《(5.1)--实验五、细菌的药敏试验预防兽医学实验.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《(5.1)--实验五、细菌的药敏试验预防兽医学实验.pdf（24页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、预防兽医学实验预防兽医学实验 兽医微生物学和免疫学实验兽医微生物学和免疫学实验 实验五实验五 细菌的药敏试验细菌的药敏试验 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 一、实验目的一、实验目的 1、掌握纸片扩散法药敏试验的、掌握纸片扩散法药敏试验的原理和原理和操作方法。操作方法。2、了解药敏试验、了解药敏试验在实际生产中的重要在实际生产中的重要意义。意义。实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 二、实验原理二、实验原理 药物敏感试验药物敏感试验简称简称药敏试验（或耐药试验）药敏试验（或耐药试验）。旨在了解病原微生物旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感（或耐对各种抗生素的敏感（或耐受）程
2、度，受）程度，以以指导临床合理选用抗生素药物指导临床合理选用抗生素药物的微的微生物学试验。生物学试验。一种抗生素如果以很小的剂量便可抑制、杀一种抗生素如果以很小的剂量便可抑制、杀灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。“敏感”。反之，则称为反之，则称为“不敏感”或“耐药”“不敏感”或“耐药”。为了解致。为了解致病菌对哪种抗菌素敏感，以合理用药，减少盲目病菌对哪种抗菌素敏感，以合理用药，减少盲目性，往往应进行药敏试验。性，往往应进行药敏试验。实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 由于致病菌对各种由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同抗生素的敏感程度不同
3、，在，在药物纸片周围便药物纸片周围便出现不同大小的抑制病菌生长而出现不同大小的抑制病菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈大小与致抑菌圈大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。因此因此可以根据试验结果有针对性地选用抗生素。可以根据试验结果有针对性地选用抗生素。目前滥用抗生素，致使抗药菌增加，甚至因长目前滥用抗生素，致使抗药菌增加，甚至因长期大量使用广谱抗生素，杀伤体内正常微生物，期大量使用广谱抗生素，杀伤体内正常微生物，失去微生物的相互制约作用，从而使一些少见的失去微生物的相互制约作用，从而使一些少见的或一般情况下的非
4、致病菌大量繁殖，引起所谓或一般情况下的非致病菌大量繁殖，引起所谓“二次感染”“二次感染”，给临床防治带来很大的困难。因，给临床防治带来很大的困难。因此，此，提倡使用药敏试验，坚持合理用药十分重要。提倡使用药敏试验，坚持合理用药十分重要。二、实验原理二、实验原理 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 药敏试验主要药敏试验主要参考参考美国临床和实验室标准协会美国临床和实验室标准协会（CLSI）的标准）的标准，前身为美国临床实验室标准化委，前身为美国临床实验室标准化委员会（员会（NCCLS）。）。常用方法有：常用方法有：纸片琼脂扩散法（纸片琼脂扩散法（K-B法）、稀释法）、稀释法、法、牛津杯
5、法、牛津杯法、E试验、检测细菌耐药性的方法。检试验、检测细菌耐药性的方法。检测细菌耐药性的方法包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌测细菌耐药性的方法包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检测、耐万古霉素肠球菌（的检测、耐万古霉素肠球菌（VER）的检的检测、耐青霉素肺炎链球菌（测、耐青霉素肺炎链球菌（PRP）的检测、超广谱的检测、超广谱-内酰胺酶（内酰胺酶（ESBL）的检测和的检测和-内酰胺酶的检测。内酰胺酶的检测。二、实验原理二、实验原理 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 三、实验准备三、实验准备 1、器材：、器材：剪刀、弯头镊子、灭菌棉签、游标卡剪刀、弯头镊子、灭菌棉签、游标卡尺、恒
6、温培养箱等。尺、恒温培养箱等。2、培养基：、培养基：琼脂平板琼脂平板（1片片/人）人）3、菌种：、菌种：大肠杆菌肉汤大肠杆菌肉汤 1管管/组组（注：注：6h6h液体培液体培养物养物）4、药敏纸片、药敏纸片 购买或自制。本次试验药敏纸片购自杭州天和购买或自制。本次试验药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司微生物试剂有限公司 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 四、实验内容及方法四、实验内容及方法（一）标记（一）标记 （二）涂布接种（二）涂布接种 （三）贴片（三）贴片 （四）培养（四）培养 （五）结果判定（五）结果判定 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 （一）标记（一）标记
7、纸片之间间距纸片之间间距适中适中 四、实验内容及方法四、实验内容及方法 用记号笔在琼脂用记号笔在琼脂平板背面标记出要贴平板背面标记出要贴药敏纸片的位置，药敏纸片的位置，药药敏纸片之间间距应大敏纸片之间间距应大于于18毫米以上毫米以上，不能，不能过密，也不能紧靠平过密，也不能紧靠平板边缘。板边缘。实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 纸片之间间距纸片之间间距太密太密 四、实验内容及方法四、实验内容及方法 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 四、实验内容及方法四、实验内容及方法 （二）涂布接种（二）涂布接种 注：要涂抹注：要涂抹均匀均匀 用灭菌棉签沾取用灭菌棉签沾取0.5麦麦氏浊
8、度的试管肉汤菌液氏浊度的试管肉汤菌液，均，均匀的涂布于琼脂平板表面，匀的涂布于琼脂平板表面，需需重复来回重复来回3次涂布接种次涂布接种，第第1次涂布接种后旋转次涂布接种后旋转60度度进行进行2次涂布接种，然后同次涂布接种，然后同方向旋转方向旋转60度后进行度后进行3次涂次涂布接种。布接种。实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 涂布接种涂布接种 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 四、实验内容及方法四、实验内容及方法 （三）贴片（三）贴片 用无菌弯头镊子用无菌弯头镊子将各种药敏纸片分将各种药敏纸片分别平贴在培养基的别平贴在培养基的表面，表面，纸片之间距纸片之间距离应相等离应相等
9、。青青 链链 卡卡 氟氟 环环 强强 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 贴片贴片 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 四、实验内容及方法四、实验内容及方法 （四）培养（四）培养 将贴好药敏纸将贴好药敏纸片的平板放片的平板放37温箱培养，温箱培养，24h观观察结果。察结果。恒温培养箱恒温培养箱 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 四、实验内容及方法四、实验内容及方法 （五）结果判定（五）结果判定 用游标卡尺测量药敏纸片周围的抑菌圈用游标卡尺测量药敏纸片周围的抑菌圈直径，直径，根据抑菌圈直径大小判定该菌对哪种根据抑菌圈直径大小判定该菌对哪种药物的敏感程度药物的敏感程
10、度，分为，分为敏感、中介和耐药敏感、中介和耐药三三种结果。种结果。实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 纸片法药敏试验结果判定表纸片法药敏试验结果判定表 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 纸片法药敏试验结果纸片法药敏试验结果 注：用游标卡尺测量抑菌圈直径大小（注：用游标卡尺测量抑菌圈直径大小（mm）实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 牛津杯法抑菌实验结果牛津杯法抑菌实验结果 注：此法适合于液体药物注：此法适合于液体药物 实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 肉汤稀释法肉汤稀释法抑菌实验结果抑菌实验结果 注：可定注：可定量测抗菌药物最低抑菌浓度。量测抗菌药物
11、最低抑菌浓度。实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 五、注意事项五、注意事项 1、在、在无菌条件下无菌条件下进行实验操作。进行实验操作。2、涂布接种时要反复多次，、涂布接种时要反复多次，需均匀涂布整个琼脂平需均匀涂布整个琼脂平板表面。板表面。3、药敏纸片一旦接触培养基表面，、药敏纸片一旦接触培养基表面，不可重新移动位不可重新移动位置，置，防止不同抗生素交叉影响。防止不同抗生素交叉影响。4、贴片时、贴片时可用镊子轻轻按压一次可用镊子轻轻按压一次药敏纸片表面，使药敏纸片表面，使之与培养基充分接触。之与培养基充分接触。5、镊子取纸片前或使用后应在酒精灯外焰烧、镊子取纸片前或使用后应在酒精灯外焰烧灼灭菌灼灭菌。6、整个贴片过程应、整个贴片过程应在在15 min内完成内完成。实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 六、思考题六、思考题 1、影响药敏试验结果的因素有哪些？、影响药敏试验结果的因素有哪些？2、药敏试验在畜禽养殖场中有何意义？、药敏试验在畜禽养殖场中有何意义？3、分析药敏试验结果与临床实际用药不分析药敏试验结果与临床实际用药不一致的原因一致的原因？实验五、细菌的药敏实验五、细菌的药敏试验试验 实验要求实验要求 1、以组为单位，每人、以组为单位，每人1个平板。个平板。2、写出试验的原理，观察并分析试写出试验的原理，观察并分析试验结果。验结果。