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1、分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量微生物法电化学法高效液相色谱法、毛细管电泳法光分析法(紫外可见分光光度法、荧光分析法、化学发光法)GB 5009.85-2016 食品安全国家标准 食品中维生素B2的测定GB/T 36921-2018 牙膏中维生素B2、维生素B3和维生素B6的测定 高效液相色谱法2017年度国家自然科学奖年度国家自然科学奖一等奖一等奖聚集诱导发光聚集诱导发光维生素B2含量的测定：NNHNNOOOHOHOHHO2第一部分实验目的第二部分实验原理第三部分试剂和仪器第四部分实验步骤第五部分数据处理第六部分注意
2、事项第七部分思考题主 要 内 容主 要 内 容分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量一、实验目的一、实验目的1.掌握荧光分析法的基本原理；2.学习选择荧光激发和发射波长的方法；3.熟悉荧光分光光度计的构造、工作原理以及操作方法。分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量二二、实验原理、实验原理分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量电子由第一激发单重态单重态的最低最低振动能级振动能级基态(多为 S1 S0跃迁跃迁)，发射波长为2的荧光；发射荧光的能量比分子吸收的小，波长长；2 2 荧光寿命：10-910-7s S2S1S0T1吸收发射荧光发射磷光系间跨
3、越内转换振动弛豫能量 2 1 3外转换 2T2内转换振动弛豫二二、实验原理、实验原理分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量发射光谱发射光谱：当当固定激发光波长时，荧光物质发射的荧光强度与发射波长的关系曲线激发光谱：激发光谱：当固定发射光波长，荧光物质的荧光强度与激发波长的关系曲线激发光谱发射光谱二二、实验原理、实验原理分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量在很稀的溶液（即吸光度A bc0.05）中IFIF未知标准曲线法：=式中：K比例常数，与仪器性能有关；F荧光量子效率；I0入射光强度；k摩尔吸光系数；b液层厚度。(1)未知二二、实验原理、实验原理分子荧光光谱法
4、测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量维生素B2：水溶液在430-460 nm光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在535 nm左右在pH 6-7的溶液中荧光强度最大在pH 11的碱性溶液中荧光消失NNHNNOOOHOHOHHO控制在酸性范围内，且须在避光条件下进行三、试剂和仪器1.试剂试剂10.0 mgL-1维生素B2储备液；医用维生素B2片剂；10 mLL-1醋酸溶液。2.仪器仪器25 mL 棕色容量瓶8个；1 cm荧光比色皿；5 mL 移液枪；荧光光谱仪。分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量三、试剂和仪器分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量激发激发单色器单
5、色器（滤光片）（滤光片）样品池样品池发射发射单色器单色器（滤光片）（滤光片）检测器检测器显示显示光光源源荧光光谱仪由激发光源、样品池、双单色器系统、检测器等组成。光源：高压汞灯、高压氙灯激发单色器：选择激发光波长发射单色器：选择发射光波长1.样品溶液的配制维生素B2 储备液(10.0 mgL-1)：待测液：2.维生素B2标准溶液的配制四、实验步骤分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量标准溶液系列1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL维生素B2储备液储备液维生素B210.0 mg10 mL L-1醋酸溶解10 mL L-1醋酸(1000 mL 棕色容量瓶)待测液维
6、生素B2片4片(5 mg/片)适量，10 mL L-1醋酸(100 mL 棕色容量瓶)10 mL 棕色容量瓶移取1.00 mL 溶液至3.测试条件选择分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量仪器参数确定：设置合适的激发狭缝、发射狭缝宽度和扫描速度；测试波长选择：用移液枪准确吸取维生素B2储备液1 mL于25 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。用荧光光谱仪在300700 nm波长范围内进行激发光谱和发射光谱的扫描，选出最大激发波长和最大发射波长。四、实验步骤4.标准曲线和待测样品测试分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量(1)标准曲线测试：在最大激发波长、最大发射波长下
7、，分别测定维生素B2标准溶液的荧光强度，绘制标准曲线。(2)待测样品测试：按步骤2的方法，取3个25 mL容量瓶，用移液枪准确吸取待测液适量配制溶液，并在相同条件下测定荧光强度。平行测定3份。四、实验步骤五、数据处理分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量1.记录各步测定的实验条件及测量数据。2.由激发光谱和发射光谱，确定最大激发波长和最大发射波长。3.根据维生素B2标准溶液的荧光强度和浓度，绘制标准曲线。4.由标准曲线，求得待测液中的维生素B2含量，进而计算出医用维生素B2片剂中维生素B2的含量。六、注意事项1.不得随意挪动和晃动荧光光谱仪，以防仪器光学器件损坏或松动；仪器关闭
8、后，如需重新开机，请等待60 秒后进行。2.维生素B2溶液在光照下易分解，需避光放置，且不易存放太久；配制好的标准溶液最好在20 分钟内进行测试。分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量3.实验所用样品池是四面透光的石英池，使用时拿住池体的上角部，手指不要接触到石英池的四个面；使用时用擦镜纸对其四个面轻轻擦拭；使用后用去离子水和无水乙醇清洗后，晾干。151.荧光产生的原理是什么？荧光产生的条件有哪些？2.怎样选择测定样品的激发波长和发射波长？3.影响试样荧光强度的因素有哪些？4.与紫外-可见分光光度法不同，在荧光测试时，为什么激发光的入射与荧光的检测不在一条直线上，而是成直角的？5.为什么在高浓度条件下分子荧光的标准曲线会弯曲？七、思考题分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量17谢谢分子荧光光谱法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量