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1、艾滋病筛查实验室标准操作程序（SOP ）编号： LZFBYHIV 实验室名称：莱州市妇幼保健院艾滋病筛查实验室实验室编码： NO 355 实施日期： 2014 年 3 月 20 日名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 31 页 - - - - - - - - - 1 前言：本标准操作程序（ SOP ）根据全国艾滋病检测技术规范2004的要求，由莱州市艾滋病筛查实验室全体人员参与编写。主要起草人：姜子明王永彬，审核人：綦洪敏。根据全国艾滋病检测技术规范2004的要
2、求，实验室编写了相关的SOP文件，以适应HIV 抗体检测的相关需要。为全社会的艾滋病检测工作提供科学的、准确的检测服务。一些相关的制度及规范，可以为实验提供准确的结果并为实验人员及环境提供良好的保护作用。本标准操作程序（ SOP ）覆盖了实验室全部工作内容，主要包含以下内容：一、样品的采集、运输、接收、登记、保存、处理（编号： LZFBYHIV-01 ）二、检测方法和步骤（ 编号： LZFBYHIV-02 ）三、仪器的使用、维护、校准（编号：LZFBYHIV-03 ）四、实验中的质量控制（ 编号： LZFBYHIV-04 ）五、结果解释与报告（ 编号： LZFBYHIV-05 ）六、保密程序（
3、 编号： LZFBYHIV-06 ）七、检测数据的记录与保存（编号： LZFBYHIV-07 ）八、追踪与处理（ 编号： LZFBYHIV-08 ）九、实验室的清理与消毒（ 编号： LZFBYHIV-09 ）十、实验室的安全防护（ 编号： LZFBYHIV-10 ）本标准操作程序（ SOP ）至编写完成并审核通过之日起开始实施，每年由实验室主管负责组织岗位人员进行修订。所有岗位人员要在所从事工作的SOP文件上签名并认真阅读掌握相关内容。审核人（签字）：_ 审核日期年月日名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理
4、 - - - - - - - 第 2 页，共 31 页 - - - - - - - - - 2 目录一、样品的采集、运输、接收、登记、保存、处理,4 1 样品接收、登记、运输及处理办法,4 2 样品采集 ,5 二、检测方法和骤 ,1 检测程序 ,2 艾滋病抗体初筛检测常用的方法,8 3 万泰试剂检测方法和步骤 ,9 三、 仪器的使用、维护、校准 ,10 1 仪器使用制度 ,10 2 仪器设备的管理、使用、维修、报废制度,11 3 仪器的使用、维护及校准方法与记录表样,12 4 仪器档案 ,14 四、 实验中的质量控制 ,15 1 质控血清的制备和保存 , 15 2 质控图的建立与应用 , 16
5、 五、 结果解释与报告 ,19 1 HIV抗体筛查报告 ,19 2 HIV抗体阳性送检单 ,19 3 自愿咨询检测报告单 ,19 六、 保密程序 ,20 七、 检测数据的记录与保存 ,21 1 原始记录 ,21 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 31 页 - - - - - - - - - 3 2 结果登记表样 ,21 3 数据记录的保存 ,21 八、追踪与处理 ,22 九、 实验室的清理与消毒 ,23 1 HIV实验室消毒方法 ,23 2 HIV实验室消毒
6、规范 ,23 3 HIV实验室废弃物处理规范 ,24 4 HIV实验室废弃物处理登记表样,25 十、 实验室的安全防护 ,26 1 实验室安全制度 , 26 2 实验室分区 , 27 3 实验人员安全防护 , 27 4 标本的安全防护 , 29 十一、样品编码的操作程序,30 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 31 页 - - - - - - - - - 4 SOP 文件一、样品的接收、登记、处理编号：LZFBYHIV-01 编写姜子明王永彬编写日期2014
7、-03-10 审核綦洪敏修订日期2014-03-20 目的掌握样品接收、运送及处理的正确方法应用范围样品接收、运送及处理1. 样品接收、运送及处理办法1.1 样品接收1.1.1 由经过培训的、穿戴防护衣的实验人员在具有处理感染源设备的实验室内接收。装标本的包裹或容器须消毒。1.1.2 核对样品与送检单，检查样品管有无破损或溢漏。若发现有破损或溢漏的应立即将尚存的标本移入新管中，对破损或溢漏的样品管进行消毒，同时报告有关领导。1.1.3 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。1.
8、1.4 打开标本容器时要小心， 以防内容物泼溅。 样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。1.1.5 接收样品时应填写样品接收单。样品接收登记表样（见附件1）1.2 样品运送1.2.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。1.2.2 应采用 WHO 提出的三级包装系统第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - -
9、- - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 5 页，共 31 页 - - - - - - - - - 5 品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。1.2.3 血清和血浆样品应在2-8条件下由专人运送。1.2.4 运送感染性材料必须有记录。1.2.5如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免冻融。1
10、.2.6 特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄， 但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。1.3 处理: 血清、血浆标本在检测前或运送前需离心(3000 转/min 15min)、灭活（56 30min ） 。保存期限已过的标本，需经过焚烧处理并有处理记录。1.3.1 保存1.3.1.1用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20以下，短期（ 1 周）内进行检测的样品可存放于2-8。1.3.2 废弃处理标本一般保存 1 年以上，过期后进行处理。采用焚烧法，有处理记录。2. 样品的采集艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血
11、。唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用的血液样品的采集和处理方法如下：.1.1 血清样品采集和处理.1.1.1 用一次性注射器（或真空采血管）抽取足量静脉血，室温下自然放名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 6 页，共 31 页 - - - - - - - - - 6 置 1 2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min 离心 15min，吸出血清备用。.1.1.2 如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其
12、它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。.1.2 抗凝血样品采集和处理.1.2.1 用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。.1.2.2 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用 K3EDTA 或肝素或枸橼酸钠， HIV 病毒分离、核酸定性 / 定量检测可选用 K3EDTA或枸橼酸钠。.1.2.3 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4 8h 内分离 PBMC 和血浆，否则应在 24 48h内分离血浆和血细胞。.1.3 采集样品注意事项.1.3.1 采集样品原则上应按临床采血技术
13、规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。.1.3.1 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者 / 艾滋病（ AIDS）病人血液 / 体液的操作 , 应戴双层手套。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 7 页，共 31 页 - - - - - - - - - 7 SOP 文件二、检测方法和步骤编号：LZFBYHIV-02 编写姜子明王永彬编写日期2014-03-10 审核綦洪敏修订日期2014-03-20 目的熟练掌握 H
14、IV 检测方法、步骤应用范围HIV 抗体检测1. 检测程序样品化学发光 ELISA 阳性阴性PA复检或两种方法复检两种均阴性两种均阳性一阴一阳送确认实验室出筛查报告提供阴性咨询名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 8 页，共 31 页 - - - - - - - - - 8 2. 艾滋病抗体初筛检测常用的方法HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验。筛查试剂 ：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、由临检中心批批检合格、在有效期内的试剂。筛查方法：（一） 常
15、用的筛查方法是酶联免疫试验（ELISA） ：目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂。化学发光法，使用与机器配套意大利索灵试剂。我实验室使用第三代ELISA试剂，目前主要使用万泰试剂（国家下拨）。（二）快速检测（ RT ）及其它检测： 1、明胶颗粒凝集试验（ PA ） ；2、斑点 EIA或称斑点 ELISA（dotEIA） ；3、斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验；4、艾滋病唾液检测卡； 5、其它快速筛查试验方法：家庭HIV 检测、尿液检测等。我实验室主要有 PA试剂。3. 万泰试剂检测方法和步骤方法：酶联免疫（ ELISA）步骤: 1. 样品、试剂、酶标板条室温平衡30 分钟。2. 配制
16、洗涤液， 取浓缩洗涤液 50ml，加去离子水 1000ml（稀释）备用。3. 取板条，放在板架上，撕去板条上的封条。4. 在确定的板孔中加入100l 的标本或阴阳性对照，震荡混匀。设1个空白对照， 3 个阴性对照， 1 个 HIV-阳性对照 1 个 HIV-阳性对照，并填写加样顺序表。5. 在微板上盖上贴膜（洗板前撕去贴膜） ，37孵育 602 分钟。6. 用洗板机洗板，每孔5 次（程序已编好）。最后拍干。7. 在每孔中加入 100l 酶标试剂，空白孔除外 ,37 孵育 302 分钟。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - -
17、- 名师精心整理 - - - - - - - 第 9 页，共 31 页 - - - - - - - - - 9 8. 用洗板机洗板，每孔5 次（程序已编好）。最后拍干。9. 每孔加入显色剂 A、B各 50l ，轻轻振荡混匀 。10. 封板膜封板后 37闭光显色 301 分钟。11. 每孔加入 50l 终止液，轻轻振荡混匀，终止反应，10 分钟内比色12. 在 450nm波长读取每孔的吸光度，并打印结果。分析：符合以下 条件的实验 成立：阴性对照平均值 0.10 阳性对照平均值 0.80 结果分析：结果临界值 =阴性对照平均 OD值+0.12 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - -
18、 - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 10 页，共 31 页 - - - - - - - - - 10 SOP 文件共 3 页三岗位人员签字编写刘琪琛仪器的使用、维护、校准编写日期2007-1-4 修订史建中编号：LZFBYHIV-03 修订日期2007-1-5 目的对仪器的正确管理适用范围HIV抗体检测的所有仪器设备1. 仪器使用制度仪器设备是实验室检测工作的物质基础和技术条件，是国有资产的组成部分，是重要的卫生资源。仪器贴有红、黄、绿三色标识，有唯一编号。(1) 、 用仪器前必须熟读使用说明书或实验指导，熟练掌握仪器性能
19、和使用方法，并在仪器负责人或教师的同意和指导下，才能开启仪器。(2) 、仪器使用过程中必须严格遵守仪器的具体操作程序，不得擅自做与实验无关的内容。操作前要熟知使用注意事项。使用后，操作人应认真检查仪器状态，擦净仪器，断电后方可离去，如有损坏要及时上报，检修。(3) 、对仪器要经常性的保养，定期检查，认真填写实验记录及仪器使用记录。(4) 、实验仪器不准随便乱动，否则造成仪器设备损坏者，要追究其责任，认真处理。1.1 安图 2010型酶标仪操作程序1.1.1 检测读数前接通电源，打开电脑、打印机、酶标仪。1.1.2 打开酶标仪工作站，输入密码，选定检测项目（若需重新设定检测条件，要由仪器管理员设
20、定）。1.1.3 放入待测酶标板，开始检测（酶标板放置要正确）。1.1.4 保存、打印检测数据。1.1.5 检测完毕后，关机，切掉电源。用75% 的乙醇对仪器表面擦拭消毒。1.2 安图 2010型洗板机操作程序名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 11 页，共 31 页 - - - - - - - - - 11 1.2.1 洗板前接通电源。1.2.2 开机，选择清洗程序及所需通道，用50mL洗液灌洗管路。1.2.3 灌洗完毕后，选择洗板程序（提前由管理员设置完成）洗板。1.
21、2.4整个实验洗板完毕后，选择清洗程序选蒸馏水清洗，用50mL蒸馏水清洗管路。1.2.5 清洗完后，关机。切掉电源。用75% 的乙醇对仪器表面擦拭消毒。1.3 水浴锅操作程序1.3.1 开机准备1.3.2 使用前检查水浴锅中是否有水，水浴锅加水应高于隔板，锅内放入被处理样品不至于水溢出锅体。1.3.3 接通电源，打开水浴锅体开关，把控温设定数码调至所需要的温度上（37）。1.3.4 使用1.3.5 用温度计测定锅内温度（与电子显示比较），当温度上升到设定的温度值时开始计时，进行恒温水浴加热。1.3.6 使用完毕，应及时关闭锅体开关，断开电源。1.3.7 注意及维护：1.3.7.1必须安装地线。
22、1.3.7.2禁止无水或水低于锅内隔板时加热。1.3.7.3长期不使用最好把锅内水放掉，擦净。1.3.7.4水浴锅内不得有杂物，保持锅体内外洁净。1.3.7.5每周两次更换锅内水，以保持水的洁净。2. 仪器设备的管理、使用、维修、报废制度名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 12 页，共 31 页 - - - - - - - - - 12 2.1 计划添置必要的仪器设备，按规定手续验收、登记，并经计量部门检定发证后才能使用，并建立仪器台帐。2.2 使用大型仪器设备的检定人员
23、必须熟悉使用仪器的使用保养方法，并持有操作合格证；2.3 使用仪器时先检查仪器是否完好正常，按操作规程使用后进行登记， 并注意做好仪器的清洁、保养工作；2.4 每台精密仪器必须按规定定期检查，检验合格后才能继续使用；2.5 仪器不得“带病”工作，发现故障应及时报告以便组织维修；2.6 精密仪器建专人保管使用制度，外来人员未经批准和考核不得单独操作使用；2.7 仪器确已损坏，无法修复时，邀请有关专家报废鉴定，填写仪器报废单，经主任批准后，按资产管理权限上报。2.8. 仪器管理人员职责2.8.1 仪器管理人员应熟悉仪器、设备的使用方法及特性，做好仪器设备的管理。2.8.2 爱护仪器设备，正确使用，
24、做好经常性的维护保养工作。2.8.3 定期对仪器进行检测，发现故障及时安排维修，提高设备完好率。2.8.4 严格遵守各项规章制度和工作流程，按照标准操作规程操作仪器。2.8.5 努力学习业务知识，提高技术水平。2.8.6 对新来实验室的人员进行如何正确使用仪器的指导。2.8.7 保持实验室的整齐清洁、防火、防盗，保证仪器设备正常运转。2.8.8 保持实验室的清洁卫生，实验室内不得任意堆放杂物，废物要及时清除，临时有用的物品要堆放整齐。3. 仪器的使用、维护及校准方法与记录表样( 附件 2)。详见记录。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - -
25、- - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 13 页，共 31 页 - - - - - - - - - 13 3.1 ELISA 洗板机与酶标仪维护、校准每天：每次操作要按要求设立对照。核对酶标仪滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。每周：清洁仪器表面，保护光学零件，不沾灰尘。每月：洗涤时检查各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求，这是保证各孔洗涤均衡一致的前提。每年：检查、清洗滤光片，如果滤光片出现破裂或霉点则要更换，根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的所用波长光密度的精密度进行校验，测定 20 次，计算精密度。精密度应该控制在厂
26、家说明书中所规定的范围 ( 建议请厂方代表校验 ) 。校验结果要有记录，保留测定原始结果。根据实际使用情况更换主要设备（如洗板机、全自动免疫分析系统）内的所有液体装置和管子 (要求厂方代表维修 ) 3.2 移液器 ( 包括单头和多头移液器 )维护、校准移液器是实验室中重要的基本器具，一年至少应该标定或校准一次，若发现移液器有异常情况，应该立即进行标定。移液器标定方法包括吸取有色溶液进行光谱分析、吸取蒸馏水称量校准、吸取放射性同位素计数校准，以及使用配套校准盒等等。特别要注意使用多头移液器时，必须保证每一个加样头都能够连续和准确的加样。移液器的精密度可根据生产移液器厂家说明书中所规定的范围进行校
27、准。推荐在检测过程中，每个加样工序使用专用的移液器。用蒸馏水称量标定移液器方法(参考芬兰 Labsystems 移液器标定方案 ) 在一室温为 22 的小型工作室 ( 无风)中，在万分之一级别天平上放置一个小三角烧瓶，用待标定的移液器吸取蒸馏水( 隔夜存放 ) 加入小三角烧瓶内底部，每次称重后计量，去皮重后再加蒸馏水，连续加蒸馏水10 次。加蒸馏水的名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 14 页，共 31 页 - - - - - - - - - 14 量根据待标定的移液器不
28、同规格而不同，见下表。移液器标定合格后，在移液器上贴上合格标签，标明日期。在移液器标定记录中填写移液器规格、编码、10 次标定称量、标定日期和标定人签名。 移液器 10 次标定称量在所要求的重量范围内为合格移液器；不合格移液器要根据移液器生产厂家所推荐的方法进行校准。称重法校准移液器方案移液器规格蒸馏水量要求重量范围0.510l 2l 1.75 2.25 mg 5 40l 10l 9.8 10.2 mg 40 200l 70l 69.4 70.6 mg 200 1000l 300 l 298.0 302.0 mg 1 5ml 2000l 1990.0 2010.0 mg 2 10ml 3500
29、l 3485.0 3515.0 mg 4. 仪器档案仪器档案包括前期资料（仪器设备购置申请表、技术调研论证报告、招投标文件、订货合同、验收记录、装箱单、仪器使用说明书、操作手册等）；使用资料（仪器操作作业指导书、历年的使用记录、历年的检定证书、历年维护维修、故障、改装记录、期间核查记录等）. 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 15 页，共 31 页 - - - - - - - - - 15 SOP 文件共 4 页四岗位人员签字编写刘琪琛实验中的质量控制编写日期2007-
30、1-4 修订史建中编号： LZFBYHIV-04 修订日期2007-1-5 目的保证实验正确性适用范围HIV抗体检测质量控制1. 质控血清的制备和保存1.1 在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off）的 2-3 倍为宜。1.2 外部对照质控血清的制备
31、HIV 抗体阳性和阴性血清， 56 30min 灭活，3000r/min ，离心 15min。弱阳性对照可以用HIV抗体阴性血清梯度稀释HIV 抗体强阳性血清并标定后得到。按一年使用量配制（可加入不影响检测结果的防腐剂）用 0.2m滤膜过滤除菌。1.3 外部对照质控血清的保存按一周实验用量分装、 分类、 标记、 封口、 -20冻存于非自动除霜冰箱中。外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放2-8，供一周内使用。1.4 外部对照质控血清的使用每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。1.5 外部对照质控物的质量要
32、求质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（ cv20% ） ，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 16 页，共 31 页 - - - - - - - - - 16 并不含有影响 ELISA反应的防腐剂。2. 质控图的建立与应用最常用的质控图是Levey-Jennings 质控图，使用累计和技术或趋势分析技术的图形可提供系统偏移和漂移的状况。2.1 建立质控图参数2.1.1外部对照质控物的平均值和标准差应建立在实验室常
33、规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20 个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5 个批次的检测，每个批次中不少于4 个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到20 批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。2.1.2 算术平均值 ( )： 代表一组 S/CO值的平均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20 次(天) 所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。2.1.3标准差 (s) ：是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清 S/CO值均值有关的预期范围。一组S/CO值的标准差以 s 表示。2.1.4变异系数 (c
34、v) ：是反映各次 S/CO值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。2.1.5 控制限：由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。例如12S质控规则的控制限为外部对照S/CO平均值加减 2 个标准差； 13S 质控规则的控制限为外部对照S/CO平均值加减 3 个标准差。2.2 绘制质控图质控图是把检测数据与已确定的（计算出的）“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实验室每次试名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - -
35、 - - - - 第 17 页，共 31 页 - - - - - - - - - 17 验质控血清的测定值。质控图的绘制步骤：2.2.1 在常规条件下， 对同一批血清连续测定20 次（天）或以上，获得一组 S/CO值，求均数 (x ) 和标准差 (s), 超出 2s 或 3s 的数据不应删除。2.2.2 将均值(x )和标准差 (s) 分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标(Y 轴)，每一次 ( 天) 试验作横座标 (x 轴)，绘制质控图。2.2.3从第 21 次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。2.3 质控规则及使用实验室在报告实验结果之前必须评
36、价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前许多质控规则已被采用，常用的是12S和 13S规则。2.3.1 告警（12S） ：当外部对照的 S/CO值超出 +2s 范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S 做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。2.3.2 失控（13S） ：当外部对照的 S/CO值超出 +3s 范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。2.3.3位移：连续几次（ 3?5 次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。2.3.
37、4趋势：连续几次（ 5?7 次）外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 18 页，共 31 页 - - - - - - - - - 18 多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。其要点为：出现一次 2s 范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以
38、继续检测需要进一步观察。出现下列情况时，应暂停检测查找原因：出现一次3s 范围的变化、连续两次出现同一方向 2s 范围的变化、连续四次出现同一方向的1s 范围的变化、连续10次结果都在 1s 范围内，但落在均值线的同一侧。2.4 质控图的分析及失控处理实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。2.4.1 绘制和分析质控图的要点2.4.2要在常规条件下建立质控图参数
39、，用S/CO比值绘制质控图。对同一批质控物连续测定得到20 个数据，求均值 ( ) 和标准差 (s), 超出 2s 或 3s 的数据不应删除。2.4.3 由专人负责建立质控图， 每月定期召开质控分析会， 讨论本月的质量控制情况。2.4.4 建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。2.4.5 发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - -
40、 - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 19 页，共 31 页 - - - - - - - - - 19 2.4.6使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数(cv)小于 20，表示外部对照处于稳定状态。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 20 页，共 31 页 - - - - - - - - - 20 SOP 文件共 1 页五岗位人员签字编写刘琪琛结果解释与报告编写日期2007-1-4 修订史建中编号：LZFBYHIV-05
41、修订日期2007-1-5 目的正确合理的方式给予结果适用范围HIV 抗体检测初筛检测结果为阴性者，出筛查报告。检测结果为阳性者，需用同种试剂及另一种不同原理或不同厂家的试剂复检。若两种试剂均为阳性或一阴一阳，则填写阳性送检单，送省级确证实验室确证；若两种试剂均为阴性则报告阴性结果，出筛查报告。抗-HIV 阳性：极大可能为HIV 感染，也可能属于非特异反应抗-HIV 弱阳性：存在真阳性和假阳性两种可能抗-HIV 阴性：极大可能无HIV 感染，不排除阳性的可能（存在感染因素下检测时机不合适）通常的抗 -HIV 检测结果的处理结果试剂 1 试剂 2 处理意见A 再次采样，做确证实验B 或 再次采样，
42、做确证实验C 报告抗 -HIV 阴性D 不必复检报告抗 -HIV 阴性1. HIV 抗体筛查报告（附件3）2. HIV 抗体阳性送检单（附件4）3. 自愿咨询检测报告单（附件5）名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 21 页，共 31 页 - - - - - - - - - 21 SOP 文件共 1 页六岗位人员签字编写刘琪琛保密程序编写日期2007-1-4 修订史建中编号：LZFBYHIV-06 修订日期2007-1-5 目的对受检者以承诺有保密措施适用范围HIV 抗体检
43、测艾滋病抗体检测人员及相关人员要时刻警记对实验结果进行保密。实验室人员对检测情况及结果有保密的义务，未经许可不得外传，以免对被检者及社会造成不必要的影响。若发生泄密事件造成不良后果者，根据情况严重程度追究其责任。实验室一切记录及档案均由专人保管，不得外借，要对其加锁加密。若由于失职造成泄密者，追究其责任。实验室负责人要时刻提醒实验室人员注意言行并宣贯保密制度，使实验人员提高警惕。检测- 知情同意的原则结果- * 初筛阳性或可疑阳性的，初实验人员外，不可传告其他人员 * 确证阳性的，以严格保密的原则报卫生行政部门、用适当方式通知本人经本人同意的情况下可告知其配偶 * 确证可疑阳性的，只通过咨询告
44、知本人或经本人同意告知指定的家属名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 22 页，共 31 页 - - - - - - - - - 22 SOP 文件共 1 页七岗位人员签字编写刘琪琛检测数据的记录与保存编写日期2007-1-4 修订史建中编号：LZFBYHIV-07 修订日期2007-1-5 目的溯源性适用范围HIV 抗体检测1. 检测数据的原始记录原始记录要求格式的规范化、记录的原始性和完整性，数据和数据处理的正确性及溯源性。、使用统一规格的原始记录本（纸）和报告用纸；、
45、原始记录要由实验人员亲自填写，使用钢笔，字迹要清楚，使用名词、术语要简明、真实。数据要更改时，应将错写数据划掉并在其上方改写正确数据并签字或盖章；、工作完毕，必须及时进行数据处理，计算结果，发现数据有疑，要立即检查原因，不能删除或篡改与预期结果不符的数据；、研究任务完成后，原始记录应整理清楚后归档，并严格做好保密工作；、实验人员对实验情况及结果有保密的义务，未经许可不得外传（附件 6、7、8）详见各实验原始记录。2. 结果登记表样（附件9） 。详见登记表记录。3. 数据记录的保存原始记录包括实验原始记录表、打印数据、膜反应条带或其照片、检测记录表、标本登记记录、标本保存记录以及仪器设备维修和校
46、准记录等重要记录都应该妥善存档保存15 年以上。推荐同时使用计算机保存各种文件和记录。内含病人姓名的所有工作记录一定要保密，参见规范。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 23 页，共 31 页 - - - - - - - - - 23 SOP 文件共 1 页八岗位人员签字编写刘琪琛追踪与处理编写日期2007-1-4 修订史建中编号：LZFBYHIV-08 修订日期2007-1-5 目的对窗口期内受检者追踪服务适用范围VCT及其他人群 HIV抗体检测窗口期：广义的讲，从病原
47、体侵入机体到用现行的实验室手段可以证明受到感染的期限称为窗口期。 狭义的讲，HIV感染后至抗体检出前的一段时间称为窗口期。从一个人感染上HIV 到相应抗体产生需13 个月，平均约45 天，这段时期称为“窗口期”。针对这类人群的检测需要作好咨询工作，了解其高危行为及行为接触时间，判断其窗口期并对其采取评估，进行追踪检测。VCT作为艾滋病预防、治疗、关怀和预防母婴传播等工作的切入点和枢纽，报务内容包括检测前咨询、 HIV抗体检测、检测后咨询、支持性咨询以及相关治疗、关怀等转介服务。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师
48、精心整理 - - - - - - - 第 24 页，共 31 页 - - - - - - - - - 24 SOP 文件共 2 页九岗位人员签字编写刘琪琛实验室的清理与消毒编写日期2007-1-4 修订史建中编号：LZFBYHIV-09 修订日期2007-1-5 目的人员、环境、标本的保护适用范围HIV 抗体检测1.HIV 常用的消毒方法1.1 物理消毒方法高压蒸汽消毒， 121，保持 15 20min; 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒） ，140，保持 2 3h。1.2HIV 常用的化学消毒方法HIV最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L） 、75% 乙醇和
49、 2% 戊二醛，保持 10 30 min 。废弃物缸： 5000mg/L 次氯酸钠。生物安全柜工作台面和仪器表面：75% 乙醇。溢出物： 5000mg/L次氯酸钠。污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠 , 也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用 2% 戊二醛消毒。2. HIV 实验室消毒规范根据实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）和 消毒技术规范（2002年版） 的要求 , 制定 HIV 实验室消毒规范 . 实验结束后，实验人员要对实验室进行消毒处理。工作台面消毒：用2000mg/L 次氯酸钠或稀释后的84 消毒液或其它含氯消名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 -
50、- - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 25 页，共 31 页 - - - - - - - - - 25 毒液擦拭。地面、墙面消毒：用2000mg/L 次氯酸钠或稀释后的84 消毒液或其它含氯消毒液擦拭。仪器设备表面消毒：用75% 的乙醇擦拭消毒。二级生物安全柜消毒：用福尔马林熏蒸法消毒或75% 的乙醇擦拭消毒。废弃物消毒：用高压蒸汽灭菌器消毒。然后焚烧。实验室环境消毒：紫外线消毒。室内消毒及事故处理实验结束后 , 要对工作台面消毒 , 如用消毒液清洗后要干燥20 分钟以上；操作时有标本、检测试剂外溅时应及时消毒，平时要