴温育30分钟。2.4 将孔内液体甩
19、干,置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍,扣干,（注:洗涤时各孔要加满洗 液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有40秒的浸泡时间）。2.5 每孔加入100 N1酶标记物空白孔除外，轻拍混匀。2.6 置37水浴温育30分钟。2 .?将孔内液体甩干,置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍,扣干,（注:洗涤时各孔要加满洗 液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有40秒的浸泡时间）。2.8 每孔加显色剂A50U1和显色剂B50UL轻拍混匀置37避光温育15分钟。2.9 每孔加入终止液50 1终止显色反应。2.10 用酶标仪单波长450nm （需设空白对照并以空白对照孔调零）或双波长450/630nm测定
20、各孔A值。2.11 完成实验2.11.1 未用完的试剂盒放回冰箱。2.11.2 关闭酶标仪和洗板机。2.11.3 处理各种废物,清洁和消毒工作区。2.11.4 保存标本:阳性或可疑阳性的标本要离心吸取血清,并分装数管冻存，以备复检或送检。3 结果判定:3.8 临界值（cutoff） =0.12+阴性对照的A值3.9 样品的A值cutoff值者为H1V抗体反应阳性3.10 样品的A值（cutoff值者为HIV抗体反应阴性3.11 正常时,阴性对照A值应0.10阳性对照0.803.12 初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试,按全国HIV检测管理规范的要求须将血样 或重新采血送HIV确认实验室做确认
21、试验。4 记录与报告4.8 填写“HIV抗体检测原始实验记录”，“仪器使用登记表”，“质控登记表”4.9 报告检测结果为阴性报告HIV抗体阴性”，如检测为可疑阳性的标本应送区疾病预防控制中 心或全军HIV确认室确认，并出具“HIV抗体待复查”的报告。5 注意事项5.8 检查水浴箱的温度（3C）,移液器的准确性。5.9 操作按照试剂盒说明书规定的操作步骤进行检测,试剂盒的说明书要统集中保管。5.10 加标本和质控时要注意，冻融或长期存放的标本加样前应摇匀，有絮状沉淀时应离心取 上清。5.11 每次试验应包括2孔空白，2孔阴性对照,3孔阳性对照，并加外部对照。空白对照只 加底物和终止液。所有使用过
22、的吸头要放入盛有消毒剂的容器内。5.12 未用完的板条应置于有干燥剂的密封袋中。5.13 显色每孔加显色A液、B液各50国,在37环境下温育!5分钟后,加终止剂50禺终止显 色。注意避光。加样要求准确，加酶、A液、B液、终止液时尽量用移液器加。5.14 读数（程序见 HIV/SOP/006）终止显色后在30分钟内读数,酶标仪用检测波长450nm,参考波长为630nm。6 附件清单6.!万泰H1V双抗原夹心法检测试剂盒说明书6.2 H1V抗体检测原始记录表检测数据记录标准操作程序HIV/SOP/0051 范围为了规范HIV的原始数据记录，为报告提供准确可靠的数据，同时方便溯源，为医疗 纠纷提供法
23、律依据，编写了该文件,适用于本院面向临床患者的HIV抗体初筛实验室,不 适合于献血员检测。2 规范性引用文件全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/A1DS （2004 年版）3 记录过程H1V检测是项关注程度很高的工作，为了对患者负责，同时也是对工作人员自我的保护, 所有检测数据必须完整记录,及时归档,统管理，长期保存。记录要完整、及时、详细、 规范、清晰。3.1 仪器打印结果仪器打印结果是最根本、最原始的数据,打印的OD值必须与加样蓝图一致，当追溯结 果时必须可以清晰分辨，如提供受检者信息，必须能够比较容易地找到相应的0D值。
24、要求 附在原始记录中,和原始记录并保存。3.2 原始记录原始记录严格按专用HIV抗体初筛原始记录表填写（见下表）。下表是本室现在启 用的记录表。要求填写完整、准确、及时、清晰。必须由操作人员填写,并签名。HIV抗体筛査检测原始记录表试剂名称生产厂家 批号 有效期仪器编号:酶标仪CB371洗板机KHBSF36W加样器応）水浴箱余佳 _X66216 40-200h18002 型实验室温度水浴箱温度:,试验起止时间 时 分至时一分加样蓝图：123456789101112ABCDEFGH第一步:加样品量M 1,孵育温度,孵育时间 min,洗板次,浸泡时间 S第二步:加酶标记物量N 1,孵育温度,孵育时
25、间 min,洗板次,浸泡时间 So第三步：加显色剂A m,加显色剂B m,显色温度,显色时间min,加终止剂 N 1.第四步：检测波长450 nm,参比波长630nm.0临界值计算公式:Cutoffvalue=0.12+阴性寸照均值临界值内部对照是否符合要求：是 否外部对照是否符合要求:是否试验是否成立：是否检测人审核人检测日期:一年一月一日4 结果登记本结果登记本与仪器打印结果、原始记录归档在起保存，方便追溯。登记本中要体现 受检者信息、检测号、结果、检测者、检测日期等信息。目前本室用实验室管理系统统打 印结果登记本,打印完后要与仪器打印结果及原始记录中的加样蓝图进行核对,看是否一致, 看打
26、印是否清晰,因为要保存10年以上，所以要求经常更换打印机色带。5 质控数据的记录见“质量控制标准操作程序”。6 其它数据除了以上数据外,还要记录酶标仪使用登记本、洗板机使用登记本（见附件）。这也是 质量保证、结果可追溯的措施之一。因而与以上要求一样,要完整、详细、准确地记录,一 张表填满后及时归档。结果解释与报告标准操作程序编号:HIV/SOP/0061范围本章规定了 HIV抗体初筛实验中各种结果的解释,适用于临床患者及自愿检测者结果 的报告与解释。2规范性引用文件全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of H1V/A1DS (2(X)4 年
27、版)3结果的报告3.1 初筛阴性的标本,直接报告“HIV抗体阴性”。3.2 初筛阳性或可疑的标本要双孔、双试剂复查,如为阴性,报告“ HIV抗体阴性”,如为阳 性或阴阳,报告“H1V抗体待复查”,详见“H1V抗体筛查报告”样表(附件),并 填写送检表,即“ HIV抗体复检化验单”。3.3 HIV抗体确认反馈结果如为阳性,将原始单发给患者本人，如患者无行为能力交给监护 人，保留复印件存档。3.4 HIV抗体确认反馈结果如为阴性，将原始单发给患者本人或监护人,保留复印件存档。3.5 HIV抗体确认反馈结果如为不确定,将原始单发给患者本人或监护人,保留复印件存档。并且嘱患者三个月后再做抗体确认实验,
28、六个月后再做一次。3.6 所有HIV的阳性或不确定报告必须保密。4结果的解释4.1 做HIV的解释工作必须认真、热情、仔细,必须由取得HIV相关资格证的人员做解释, 其它工作人员不能随便进行解释。4.2 对于HIV抗体检测初筛阴性的受检者,如系近期有过高危行为,应嘱期定期复查,以避 免窗口期所致漏检。4.3 对于HIV抗体检测阳性者,要进行确认检测,同时要对受检者说明,筛查结果不是确诊, 不能说该受检者已感染了 HIV,必须等确认结果才能定论。在此之前，只能给出可能性的答 复,不能肯定,且不要给受检者太多暗示。4.4 对于确认阳性患者,必须先告知患者本人，如无行为能力的要告知患者监护人。并对本
29、 人说明，必须要将结果告知其性伴侣。要向感染者宣讲艾滋病的相关知识、防止传给性 伴侣的方法、措施。被感染者怕被别人歧视，因而要让其知道医务部门的各个环节都会为 其做好保密。要给患者宣讲相关的法律法规,明确其享有的义务和必须履行责任。同时对 于情绪激动的患者要对其进行心理安慰,要让患者明白,艾滋病不是个不治之症,是可 防可控的疾病，只是目前尚不能完全将病毒从体内去除。进行积极的治疗,增强生活信心， 可以提高生活质量，有效地控制艾滋病的发展。鼓励其投入到防艾控艾的工作当中去。4.5 对于确认结果不确定的受检者，更要注意解释的技巧与策略。要求随访，每3个月复检 一次,连续两次，必要时可做P24抗原检
30、测和核酸检测。尽量消除其等待过程中的不安与 焦虑，对其进行心理安慰，如有心理障碍的要嘱其进行心理咨询。4.6 对于感染HIV的孕妇要立即与本人谈话，尽量防止母婴传播。要宣读国家对受染孕妇的 政策，讲解相关知识及防止母婴传播的各种方法与措施。并与其经治医生交流，共同制订阻 断措施。室内质量控制标准程序编号:HIV/SOP/0071范围本章规定了 HIV抗体初筛实验中室内质量控制的方法、要求、规定,为了保证实验数 据的准确性。2规范性引用文件全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2004 年版）3、室内质控操作流程室内质
31、控是判定当次结果是否可以被采用的指标之一。由实验室工作人员采用系列 的方法,连续的评价本实验室工作的可靠程度。目的在于监测、控制常规工作的精密度,并 检测其准确度的改变,确保实验室测定结果趋于稳定。从而提高本室常规工作中批间、批内 标本检测的一致性。1、质控前的准备样品检测的质量控制包括实验室工作的全过程，单靠份质控样品,分析质控样品的结 果达不到质量保证的预期效果,也不可能做好室内质控图。应编制质量手册,保证样本采集、 运送、记录、检测方法、试剂、仪器、人员、操作技术、计算、报告填写、实验室环境等步 骤和环节都处于受控状态。否则,一旦出现质控物失控,无法分析原因。2、质控步骤和方法2.!质控
32、物的获取内部对照:即阳性阴性对照,由试剂盒提供外部对照:自选的强、中、弱阳性和阴性外部对照,若只取份外部对照，则应选弱阳性 样品。其制备可从每次检测的样本中选取。也可用阳性对照进行稀释（用正常人的血清做 稀释液）筛选,保证其OD值稍高于临界值或S/OD在23之间。2.2质控方法2.2.1 最佳条件下的已知质控物变异的测定（OCV）:在本实验室最佳条件下对同一质控物每 天做一次测定,共测定20次，求其平均值（X）和标准差（S）以X2S做质控图。借 此可了解本实验室最佳条件下的工作质量。2.2.2 常规条件下已知值质控物变异的测定（RCVK）将上述质控物,由常规技术人员在常规 条件下,随常规检测标
33、本一起每天测定一次,连续测定20次。计算X与S值,X2S 作质控图。一般认为RCVK值不应大于OCV的S值的两倍，其CV值不大于20%。OCV 是最佳条件的变异,其均值与RCVK均值之比,能说明该实验室的相对准确,正常比值 1RCVK2比值左移,说明0CV不是最佳条件结果，比值右移，说明常规工作条件太差,两种情况都应寻找原因,重新鉴定。最理想的比值是略大于1或近于1。2.2.3 常规条件下未知值质控物的变异的测定（RCVU）:有时为了避免主观性，再做RCVU 测定。测定步骤同RCVK,但检测者不知质控物的定值，或是在检测者不知哪份是质 控物的条件下进行常规检测,以排除检测的主观性。2.5失控的
34、判定，如质控样品S/OD值出现以下情况即为失控:2.5.1 一次超过3S2.5.2 连续两次超出2S2.5.3 连续35次处于一侧2S内2.5.4 连续57次偏向横轴的侧,均为失控。3.室内质控的重点3.1 试剂首先应成立，满足试剂盒要求。即只有阴、阳性对照测定结果以及CUT-OFF值判 定公式满足试剂盒要求时，该实验结果可以发出报告。3.2 在试剂成立和基本合格的基础上,着重整体分析根据质控图分析每时期段、不同试剂 和批号、不同操作者、不同仪器、不同方法等的变异趋势，寻找有无问题发生和发生了什 么问题，井提出解决问题的措施和方法。4质控图的制作与分析4.1 质控图的制作 经过以上步骤后，可以
35、作室内质控图。一般根据RCVK的X和S作质 控框架图。4.1.1 按测出的20次质控物的OD值计算出S与X值4.1.2 以X2S为基础画出质控图的框架（见下图）4.1.3 框架完成后,即从第21次起把每次常规检测的质控物的测定值,在质控框架图上相应 的维护子上点个点。并且在多日后把多次测定的点用直线连起来就成为张完整的质控 图,当没有更换另批号的试剂盒和另批号的质控物时,该质控图可以连续做下去。4.2 质控图的观察 必须每天做质控物测定,严格认真的填画质控图,观察检测质量的变化。 一般公认2S是允许误差的限度。一般认为质控物测定值一次超出2S就做为“告警”； 一次超出3S,连续两次超出2S之内
36、,连续35次处于侧2S内,连续5?次偏向横轴 的侧，均为失控。当质控工作中出现失控时,应找出原因纠正后重新检测。5失控原因分析及对策失控信号一旦出现,即意味着同批标本的检测结果可能作废。此时，首先要尽量查明失 控原因，并随即挑选定比例（5 10%）的标本进行重新测定。而后根据既定标准判断 先前的结果是否可接受。判断为真失控的情况,应重做质控并当结果在控后，再对相 应的失控标本进行重新测定。当判断为假失控时，先前的结果可以发出不必重做。5.1 失控情况的处理操作者发现质控数据违背了控制原则,应填写失控报告单,并上交实验室主管。由实验 室主管决定是否发出相关标本的检测报告。5.2 失控原因分析方法
37、5.2.1 立即测定同一质控品。每步都认真仔细的操作,以便查明是否人为误差或偶然误差。 如重测结果仍不在允许范围，则应进行下步操作5.2.2 新开一瓶质控品，重测失控项目。如果仍不正常则应进行下步操作5.2.3 新开批质控品，重测失控项目。当此结果在控时，说明前批质控品有问题,检查 他们的有效期和贮存环境，查明原因。如果仍不在允许范围,则应进行下步操作5.2.4 检查仪器状态,并进行维护，同时更换试剂，重测失控项目。如结果仍不在允许范围, 则应进行下步操作。5.2.5 重新校准，用新的校准品和校准仪器,排除校准液的原因。5.2.6 请专家帮助,如果前五步都未能得到在控结果，则可能是仪器或试剂的
38、原因，只有请 求技术支援。4.3 “即刻法”质控“即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后,即可对第3次检验结 果进行质控。具体计算方法如下:4.3.1 将质控血清的测定值从小到大排列:XI，X2，XX。（XI为最小值，Xn为最大值）。4.3.2 计算X和So4.3.3 计算SI上限值和SI卜限假。SI上限:X最大值-最_x-X最小值S!下限s(1) 计算。(2) 状态。(3)4.3.4 将Si g S!卜限与SI值表(表7)中的数字比较。nn3sn2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.37
39、61.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56表7 SI值表当SI和SI卜限n2s时表示处于控制范围内,可以继续测定。继续重复以上各项当SI卜曲和SI限有一值处于陶 n3s值之间时说明该值在2s3s范围,处于“告警”当SI时和SI限有一值n3s值时说明该值已在3s范围之外,属“失控”。数值处于“告警”和“失控，状态应舍去,需重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的 这次数值,其它测定值仍可继续使用。实验室
40、清理与消毒标准操作程序编号：HIV/SOP/0081范围本章规定了 HIV抗体初筛实验中室中各种清理与消毒规定、标准、措施。为了保护操作者,对HIV污染物进行无害化处理,以防止污染物感染其它人。2规范性引用文件全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2004 年版）3 HIV常用的消毒方法3.1 实验室的清理与消毒是个人防护、防止暴露的重要措施之一,要求严格按全国艾滋 病检测技术规范进行。3.2 从艾滋病实验室出来的所有废弃物,包括不再需要的样品,培养物和其它物品,均应 视为感染性废弃物,应置于专用的密封防漏容器中,容
41、器中加入5000mg/L次氯酸钠,进行 消毒处理30分钟后，安全运至医院统的医疗垃圾处理点进行进步处理。高压蒸汽消毒，121C,保持1520分钟。干燥空气烘箱消毒,140C,保持23小时。化学消毒,常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠、含有效氯20005000mg/L）、 75%乙醇、2%戊二醛，保持30分钟。废弃物缸:5000mg/L次氯酸钠。工作台面:2000mg/L次氯酸钠。仪器表面;75%乙醇。冰箱、水浴箱:75%乙醇。3.3 工作台面、地面、仪器表面每天都要进行消毒处理,冰箱、水浴箱等定期进行消毒,清 洗后要干燥20分钟以上。实验室环境每天操作前和操作后都要用紫外线照射30分钟以上
42、。 紫外线强度要经常监测。3.4 每次穿过的污染的防护服应及时放入污衣袋中，待消毒后方可洗涤或废弃。3.5 操作中有标本、检测试剂外溅时应及时消毒。对大量溅出的高浓度传染物在清洁之前应 先用5000mg/L有效氯清洗消毒剂溶液浸泡,然后戴上手套擦挣。3.6 加样用的吸头用过后直接打入防漏容器中,容器中加入5000mg/L次氯酸钠,消毒剂的 量要足够浸入所有吸头。至少浸泡半小时以上，然后作为医疗垃圾送医院统处理。3.7 锐器医疗垃圾放入专用的一次性锐器桶中,锐器桶中加入5000mg/L次氯酸钠,浸泡30分钟以上,丢弃时连锐器桶一起安全运送到医院医疗垃圾处理点。3.8 其它医疗垃圾:垃圾桶上要套上
43、专用医疗垃圾袋（黄色）,垃圾丢弃前30分钟,向袋中 倒入5000mg/L次氯酸钠,然后连垃圾袋起送医疗垃圾处理站处理。存档管理与追踪标准操作程序编号:HIV/SOP/009!范围本章规定了 HIV抗体初筛实验中各种档案的归档与档案管理方法,目的是为了规范化 管理,方便数据调取查询，同时为了保密，完整的档案管理也是自我保护的重要环节，为各 种医疗事故提供客观依据。2规范性引用文件 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of H1V/A1DS （2004 年版）3存档程序存档是追踪与处理的关键步骤,如果没有完整的数据,没有规范的档案,追踪与处理只
44、 是纸空文。HIV实验室建立了专门的档案柜,建立了 12个档案盒,每个档案盒存不同的内容,档 案盒暂存短期文件,当积累较多资料后要装订成册,做封面,标明日期及档案号，分门别类 封存,放入资料室专用资料柜内,资料柜外面要贴上标签，标明类别。档案盒外面要标记清楚,含如下内容:资料名称、起止日期。目前所建档案盒有:室内 质量控制档案、原始记录档案、试剂批批检报告档案、HIV初筛阳性送检档案、H1V抗体 确认档案、HIV政策与法规档案、职业暴露登记档案、标准操作程序档案、仪器使用登记档 案、仪器设备校准档案、HIV培训与认证档案、室间质评档案。原始实验记录归档:每次的原始实验记录填写完后与结果登记表、
45、仪器打印OD值粘贴 在起，按时间顺序放入档案盒中，积累一个月后做个封面，标记时间，名称等内容，装 订成册。暂存于HIV实验室档案柜中,一年后入资料室档案管理。保存10年以上。其余文件归档与上面程序样。所有文件归档后由专人管理，必须保证档案的完整、齐全，入档与管理要规范化、正规 化、H1V档案有特殊性,每个环节都要注意保密。档案的查询、追溯都必须由专人进行, 档案室也要有专人管理，非本室人员不能随意进出。4 档案管理程序调档申请：如要对数据进行追踪,先向负责人申请,经审查同意后才能接触资料原件。调档过程：非HIV管理人员追踪数据必须经由HIV资料管理员，防止泄秘、方便查找、 避免弄乱资料。追踪人向本室HIV资料管理员提交要追踪的受检者信息，如：姓名、ID号、 大约检测日期等信息，越详细越好，以方便管理员快速调出资料。2005年以前未启用实验 室信息管理系统,追踪住院病人结果时可以查询住院时间，估计大概检测时间段，然后按年 月调出部分资料进行查阅。如非住院受检者要求提供大概检测时间，尽量缩小时间范围，以