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1、XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一1 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901HIV质量管理手册目录编 号名称页面第一部分工作制度GLSC_02-lHIV检测实验室工作制度4-4GLSC_02-2HIV标本采集与接收登记制度5-5GLSC_02-3艾滋病实验室保密制度6-6GLSC_02-4艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度7-7GLSC_02-5差错事故处理制度8-8GLSC_02-6报告单签发审核制度9-9GLSC_02-7设备管理制度10-10GLSC_02-8试剂管理制度11-11GLSC_02-9艾
2、滋病筛查实验室安全防护制度12-12GLSC_02-10艾滋病病毒职业暴露预防处理方案13-15第二部分标准操作规程GLSC_02-ll样品采集与处理16-16GLSC_02-12HIV项目标准操作程序17-19GLSC_02-13HIV结果报告与注意事项20-20GLSC_02-14HIV检测室内质控的标准操作规程21-23GLSC_02-15HIV检测室间质评（EQA）标准操作规程24-25第三部分 设备S0P文件GLSC_02-16雷杜RT-3000洗板机标准操作程序26-27GLSC_02-17雷杜RT3000洗板机维护保养程序28-28GLSC_02-18雷杜RT3000洗板机校准程
3、序29-29GLSC_02-19雷杜RT-6100酶标分析仪标准操作程序30-32GLSC_02-20雷杜RT-6100酶标分析仪维护保养程序33-33GLSC_02-21雷杜RT-6100酶标分析仪校准程序34-34GLSC_02-22生物安全柜使用和维护保养标准操作程序35-37GLSC_02-23生物安全柜校准标准操作程序38-38GLSC_02-24高压蒸汽灭菌器的操作程序39-40GLSC_02-25压灭菌器灭菌效果的监测程序41-41GLSC_02-26离心机标准操作程序42-43GLSC_02-27水浴箱操作程序44-45GLSC_02-28冰箱操作程序46-47GLSC_02-
4、29加样器的操作程序48-48GLSC_02-30加样器的校准程序49-50GLSC_02-31加样器的维护保养程序51-51GLSC_02-32振荡器标准操作程序52-52第四部分流程图GLSC_02-33HIV抗体筛查流程图53-53编写者:XXX审核者：XXX批准者：XXX! 时间：20170901时间：20170901时间：20170901XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 2 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901第五部分应急预案GLSC_02-34实验室意外事故防范及应急预案54 - 58GLSC
5、_02-35检验科生物安全保卫制度和措施59-60GLSC_02-36病原微生物实验室准入制度61-61GLSC_02-37检验科菌（毒）种及其样品安全管理制度62-64第六部分附表附表1血清加样表65-65附表2HIV抗体ELISA法检测原始记录表66-66附表3HIV抗体胶体金法检测原始记录表67-67附表4实验室事故登记表68-68附表5HIV抗体复检检测单69-69附表6艾滋病职业暴露个案登记表70-72附表7艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表73-73附表8艾滋病病毒抗体检测数及阳性人数统计报表74-74附表9HIV抗体筛查报告75-75附表10艾滋炳抗体初饰阳性标本相关信息米集表
6、76-77发布日期:文件审批者:编写者:XXX审核者：XXX批准者：XXX时 间：20170901时间：20170901时间：20170901XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 3 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901操作者从事本项工作前,必须认真学习并掌握本手册的内容,严 格按照操作规程操作!学习者:休订书册与增补程序内容与日期:学习者:休订书册与增补程序内容与日期:学习者:编写者:XXX审核者：XXX批准者：XXX时 间：20170901时间：20170901时间：20170901检验科HIV质理管理手
7、册文件编 号:YCXZYYJYK GLSC ()2页码:第一 4 页,共77页版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901第一部分工作制度GLSC_02-l HIV检测实验室工作制度1 .室内应经常保持整洁,各种仪器设备要安装适当,器皿试剂摆放整齐,标志清 晰,有良好的通风设备。2 .实验室工作人员工作时一律穿制服,保持衣帽整洁,试验过程中应专心致志、 认真负责,坚守工作岗位,不得随意串岗、闲谈,保持实验室安静,下班离开 实验室前要检查并关好水、电、门、窗等,注意实验室安全。3 .认真开展实验室质量控制工作,仪器设备应定期保养,有温度记录,检测标本 的保存要求符合规范要求。4 .实验室不
8、得放置与测试无关的物品，水、温、湿度、光照、防震、防尘、防噪 声等,环境必须符合实验室的工作要求。5 .实验和楼道内必须配置足够的安全防火措施，并定期检查保养。6 .对不同属性、品种和含量水平的试样,应有足够的试验区域,予以分离检验, 尤其是已知具有生物危害的试样必须分离检验。防止损害工作人员健康和污染 环境。7 .与检验无关人员不得进入实验室,外单位人员联系工作,一律在办公室接待。8 .实验结束后,应及时清理实验现场和用品,对染菌带毒的器具废弃物应严格进 行消毒无菌处理。9 .实验室内禁止吸烟、用餐和进食。10 .实验室工作人员应当做好工作交接工作,填写交接班登记本，交接内容最少包 括日期、
9、时间、实验室温湿度记录、紫外线消毒记录、温控设备登记情况、仪 器设备运行情况、还有未完成的实验交接及注意事项等。编写者:XXX审核者：XXX批准者：XXX! 时间:20170901时间：20170901时间：20170901XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 5 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901GLSC_02-2 HIV标本采集与接收登记制度1、采样前和接收标本时应核对病人身份,严格执行查对制度。2、采血时应戴好手套、帽子、口罩。3、HIV标本采集应建立详细的记录本,记录内容包括:送检单位、病人姓名、门
10、 诊号、数量、种类（血清）、送样者、接收者或采集者。4、采集后,应将HIV样本单独分装,勿与其它项目共用。编写者:XXX审核者：XXX批准者：XXX! 时间：20170901时间：20170901时间：20170901XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 6 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901GLSC_02-3艾滋病实验室保密制度为确保艾滋病实验室所有资料严格保密,应遵守以下制度1、与HIV/AIDS相关检测项目的所有资料均应严格保密,包括采样记录与检测记 录的保管,报告单的发放和送确认实验室检测等。2、工
11、作人员不得向无关人员提供检验结果,要妥善保存各种实验记录。3、对初筛疑似阳性感染者不能告诉受检者本人,更不能到处乱讲。4、实验室的有关检验资料,档案、结果记录其他人不得翻录查阅,修改和销毁。5、实验室工作人员,不能在非正式场合对外提供任何结果、数据。编写者:XXX审核者：XXX批准者：XXX! 时间：20170901时间：20170901时间：20170901XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 7 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901GLSC_02-4艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度1、检测可疑样品时,
12、充分准备好废弃物消毒具及消毒药、液。如:次氯酸钠含有 效 氯 20005000mg/L, 75%乙醇和 2%戊二醛。2、实验室用的吸头及时打入消毒器皿中。3、一次性手套,隔离服更换后,应丢弃在一次性垃圾袋内。4、常用消毒方法4.1、 物理消毒方法4.1.1、 高压蒸汽消毒,121,保持!520 min；4.2、 化学消毒方法4.2.1、 废弃物缸:5000mg/L次氯酸钠4.2.2、 工作台面及仪器表面:75%乙醇4.2.3、 溢出物：5000 mg/L次氯酸钠4.2.4、 污染的台面和器具：2000 mg/L次氯酸钠5、实验室中发生可疑样品溢出时,应及时用75%乙醇喷洒,然后用消毒剂浸泡的吸
13、 水物质覆盖10-15分钟，最后再用消毒剂清洗该地方,擦干。6、全部实验工作结束后,应对实验台、仪器、设备（接触部位）地面进行彻底消 毒处理。7、废弃物处理从HIV实验室出来的所有废弃物,包括不再需要的样品、包装盒 和其他物品，均应视为感染性废弃物。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间:20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 8 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期：20170901GLSC_02-5差错事故处理制度1、艾滋病检测工作人员必须要有高度的责任
14、心和严肃的法制观念,严防差错事故的发生。2、由于责任心不强、不认真执行规章制度,不遵守操作规程或技术因素而引发检 验错误,对病人未造成严重后果的,称为差错。差错按程度不同,分为一般差 错和严重差错。级差错记差错次,二级差错扣款50元,三级差错扣除当 月效益奖金。级差错:(1)违反操作规程,导致标本损坏,需重新采集标本或由于接收标本未认真查对,违反查对 制度,影响检验者。(2)工作环境不能做到5S管理、违反生物安全者。(3)未按时记录结果、绘制质控图、当发现失控时隐瞒不报者。二级差错:(1)未按时间先后顺序使用试剂,导致试剂过期或由于存放不当造成试剂变质者。(2)项目漏査、做错项目,且标本已处理
15、,需再次采取标本检验者。(3)因操作不当，导致设备故障，影响较大者。三级差错:(1)漏做、错做一般标本的检验目的,编错试管号码,标错标本联号、采错病人标本,写 错检验结果并已发出报告者。(2)粗心大意写错报告难以挽回者。(3)因责任心不强、管理不善导致阳性标本丢失者。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX! 时 间：20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 9 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期：20170901GLSC_02-6报告单签发审核制度、各岗位的工作
16、由本岗位人员进行操作检验,然后填写检验报告单。工作完成 后,再对本岗位所有的检验报告进行核查一次,在你认为可以发出时,盖上 检验者印章,填写好报告日期。交给本实验室负责人或有资质的高年资检验 人员核查签名;但在危急情况下或单独一人值班时（如夜班）除外。二、没有上岗证人员不得单独签发检验结果报告单。三、专业责任主管技师对本专业的所有报告单进行审核,审核的基本内容有:1、临床医师所申请的检验项目是否已全部检验,有无漏项;2、检验结果的填写是否清楚、正确;3、检验报告单上所有内容是否全部填写完整;4、有无非常异常的、难以解释的结果；5、有无书写错误;6、是否有需要复查的结果当发现检验结果有疑议时可指
17、令本岗位人员对检验项目进行复查。确认报告 无问题时盖章后,方可发出报告。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 10 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期：20170901GLSC_02-7设备管理制度1 .由科主任或科室主管负责监督和检查仪器设备的使用状况,定期校准仪器的准 确度。2 .各科应对本科室仪器设备建立台账明细。3 .每日应登记仪器设备使用状况表,并存档。4 .贵重仪器应由专人负责管理。5 .仪器操作前必须
18、培训、考核，仔细阅读仪器操作说明书,熟练掌握该仪器的使 用方法及维护办法，考核合格后方可操作。6 .当班者在使用中应严格遵守操作规程,遇到问题应作及时处理,并详细记录。 问题严重者,应及时上报科主任或主管加以解决。7,每次使用完毕,应检查仪器的电源、废液倾倒情况,并详细记录该次使用情况。8 .对有温度要求的仪器设备，如冰箱冷藏室、冷冻室及恒温培养箱、水浴箱等, 均应建立登记本,每天监测温度。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 11 页,共77页检
19、验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期：20170901GLSC_02-8试剂管理制度1 .为了更好地管理检验科试剂,由主管对检验科试剂申购、品牌、质量、价格、 使用及管理情况进行督查。2 .每周上报周计划,各组人员根据各岗情况,认真、详细填写计划表,务必注明 详细的名称、规格、数量及品牌。3 .检验科试剂必须由主管审核,并负责报药库采购,品牌不得随意更改。杜绝浪 费和积压。4 .所用的试剂必须符合质量要求,必须有三证。不得使用过期、劣质试剂。5 .供应商所送的试剂由总库清点后才能接收,特殊试剂由检验科主管清点后才能在货单上签字,有出入者必须向科主任报告,再将货单交药库统结账。
20、6 .领用时应检查物品质量和试剂品名、厂家、人份、批号、过期时间及外包装有 无渗漏等,若有问题,应及时向总库反映。7 .冰箱内不能贮存乙醛、异戊烷或类似的易燃、可燃性液体。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901项 目文件编号:YCXZYYJYK GLSC ()2页码:第一12 页.共77 页版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901GLSC_02-9艾滋病筛查实验室安全防护制度为确保实验室人员的工作安全,防止交叉感染,请严格遵守安全防护制度1、工作人员要完成与工作有关的充足有效的技术培训,要了解HIV危害,提高全
21、 员安全意识,实验室安全负责人要对工作和环境的安全负责,所有工作人员都 有责任保护自己和他人的安全。3、对有放试剂、样品血清的冰箱专人管理。4、实验人员应熟练掌握操作知识和消毒技术。5、进入实验室应穿隔离衣,戴手套,传染性危险大时应戴双层手套,戴防护镜, 罩，如防护用具破损应及时更换，不用戴手套的手触摸暴露的皮肤等部位。6、实验期间尽量避免使用利器,易碎器皿，禁止采用口腔吸液管。7、送检样品应视为有潜在传染性，由专人接管,登记,存放，提取。9、实验用吸头、手套、隔离服、污染物、废弃物均放在指定垃圾袋中统进行消 毒,焚烧到无害化处理。10、不得在实验室中吃食物,化妆打扮等,不得在实验室会客。11
22、、实验室用品(包括工作服)不得用于其他用途,不可将私人和无关的物品带 入实验室。12、工作完毕,脱去手套后洗手,再脱去工作服,用肥皂和流动水洗手,洗手后 离开实验室。13、实验结束后,要对工作平台、仪器、地面进行消毒处理。14、遇有意外事故，应立即头和书面报告上级部门,并进行局部处理,如含氯 消毒剂浸泡伤,洗眼,漱口等,如遇高危意外事故,除进行局部处理外,同 时应立即采取预防措施,包括对其随访，HIV检测,休息并暂离岗位二个月, 按医嘱服用HIV药物等。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间:20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:Y
23、CXZYYJYK GLSC 02页码:第一 13 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901GLSC_02-10艾滋病病毒职业暴露预防处理方案为维护医务人员及其他部门有关人员的职业安全,有效预防在工作中发生职业暴露感染 艾滋病病毒,一旦发生职业暴露后最大限度的避免或减少艾滋病病毒感染,特制定本方案。、 职业暴露（一）职业暴露是指医务人员以及有关工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作的过程中 意外被艾滋病毒感染者或者艾滋病患者的血液、体液污染了皮肤或者粘膜,或者被含 有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其他锐器刺破皮肤，有可能被艾滋病病毒 感染的情
24、况。（-）数据分析表明，医护和预防保健等人员对艾滋病病毒和艾滋病患者从事医疗和实验检测 活动是比较安全的。执行严格的安全操作及防护措施，医护及检验等人员的暴露事件 是可以避免的。二、职业暴露的预防1、医务人员对所有病人的血液、体液（包括羊水、心包液、胸腔液、腹腔液、脑脊液、滑液、 阴道分泌物等人体物质,下同）及被血液、体液污染的物品均视为具有传染性的病原物质, 在接触这些物质时，必须采取防护措施。2、医务人员进行有可能接触血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴手套，操作完毕,脱去手套 后立即洗手,必要时进行手消毒。3、在诊疗、护理操作过程中，有可能发生病人血液、体液飞溅到医务人员的面部时，医务人员
25、 应当戴手套、具有防渗透性能的n罩、防护眼镜:有可能发生血液、体液大面积飞溅或者 有可能污染医务人员的身体时,还应当穿戴具有防渗性能的隔离衣或者围裙。4、医务人员手部皮肤发生破损，在进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴 双层手套。5、医务人员在进行侵袭性诊疗、护理操作过程中，要保证充足的阳光，并特别注意防止被针头、 缝合针、刀片等锐器刺伤或划伤。6、使用后的锐器应当直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，或者利用针头处理设备进行安全处置,也可 以使用具有安全性能的注射器、输液器等医用锐器，以防刺伤。7、禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器。三、
26、艾滋病病毒暴露后的预防处理编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 14 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901（一）紧急局部处理:1、用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤,用生理盐水冲洗粘膜。2、如有伤口,应当在伤旁端轻轻挤压,尽可能挤出损伤处的血液,用再肥皂液和流动清水 冲洗;禁止进行伤的局部挤压。3、受伤部位的伤冲洗后,应当用消毒液，如70%乙醇或者0.5%碘伏进行消毒，并包扎伤口;被暴露的粘膜,应当反复
27、用生理盐水冲洗干净。（二）暴露后的报告及处理程序1、医护人员发生艾滋病病毒职业暴露后,要立即上报医院领导（具体由医院确定院内程序， 注意给暴露者保密）。及时报告XX县疾控中心，组织专家对暴露的级别和暴露源的病毒载 量水平进行评估和确定。2、医务人员发生艾滋病病毒职业暴露后，区疾控中心应当会同相关医疗卫生单位对其进行随 访和咨询。随访和咨询的内容包括;在暴露后第4周、第8周、第12周及6个月时对艾 滋病病毒抗体进行检测,对服用药物的毒性进行监控处理,观察和记录艾滋病病毒感染的早 期症状等。不进行暴露后预防用药者,也要定期检测艾滋病病毒抗体,检测时间同上。3、在对艾滋病病毒职业暴露事件的整个处理过
28、程中，必须始终做好保密工作。凡涉及暴露者 个人的相关资料,不得向无关单位和人员泄露。四、暴露后预防性用药对发生艾滋病病毒职业暴露的医务人员应当根据暴露源病毒载量水平实施预防性用药方 案。预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在4小时内实施,最迟不 得超过24小时；即使超过24小时,也应当实施预防性用药。暴露后预防性用药的推荐方案:1、基本用药程序;两种逆转录酶抑制剂，使用常规治疗剂量,连续服用28天。如双汰芝（AZT与 3TC联合制剂）300 mg欠,每日2次，用药时间为连续服用28天。或参考抗病毒治疗指 导方案。本程序适用于轻度低危暴露。2、强化用药程序;基本用药程序加一种蛋
29、白酶抑制剂，如佳息患或利托那韦。均使用常规治疗剂量，连 续服用28天。本程序适用于严重暴露。鉴于医务人员暴露后的感染率很低而用药的毒、 副作用很大,所以应严格掌握用药的指征。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 15 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901职业暴露级别的评估编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901检验科项 目HIV
30、质理管理手册文件编号:YCXZYYJYK GLSC ()2页码:第一16 贞共77 页版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901第二部分标准操作规程GLSC_02-l!样品采集与处理、样本采集1、接患者申请单后,填写血样采集记录,记录包括患者日期、姓名、年龄、门诊 号、采集人签名等。2、用带分离胶的负压管采集一定量的静脉血,颠倒混匀56次,室温下自然放置 半小时,待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min。二、标本采集注意事项1、样本采集严格按静脉穿刺规范操作。2、采集样本时应注意安全，直接接触HIV感染/艾滋病病人血液的操作,应戴双 层手套,里层是PE手套,外层为乳胶
31、手套。三、样本保存在一周内检测的样本,可存放于28;在一周以后检测的样本,须存放于-20。四、样本运送1、样本运送一般为血清或血浆，不运送全血。2、容器要求:血清应置于带盖的1.5ml离心管内，管外应有明显的标记,姓名 与门诊号要清晰;在离心周围应垫有可缓冲吸水材料，以免破碎;随样品 应附有送检单，送检单应与样本分开放置。外层容器要求耐受性好、防渗漏、 容纳并保护第一层容器。3、天气过热,需采用干冰或冰壶冷藏运输。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间:20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第
32、一 17 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901GLSC_02-12 HIV项目标准操作程序、上海科华生物【方法】双抗原夹心酶联免疫法【原理】本试剂盒采用HIV特异性抗原gpl60和gp36等包被微孔反应板,用gp36, gp41标 记辣根过氧化物酶、采用双抗原夹心法捕获人血清、血浆标本中的HIV （1+2）抗体O【HIV筛査试验操作程序】（一） 试验前准备:1 .试验开始前将试剂和样品放置于室温（1823）半小时。2 .换隔离衣,戴好帽子、口罩、双层手套。3 .缓冲液配制:用蒸储水1： 25倍稀释，现用现配。或液体内有结晶,应放置在37c直至
33、溶解。（二）试验操作:1、装好所需使用数目的孔条。设空白对照孔2孔，2个阴性对照孔,3个HIV-1阳性对照孔。2、每孔加入lOOul待检样品及对照（对照要后加），可振摇15S。3、覆盖粘胶纸，372孵育602mino4、置洗板机上洗涤5遍（用洗液将反映孔完全加满，静置30S,共洗涤5遍，洗完后孔上方 及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干）。5、每孔加酶结合物lOOul,取新粘胶纸覆盖反应板，372孵育30mino6、同步骤47、每孔加入底物缓冲液50ul, TMB50ul,混匀,不必覆盖粘胶纸，372孵育lOmin。8、每孔加入5Oul lmol/L硫酸终止反应，充分混匀。9、在2h内置于酶标
34、仪读数，单波长450nm,或双波长450/630nm测OD值。（三）试验结果1、NC0.082、Cut off值=阳性对照值x 10%3、标本OD值小于Cut off为阴性，大于或等于Cut off为阳性（四）报告:对呈阴性反应的样品,可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告:对呈阳性反应 的样品,须进行复检，不能出阳性报告。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 18 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:2017
35、0901二、英科新创【方法】胶体金法【原理】本试剂盒采用胶体金免疫技术和层析原理,定性测定血清样本中的HIV1/2型抗体。血清阳性样本中HIV抗体与胶体金标记抗原结合形成复合物,由于层析作用复合物 沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的重组Au-HIV （1+2） -Ag则在对照线 处与抗HIV单克隆抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，30分钟内 观察结果即可。【HIV筛査试验操作程序】（-） 试验前准备:1、试验开始前将试剂和样品放置于室温（1823）半小时，编号。2、戴好帽子、罩、双层手套。3、将所需测试卡从包装盒中取出，置于台面上。（二）试验操作:1、用微量加样器取60ul样
36、本血清，加到测试卡的加样处。2、加样后,阳性标本可在130分钟内检出。30分钟后观察结果将造成影响。（三）试验结果阳性:测试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测的紫红色条带隐约可见， 应用酶免试剂重复检测。阴性：测试卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。失效：对照区未出现紫红色条带。【方法】双抗原夹心酶联免疫法【原理】采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的HIV抗体。当待检样本中存在HIV 抗体时,在反应过程中形成“固相HIV抗原一HIV抗体酶标记HIV抗原”的免疫 复合物，加入底物后形成显色反应。【HIV筛査试验操作程序】（一）试验前准备：1 .试验开始前将试剂和样品放置于
37、室温（1825. 半小时，编号。2 .换隔离衣，戴好帽子、罩、双层手套。3 .缓冲液配制:用蒸储水1： 19倍稀释，现用现配。或液体内有结晶,应放置在37直至编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX时间：20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GISC 02页码:第一 19 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901溶解。（-）试验操作1 .按顺序分别在相应孔加入50ul待测样品及阴、阳性对照血清。2 .覆上封板膜,置37温育30min.3 .用洗涤液充分洗涤5次（每次应保持3
38、060秒浸泡时间）,扣干。4 .分别在每孔中加入酶标抗原IOOul。5 .覆上封板膜，置37温育30min。6 .用洗涤液充分洗涤5次（每次应保持3060秒浸泡时间），扣干。7 .每孔加底物A、B各50uL轻拍混匀,覆上封板膜,置37暗置20min。8 .每孔加入终止液50ul。9 .用酶标仪测定。（三）试验结果1 .阳性对照值应大于阴性对照值0.6以上且阴性对照值小于方可认为本实验有效。2 .Cutoffvalue=0.1+阴性对照均值（若阴性对照小于0.05以0.05计）3 .样品OD值大于或等于临界值为初筛阳性，小于临界值为阴性。编写者：XXX审核者:XXX批准者：XXX时间：20170
39、901时间：20170901时间：20170901XX县 中医院项目文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 20 页,共7?页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生效日期:20170901GLSC_02-13 HIV结果报告与注意事项【复检试验】对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检 测。如两种试剂复测均呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反应,或阴阳, 需送艾滋病确认实验室进行确认。(具体详见流程图)【筛试验结果的报告】对HIV抗体筛查试验,呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告。对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告
40、,可出具“HIV抗体待复查”报告。【初筛试验呈阳性反应样品的转送】如需送上级实验室进行复测或确认,需要填写“HIV抗体复测送检单”,经1名检验人员和1 名具有中级以上技术职称的人员审核签字，与血样品一同送XX县疾控中心实验室，再转送市 疾控中心艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。【操作台消毒处理】用35%84消毒液擦拭台面，如工作台被溢出物污染,则用消毒液浸泡30分钟后，再行 擦拭。【房间消毒】每日用紫外线照射3060min【方法学特性及注意事项】a) 试剂盒430干燥保存。有效期16个月。b) 抗凝全血应采用EDTA,样品应避免溶血。c) 样品应在收集后7天内检测，28保存
41、,如果大于7天，应冷冻保存。d) 测试卡仅用于HIV抗体的现场初筛,检测阳性必须用ELISA方法进步确认。e) 样本的加样应使用微量加样器准确加入。f) 实验环境应保持一定湿度、避风,1825进行。g) 本试剂盒应视为有感染源的物品,应按生物危险样品处理。【血清加样表】见附表。每次检测完毕需填写血清加样表，由审核者签字复核,存档，以备查。编写者:XXX审核者:XXX批准者:XXX! 时 间:20170901时 间：20170901时 间：20170901XX县 中医院项冃文件编号:YCXZYYJYK GLSC 02页码:第一 21 页,共77页检验科HIV质理管理手册版本:第2版,第2次修订生
42、效日期：20170901GLSC_02-14 HIV检测室内质控的标准操作规程【目的】规范传染病免疫检验室内质量控制。sop文件的更改】该标准操作程序的更改,可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后 生效。【操作步骤】、室内质控品的选择理想的室内质控品至少应具备以下特点:人血清基质;无传染性;瓶间变异小,CV%1%； 冻干品复溶后稳定性好，多数项目2-8C稳定7天,-20稳定30天;有效期应在1年以上。 二、质控品的正确使用与保存严格按质控品说明书操作和保存,不使用超过保质期的质控品;冻干质控品的复溶确保 所用溶剂的质量和所加溶剂量的准确性，复溶时应轻轻摇匀,使内容物完全溶
43、解,切忌剧烈 振摇，防止泡沫产生,复溶时间不得少于20分钟;质控品要在与患者标本同样测定条件下进 行测定;每天至少做一次质控品。三、室内质控图的绘制1 .均值和质控限的确定在开始室内质控时，首先要确定质控图的均值和质控限,将质控品与常规标本一起测定。 根据20次质控结果（每天开一瓶，一天测一次）,对数据进行离群值检验（剔除超过3s外的 数据）,计算出平均数和标准差，作为暂定均值和暂定标准差。以此暂定均值和标准差作为下个月室内质控图的均值和标准差进行室内质控；一个月 结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在起，计算累积平均数和累积标准 差（第一个月）,以此累积平均数和标准差作为下个月质控图的均值和标准差。重复上述操作过程,连续三至五个月。以最初20个数据和三至五个月在控数据汇集的所 有数据计算的累积平均数和标准差作为质控品有效期内的常规均值和标准差，并以此作为以 后室内质控图的均值和标准差。对稳定性较短的质控品，均值的建立可在3至4天内，每天分析每个水平质控品3至4 瓶，每瓶进行2至3次重复。收集数据后,计算平均数、标准差和变异系数。对数据进行离 群值检验（剔除超过3s的数据）。如果发现离群值，需重新计算余下数据的平均数和标准差。 以此均值作为质控图的均值。至于标准差,可采用以前变异系数（CV）来估计新的标准差。以编写者:XXX审核