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1、无菌药品生产验证无菌药品生产验证(ynzhng)(ynzhng)中中的的有关问题讨论有关问题讨论杭州澳亚生物杭州澳亚生物(shngw)(shngw)技术有限公司技术有限公司 徐全徐全华华电话：电话：86913427、13082806619 邮箱：邮箱：xqh_第一页，共一百一十五页。一、干热一、干热(n r)n r)灭菌的基础理论灭菌的基础理论第二页，共一百一十五页。1、干热灭菌、干热灭菌(mi jn)(mi jn)热穿透性指标热穿透性指标FHH值的概念及计算公式值的概念及计算公式1.1 F1.1 FH H值概念：值概念：F FH H是干热灭菌的杀菌热力强度，系参照基准温度是干热灭菌的杀菌热力
2、强度，系参照基准温度T T0 0=170=170 下的干燥灭菌时间得出，以分钟下的干燥灭菌时间得出，以分钟(min)(min)来表示来表示 。1.2 1.2 计算公式：计算公式：F FH H=t t 1010（T T1 1-T-T0 0）/Z/Z 式中：式中：T T1 1-每个时间点实测温度；每个时间点实测温度；T T0 0-灭菌保证温度（基准温度），取灭菌保证温度（基准温度），取170170。Z-Z-温度变化升高的灭菌率。如果温度变化升高的灭菌率。如果(rgu)(rgu)以去热原为目的，以去热原为目的，Z Z值取值取 54 54；如果以灭菌为目的，；如果以灭菌为目的，Z Z值取值取2020；
3、t-t-灭菌时间，以分钟来计算。如果每半分钟取一个数据，则灭菌时间，以分钟来计算。如果每半分钟取一个数据，则 t t为为0.50.5；如果；如果5 5秒钟取一个数据，则秒钟取一个数据，则t t为为1/121/12，代表每代表每 个时间段个时间段F FH H值的累加值。值的累加值。第三页，共一百一十五页。2.中国药典中国药典2005年版二部附录年版二部附录灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)法法中中“干热灭菌干热灭菌(mi jn)(mi jn)法法”的要求以及的要求以及FHH值的计算值的计算 本法本法(bn f)(bn f)系指将物品置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气系指将物品置于
4、干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。不同灭菌程序的不同灭菌程序的F FH H值值程序程序F FH H杀菌值杀菌值F FH H灭内毒素值灭内毒素值温度温度时间时间计算值计算值效率效率计算值计算值效率效率160 160 120min120min37.937.90.0080.00878.378.35.75.7170 170 120.0120.00.030.03120.0120.08.88.8170 170 60min60min60.060.00.0130.01360.060.04.44.4180 180 189.7189
5、.70.040.0491.991.96.76.7250 250 45min45min4.5104.51051001001363.61363.6100100也可采用其它灭菌程序也可采用其它灭菌程序根据温度和时间计算根据温度和时间计算第四页，共一百一十五页。3、干热、干热(n r)n r)灭菌灭菌FHH值的标准值的标准 （1 1）对于不直接接触药品的不锈钢器具（如冻干托盘、框）对于不直接接触药品的不锈钢器具（如冻干托盘、框架或胶塞桶等）架或胶塞桶等）,应从灭菌的角度考虑，最低应从灭菌的角度考虑，最低要求为：要求为：F FH H37.937.9,最高要求最高要求F FH H 189.7 189.7，
6、从灭菌的风险性考虑应选择，从灭菌的风险性考虑应选择F FH H 189.7 189.7。我们对这些物品。我们对这些物品(wpn)(wpn)的灭菌采用的灭菌采用25025030min30min的灭的灭菌程序，计算所得的菌程序，计算所得的F FH H=3.0=3.010105 5。（2 2）对于直接接触药品的内包材（如玻璃瓶），应从杀内）对于直接接触药品的内包材（如玻璃瓶），应从杀内毒素的角度考虑，毒素的角度考虑，F FH H13631363。第五页，共一百一十五页。在一定温度下达到在一定温度下达到FH值值1363所需要所需要(xyo)(xyo)的时间的时间温度（温度（）时间（时间（minmin）
7、28028012.512.528528510.110.12902908.28.22952956.66.63003005.35.33053054.34.33103103.53.53153152.82.83203202.32.33253251.81.83303301.51.5第六页，共一百一十五页。4.中国药典附录中国药典附录 灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)法中法中“干热干热灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)法法”对细菌内毒素挑战试验的要求对细菌内毒素挑战试验的要求 干热灭菌法干热灭菌法 细菌内毒素灭活验证试验是证明除热原过程有效性的试验。一般将性的试验。一般将不小于1000单位的细菌内毒
8、素加加入待去热原的物品入待去热原的物品(wpn)(wpn)中，证明该去热原工艺能中，证明该去热原工艺能使内毒素至少下降素至少下降3 3个对数单位个对数单位。细菌内毒素灭活验证试验所用的细菌内毒素一般为大肠埃希菌内毒素(Escherichia coli endoxin）。第七页，共一百一十五页。5.美国药典美国药典(yodi(yodin)n)附录附录灭菌法及无菌保证灭菌法及无菌保证“干热灭菌法干热灭菌法”对细菌内毒素挑战试验的要求对细菌内毒素挑战试验的要求Dry-Heat Sterilization Dry-Heat Sterilization 干热灭菌法干热灭菌法 The test with
9、The test with LimulusLimuluslysate lysate could be used to demonstrate could be used to demonstrate that the endotoxic substance has that the endotoxic substance has been inactivated to not more been inactivated to not more than than 1/10001/1000of the original of the original amount(3log cycle redu
10、ction).amount(3log cycle reduction).用鲎试剂检测法可证实细用鲎试剂检测法可证实细菌内毒素含量失活不少于菌内毒素含量失活不少于1/10001/1000（3 3个对数单位个对数单位)。第八页，共一百一十五页。6.英国药典附录英国药典附录 灭菌法灭菌法“干热灭干热灭菌法菌法”对细菌内毒素挑战对细菌内毒素挑战(ti(tio zhn)o zhn)试验的要求试验的要求Dry heat sterilisation Dry heat sterilisation 干热灭菌法干热灭菌法干热灭菌法干热灭菌法 Dry heat at temperatures greater Dry
11、 heat at temperatures greater than 220C is frequently used for than 220C is frequently used for sterilisation and depyrogenation of sterilisation and depyrogenation of glasswareglassware。In this case In this case demonstration of a demonstration of a 3-log3-log reduction in reduction in heat resista
12、nt endotoxin can be used heat resistant endotoxin can be used as a replacement for biological as a replacement for biological indicatorsindicators 干热温度高于干热温度高于220220常常被用于玻璃器具的灭菌和被用于玻璃器具的灭菌和除热源。在这种情况下，除热源。在这种情况下，证实细菌内毒素下降证实细菌内毒素下降3 3个个对数单位，可用于代替生对数单位，可用于代替生物指示剂试验。物指示剂试验。第九页，共一百一十五页。6 6、ExcelExcel在在在在
13、FHFH值计算值计算值计算值计算(j sun)(j sun)中的应用中的应用中的应用中的应用（1 1）每个时间点的）每个时间点的）每个时间点的）每个时间点的FHFH值计算公式：值计算公式：值计算公式：值计算公式：F FH H=POWER(10,(C3)-170)/54)SECOND(=POWER(10,(C3)-170)/54)SECOND(B3-B3-B2)/60B2)/60 power power代表代表(dibio)(dibio)以以1010为底的幂为底的幂 ；C C3 3 代表第代表第2 2次记录时的温度；次记录时的温度；170 170 代表灭菌保证温度；代表灭菌保证温度；54 54
14、代表去热原的工值；代表去热原的工值；SECOND SECOND 代表秒；代表秒；B B3 3 代表第二次记录的时间；代表第二次记录的时间；B B2 2 代表第一次记录的时间；代表第一次记录的时间；60 60 秒转换成分钟。秒转换成分钟。次数次数(A)(A)时间时间(B)(B)通道通道1(C)1(C)通道通道2(C)2(C)温度温度 FH FH值值 温度温度 FH FH值值 1 1 2007-03-28 09:36:22 120 0.0 2007-03-28 09:36:22 120 0.0 94 0.0 94 0.0 2 2 2007-03-28 09:36:27 139 0.0 2007-0
15、3-28 09:36:27 139 0.0 94 0.0 94 0.0 3 3 2007-03-28 09:36:32 139 0.0 111 0.0 2007-03-28 09:36:32 139 0.0 111 0.0 4 4 2007-03-28 09:36:37 161 0.1 133 0.0 2007-03-28 09:36:37 161 0.1 133 0.0 5 5 2007-03-28 09:36:42 181 0.1 155 0.0 2007-03-28 09:36:42 181 0.1 155 0.0 6 6 2007-03-28 09:36:47 199 0.3 175
16、0.1 2007-03-28 09:36:47 199 0.3 175 0.1 7 7 2007-03-28 09:36:52 214 0.5 195 0.2 2007-03-28 09:36:52 214 0.5 195 0.2 8 8 2007-03-28 09:36:57 226 0.9 211 0.5 2007-03-28 09:36:57 226 0.9 211 0.5 9 9 2007-03-28 09:37:02 237 1.5 225 0.9 2007-03-28 09:37:02 237 1.5 225 0.9 10 10 2007-03-28 09:37:07 246 2.
17、1 236 1.4 2007-03-28 09:37:07 246 2.1 236 1.4 11 11 2007-03-28 09:37:12 253 2.9 246 2.1 2007-03-28 09:37:12 253 2.9 246 2.1 12 12 2007-03-28 09:37:17 260 3.9 254 3.0 2007-03-28 09:37:17 260 3.9 254 3.0 13 13 2007-03-28 09:37:22 266 5.0 260 3.9 2007-03-28 09:37:22 266 5.0 260 3.9 14 14 2007-03-28 09:
18、37:27 267 5.2 267 5.2 2007-03-28 09:37:27 267 5.2 267 5.2（2 2）总的）总的）总的）总的F FH H值在值在值在值在ExcelExcel的求和功能的求和功能的求和功能的求和功能 中得到。中得到。中得到。中得到。第十页，共一百一十五页。二、灭菌隧道烘箱二、灭菌隧道烘箱(hngxing)(hngxing)的验证的验证第十一页，共一百一十五页。1、灭菌隧道、灭菌隧道(sudo)(sudo)烘箱的基本情况烘箱的基本情况 1.1 1.1功能作用功能作用功能作用功能作用(zuyng)(zuyng)：玻璃管制注射剂瓶的干热灭菌和除热原玻璃管制注射剂瓶
19、的干热灭菌和除热原.。1.2 1.2结构：结构：结构：结构：由预热段、灭菌段、冷却段三部分组成。通过远由预热段、灭菌段、冷却段三部分组成。通过远红外加热管产生的热风空气由耐高温过滤器进行过滤后对红外加热管产生的热风空气由耐高温过滤器进行过滤后对玻璃瓶进行灭菌。玻瓶通过转动的网带走过三个段。玻璃瓶进行灭菌。玻瓶通过转动的网带走过三个段。1.3 1.3程序设定考虑的因素：程序设定考虑的因素：程序设定考虑的因素：程序设定考虑的因素：(1)(1)网带速度：直接影响玻璃在隧道中的运行时间网带速度：直接影响玻璃在隧道中的运行时间,应该以应该以企业确定的最大生产能力确定网带运行速度。企业确定的最大生产能力确
20、定网带运行速度。(2)(2)温度：在速度确定的情况下，设定加热管温度（通常为温度：在速度确定的情况下，设定加热管温度（通常为360360）和灭菌温度（）和灭菌温度（330330 ）第十二页，共一百一十五页。2 2、验证温度、验证温度(wnd)(wnd)(wnd)(wnd)探头的布点图探头的布点图方式方式(fngsh)(fngsh)一：一：方式二：方式二：方式三：方式三：隧道运动(yndng)方向隧道运动方向隧道运动方向第十三页，共一百一十五页。3、空载、空载(kn(kn z zi)i)热分布试验热分布试验 USP30 USP30：STERILIZATION AND STERILIZATION
21、AND STERILITY ASSURANCE OF COMPENDIAL STERILITY ASSURANCE OF COMPENDIAL ARTICLES“Dry-Heat Sterilization”ARTICLES“Dry-Heat Sterilization”可接受标准依据：可接受标准依据：美国药典美国药典3030版：灭菌法版：灭菌法及无菌保证。及无菌保证。A typical acceptable range in temperature A typical acceptable range in temperature in the empty chamber is 15 in
22、the empty chamber is 15 when the unit when the unit is operating at not less than 250is operating at not less than 250。当设备温度不小于当设备温度不小于250250时，在空腔中典型的温度可时，在空腔中典型的温度可接受范围为接受范围为15 15。（1 1）操作方法：将）操作方法：将1010支铂电阻探头按方式（三）布点后固定在网带上支铂电阻探头按方式（三）布点后固定在网带上方的打孔搁板上，按方的打孔搁板上，按SOPSOP进行预热，待达到控制温度后，开动网带，进行预热，待达到控制温度
23、后，开动网带，探头随不锈钢网带进入预热段、灭菌段、冷却段，程序结束，停止试验。探头随不锈钢网带进入预热段、灭菌段、冷却段，程序结束，停止试验。（2 2）测试次数：）测试次数：3 3次次（3 3）可接受标准：平均温度）可接受标准：平均温度250250以上时，热分布温差以上时，热分布温差 15 15。（4 4）统计计算：应统计）统计计算：应统计1010个探头同一时间点的温度平均值，并计算平个探头同一时间点的温度平均值，并计算平均值与最大值和最小值之间的极差。均值与最大值和最小值之间的极差。第十四页，共一百一十五页。4.空载空载(kn(kn z zi)i)热分布试验的经验体会热分布试验的经验体会 （
24、1 1）热分布的铂探头应予固定，不能与网带、搁板、或玻瓶接触，）热分布的铂探头应予固定，不能与网带、搁板、或玻瓶接触，否则会造成短路，数据不准确，试验失败。否则会造成短路，数据不准确，试验失败。（2 2）热穿透试验的）热穿透试验的FHFH值约为空载热分布的值约为空载热分布的2/32/3（经验值），热穿透（经验值），热穿透试验的试验的FHFH值可接受标准为：大于值可接受标准为：大于1363min1363min（一般设计在（一般设计在1800min1800min以以上），因此，尽管空载热分布研究温度分布均匀性，也必须进行上），因此，尽管空载热分布研究温度分布均匀性，也必须进行FHFH值值的计算，最
25、好在的计算，最好在2700min2700min以上，以保证热穿透的以上，以保证热穿透的FHFH值。值。（3 3）由于灭菌隧道烘箱运行不正常，造成温度探头在隧道的滞留，）由于灭菌隧道烘箱运行不正常，造成温度探头在隧道的滞留，FHFH值的不正常累加，应认为试验失败，应重新值的不正常累加，应认为试验失败，应重新(chngxn)(chngxn)试验。试验。（4 4）偶然的少数数据缺失，可以按统计学的要求进行缺失数据的弥）偶然的少数数据缺失，可以按统计学的要求进行缺失数据的弥补。补。(5)(5)由于温度探头与记录仪之间的导线很长，为了保证检测温度的由于温度探头与记录仪之间的导线很长，为了保证检测温度的准
26、确性，温度探头应该采用三线制的接法，而不应该采用二线制接法。准确性，温度探头应该采用三线制的接法，而不应该采用二线制接法。第十五页，共一百一十五页。5、满载热分布、满载热分布(fnb)(fnb)和热穿透试验和热穿透试验 满载热分布和热穿透试验可同时进行。满载热分布和热穿透试验可同时进行。4.14.1操作方法：操作方法：操作方法：操作方法：同空载热分布。但温度同空载热分布。但温度(wnd)(wnd)探头必须插入玻瓶的内部，但又探头必须插入玻瓶的内部，但又不能接触瓶壁。不能接触瓶壁。4.24.2测定次数：测定次数：测定次数：测定次数：3 3次次 4.34.3可接受标准：可接受标准：可接受标准：可接
27、受标准：(1)(1)热分布温差：热分布温差：热分布温差：热分布温差：1515。依据：由于满载和热穿透条件下，热空气对流受阻的原因，温度均匀性依据：由于满载和热穿透条件下，热空气对流受阻的原因，温度均匀性较空载时差，制订与空载相同的标准应该说要求更严格。较空载时差，制订与空载相同的标准应该说要求更严格。（2 2）F FH H1365min1365min。依据：依据：a.a.中国药典中国药典20052005年版二部干热灭菌法的除热原程序年版二部干热灭菌法的除热原程序250 250 45min45min计算计算所得。所得。b.b.国家发展改革委员会于国家发展改革委员会于2007-03-062007-
28、03-06发布了发布了JB/T20093-200JB/T20093-200）抗生素瓶）抗生素瓶表冷式隧道灭菌干燥机的制药机械行业标准，要求于表冷式隧道灭菌干燥机的制药机械行业标准，要求于2007-09-012007-09-01实施。在实施。在标准中：标准中：5 5、要求：、要求：5.5.45.5.4灭菌性能：灭菌性能：b b）热穿透性）热穿透性F FH H1365min1365min。第十六页，共一百一十五页。6、温度、温度(wnd)(wnd)无纸记录仪（整体图）无纸记录仪（整体图）生产厂家：北京金立石自动化仪表厂生产厂家：北京金立石自动化仪表厂第十七页，共一百一十五页。温度温度(wnd)(w
29、nd)无纸记录仪（正面图）无纸记录仪（正面图）第十八页，共一百一十五页。温度温度(wnd)(wnd)无纸记录仪（背面图）无纸记录仪（背面图）第十九页，共一百一十五页。6、细菌、细菌(xjn)(xjn)内毒素挑战试验内毒素挑战试验第二十页，共一百一十五页。6.1内毒素指示剂布点内毒素指示剂布点(b(b di din)n)方法方法按如下方法进行(jnxng)(jnxng)布点：预热(y r)段冷却段灭菌段12345第二十一页，共一百一十五页。6.2内毒素指示剂使用内毒素指示剂使用(sh(shyng)yng)方法方法 除去细菌除去细菌(xjn)(xjn)内毒素指示剂标签，折断易折安瓿内毒素指示剂标签
30、，折断易折安瓿瓶颈，用铝箔封闭瓶口，将内毒素指示剂按上述布点瓶颈，用铝箔封闭瓶口，将内毒素指示剂按上述布点方法布置，经过一个干热程序后测定残余内毒素量。方法布置，经过一个干热程序后测定残余内毒素量。第二十二页，共一百一十五页。6.3残余细菌残余细菌(xjn)(xjn)内毒素的检测内毒素的检测内毒素指示剂的标定：将未经干热的内毒素指示剂加内毒素指示剂的标定：将未经干热的内毒素指示剂加1.0ml1.0ml细菌内毒素细菌内毒素检查用水，置于漩涡混合器上混合检查用水，置于漩涡混合器上混合15min15min，1010倍稀释至接近倍稀释至接近(jijn)(jijn)所所选用的鲎试剂灵敏度，再选用的鲎试剂
31、灵敏度，再2 2倍梯度稀释成倍梯度稀释成44、22、11、0.50.5、0.250.25的的内毒素系列溶液，根据反应终点的稀释倍数计算可回收内毒素量。内毒素系列溶液，根据反应终点的稀释倍数计算可回收内毒素量。未经干热的内毒素稀释系列未经干热的内毒素稀释系列(如如2500EU/2500EU/支支)稀释倍数稀释倍数（D D）2500 2500 50005000100001000020000200004000040000内毒素浓度内毒素浓度（EU/mlEU/ml）1.01.00.50.50.250.250.1250.1250.060.06反应结果反应结果+-可回收内毒素可回收内毒素Rc=D1.0ml
32、=0.25100001.0=2500EU/Rc=D1.0ml=0.25100001.0=2500EU/瓶瓶第二十三页，共一百一十五页。将经干热将经干热(n r)(n r)的内毒素指示剂加的内毒素指示剂加1.0ml1.0ml细菌内毒素检查用水，细菌内毒素检查用水，置于漩涡混合器上混合置于漩涡混合器上混合15min15min，再作一次，再作一次1010倍稀释。倍稀释。稀释倍数（稀释倍数（D D）1 11010反应结果反应结果（1 1）-（2 2）+-D=1D=1时时:残余内毒素残余内毒素 Rs=D1.0ml Rs=D1.0ml0.2511.0 0.2511.0 0.25EU/0.25EU/瓶瓶内毒
33、素衰减内毒素衰减 lgRd=lgRc-lgRs lgRd=lgRc-lgRs lg2500-lg0.25 lg2500-lg0.25 4 4D=10D=10时时:残余内毒素残余内毒素 Rs=D1.0ml Rs=D1.0ml0.25101.0 0.25101.0 2.5EU/2.5EU/瓶瓶内毒素衰减内毒素衰减 lgRd=lgRc-lgRs lgRd=lgRc-lgRs lg2500-lg2.5 lg2500-lg2.5 3 3第二十四页，共一百一十五页。6.4内毒素指示剂检测内毒素指示剂检测(ji(jin c)n c)注意事项注意事项 内毒素指示剂必须与该批效价测定的鲎试剂配套使用，而不能单一
34、内毒素指示剂必须与该批效价测定的鲎试剂配套使用，而不能单一购买内毒素指示剂后与实验室其他批号的鲎试剂配套使用，因为购买内毒素指示剂后与实验室其他批号的鲎试剂配套使用，因为(yn wi)(yn wi)厂家提厂家提供的内毒素指示剂在效价测定时与相应批号的鲎试剂进行检定。如湛江供的内毒素指示剂在效价测定时与相应批号的鲎试剂进行检定。如湛江安度斯的情况：安度斯的情况：购买的内毒素指示剂必须用配套的鲎试剂按中国药典细菌内毒购买的内毒素指示剂必须用配套的鲎试剂按中国药典细菌内毒素检查法进行鲎试剂灵敏度复核试验。素检查法进行鲎试剂灵敏度复核试验。高浓度的内毒素指示剂强烈地粘附在安瓿壁上，除用漩涡混合器混高浓
35、度的内毒素指示剂强烈地粘附在安瓿壁上，除用漩涡混合器混合十五分钟以上外，用移液枪强烈打碎混匀。合十五分钟以上外，用移液枪强烈打碎混匀。内毒素指示剂批号及效价内毒素指示剂批号及效价相应的鲎试剂批号及灵敏度相应的鲎试剂批号及灵敏度0702090 2500EU/0702090 2500EU/支支0606271 0.25EU/0606271 0.25EU/支支0802290 1500EU/0802290 1500EU/支支0801182 0.125EU/0801182 0.125EU/支支第二十五页，共一百一十五页。6.56.5标准细菌标准细菌(xjn)(xjn)(xjn)(xjn)内毒素指示剂与鲎试
36、剂内毒素指示剂与鲎试剂生产厂家：湛江安度斯生物有限公司生产厂家：湛江安度斯生物有限公司生产厂家：湛江安度斯生物有限公司生产厂家：湛江安度斯生物有限公司(yu xin n s)(yu xin n s)湛江市人民大道中湛江市人民大道中湛江市人民大道中湛江市人民大道中3838号号号号第二十六页，共一百一十五页。7、灭菌隧道、灭菌隧道(sudo)(sudo)烘箱验证的体会烘箱验证的体会7.1 7.1 现有的灭菌隧道烘箱一般为洗烘灌联动线，如联动线运行不现有的灭菌隧道烘箱一般为洗烘灌联动线，如联动线运行不 正常造成中途停滞，应重新验证，因为中途停滞会造成正常造成中途停滞，应重新验证，因为中途停滞会造成F
37、HFH值值 的累加。的累加。7.2 7.2 负载热分布和热穿透试验，温度探头插入玻瓶中，由于热空负载热分布和热穿透试验，温度探头插入玻瓶中，由于热空 气对流受影响，因些满载气对流受影响，因些满载FHFH值低于空载值低于空载FHFH，在空载热分布，在空载热分布 试验结束时，可对试验结束时，可对FHFH值进行预计算，如果值进行预计算，如果FHFH值过低，需调整灭值过低，需调整灭 菌程序。菌程序。7.3 7.3 由于热电偶与温度记录仪的连接导线比较长，一般为由于热电偶与温度记录仪的连接导线比较长，一般为8 810m(10m(设设 备长度备长度5.5m)5.5m)，距离较长，为了消除连接导线电阻变化距
38、离较长，为了消除连接导线电阻变化(binhu)(binhu)的影响，的影响，热电偶接法应为三线制接接法，不应为二线制接法，否则温度测热电偶接法应为三线制接接法，不应为二线制接法，否则温度测 定误差较大。定误差较大。7.47.4热电偶在运行使用中不应与腔室内金属等接触，避免造成短路。热电偶在运行使用中不应与腔室内金属等接触，避免造成短路。7.5 7.5 内毒素挑战试验可以代替生物指示剂挑战试验。内毒素挑战试验可以代替生物指示剂挑战试验。第二十七页，共一百一十五页。三三.百级净化热风百级净化热风循环循环(xnhun)(xnhun)烘箱的验证烘箱的验证第二十八页，共一百一十五页。1.百级净化热风循环
39、烘箱的基本百级净化热风循环烘箱的基本(jbn)(jbn)情情况况 1.11.1功能：用于不锈钢桶（盛装功能：用于不锈钢桶（盛装(shngzhung)(shngzhung)灭菌胶塞）、冻干灭菌胶塞）、冻干盘、框盘、框 架等金属物品的灭菌。架等金属物品的灭菌。1.2 1.2结构：加热器、风机、耐高温过滤器、温度控制器及记录结构：加热器、风机、耐高温过滤器、温度控制器及记录仪、程序计时控制器。仪、程序计时控制器。1.3 1.3程序设定：由于以灭菌为最终目的的干热灭菌，考虑程序设定：由于以灭菌为最终目的的干热灭菌，考虑采用中国药典干热灭菌法的灭菌程序，温度设定值应适当采用中国药典干热灭菌法的灭菌程序，
40、温度设定值应适当高于中国药典规定的灭菌温度，或者延长灭菌时间。高于中国药典规定的灭菌温度，或者延长灭菌时间。第二十九页，共一百一十五页。2、空载、空载(kn(kn z zi)i)热分布试验热分布试验 （1 1）布点方法：）布点方法：（2)2)操作方法：将操作方法：将1010支热电偶通过验证孔插入箱体内，按上述布点方法进支热电偶通过验证孔插入箱体内，按上述布点方法进行布点，其中行布点，其中(qzhng)(qzhng)的一支热电偶应位于设备自身控制系统的温度传感器附近，的一支热电偶应位于设备自身控制系统的温度传感器附近，按按SOPSOP启动灭菌程序。启动灭菌程序。（3 3）可接受标准：热分布温差）
41、可接受标准：热分布温差1515。（4 4）测试次数：测试次数：3 3次。次。12354768910127893412789第三十页，共一百一十五页。3、负载、负载(fzi)(fzi)热分布和热穿透试验热分布和热穿透试验 （1 1）操作方法：应考虑）操作方法：应考虑(kol)(kol)平时生产中的最大装载，平时生产中的最大装载，把把温度探头插入灭菌物品的内部（如冻干盘上下盖相合的温度探头插入灭菌物品的内部（如冻干盘上下盖相合的中央，不锈钢桶即用桶盖盖上）。中央，不锈钢桶即用桶盖盖上）。（2 2）可接受标准：）可接受标准：F FH H（按灭菌计算）（按灭菌计算）190190。（3 3）测定次数：）
42、测定次数：3 3次次第三十一页，共一百一十五页。4、生物指示剂挑战、生物指示剂挑战(ti(tio zhn)o zhn)试验试验 4.1 4.1布点位置布点位置(wi zhi)(wi zhi)：每层放置：每层放置4 4个，考虑放置在个，考虑放置在F FH H值较低的值较低的部位。部位。4.2 4.2 方法：采用枯草黑色变种芽孢生物指示剂方法：采用枯草黑色变种芽孢生物指示剂（ATCC9372ATCC9372），含菌量：），含菌量：5105105 56 6/片。菌片放入培养片。菌片放入培养皿中，灭菌程序结束，取出培养皿，无菌条件下将菌片皿中，灭菌程序结束，取出培养皿，无菌条件下将菌片放入配套的液体培
43、养基管中。放入配套的液体培养基管中。4.3 4.3 可接受标准：阳性对照菌片有菌生长（培养液由粉可接受标准：阳性对照菌片有菌生长（培养液由粉红色变黄色）；灭菌菌片无菌生长（培养液颜色未变红色变黄色）；灭菌菌片无菌生长（培养液颜色未变化）。化）。第三十二页，共一百一十五页。5.5.微生物挑战性试验微生物挑战性试验微生物挑战性试验微生物挑战性试验(shyn)(shyn)结果结果结果结果第三十三页，共一百一十五页。四、湿热灭菌四、湿热灭菌(mi jn)(mi jn)柜的验证柜的验证第三十四页，共一百一十五页。1.脉动脉动(midng)(midng)真空压力蒸汽灭菌柜的基本情况真空压力蒸汽灭菌柜的基本
44、情况 1.1 1.1功能：用于注射剂生产的部分辅助物料的灭菌，包括：除菌功能：用于注射剂生产的部分辅助物料的灭菌，包括：除菌过滤器、填充机械部件过滤器、填充机械部件(bjin)(bjin)（陶瓷泵或玻璃泵）、连接胶管、工作服（陶瓷泵或玻璃泵）、连接胶管、工作服装、清洁用品（洁具）。装、清洁用品（洁具）。1.2 1.2结构：真空系统、工业蒸气系统、纯蒸汽系统、压缩空气系结构：真空系统、工业蒸气系统、纯蒸汽系统、压缩空气系统。统。1.3 1.3程序设定：采用饱和蒸汽程序设定：采用饱和蒸汽-预真空程序。包括：空气去除预真空程序。包括：空气去除-充充蒸汽蒸汽-灭菌灭菌-抽蒸汽抽蒸汽-干燥干燥-真空解除
45、六个阶段。真空解除六个阶段。湿热灭菌包括两种方法：过度杀灭法（湿热灭菌包括两种方法：过度杀灭法（The OverkillThe OverkillMethodMethod）和生物负载法）和生物负载法/残存概率法残存概率法(The Bioburden Method)(The Bioburden Method)。根据湿热灭菌工艺决策树，这些物品可以采用过度杀灭根据湿热灭菌工艺决策树，这些物品可以采用过度杀灭工艺，为保证一定的安全系数，我们选用工艺，为保证一定的安全系数，我们选用122 122 20min 20min工艺。工艺。第三十五页，共一百一十五页。2、10支热电偶的布点支热电偶的布点(b(b
46、di din)n)方法方法 将灭菌腔室纵向横切将灭菌腔室纵向横切3 3个平面个平面(pngmin)(pngmin)-A-A面、面、B B面和面和C C面。面。A A面面（1 1、2 2、3 3、4 4）和）和C C面（面（5 5、6 6、7 7、8 8）分别靠近十万级洁）分别靠近十万级洁净面和无菌万级洁净面，各面的净面和无菌万级洁净面，各面的4 4角为灭菌车筐的顶点。角为灭菌车筐的顶点。B B面为灭菌车的中央，面为灭菌车的中央，9 9号探头位于号探头位于B B切面的中心点。切面的中心点。1010号探号探头位于灭菌器温度控制和记录的传感器旁。头位于灭菌器温度控制和记录的传感器旁。12349567
47、8A面B面C面第三十六页，共一百一十五页。3.空载空载(kn(kn z zi)i)热分布热分布 3.1 3.1操作方法：将操作方法：将1010支温度探头通过验证孔伸入灭菌支温度探头通过验证孔伸入灭菌室内，按上述布点方式进行布点，按室内，按上述布点方式进行布点，按SOPSOP启动灭菌程序。启动灭菌程序。2.2 2.2可接受标准：保温灭菌段热分布温差可接受标准：保温灭菌段热分布温差1.01.0。2.3 2.3测试测试(csh)(csh)次数：次数：3 3次。次。第三十七页，共一百一十五页。4.满载满载(m(mnzi)nzi)热分布热分布 4.1 4.1操作方法：同空载热分布，考虑操作方法：同空载热
48、分布，考虑(kol)(kol)生产中的最大装生产中的最大装载。载。4.2 4.2可接受标准：保温灭菌段热分布温差可接受标准：保温灭菌段热分布温差1.51.5 。4.3 4.3测试次数：测试次数：3 3次。次。第三十八页，共一百一十五页。5.热穿透热穿透(chun tu)(chun tu)试验试验 5.15.1操作方法：同满载热分布，将温度探头操作方法：同满载热分布，将温度探头(tn tu)(tn tu)放入灭菌物放入灭菌物品的中心部位。品的中心部位。5.2 5.2可接受标准：可接受标准：F F0 015 15。5.3 5.3测试次数：测试次数：3 3次。次。第三十九页，共一百一十五页。F0 0
49、值的计算值的计算(j sun)(j sun)有些有些(yuxi)(yuxi)温度验证仪软件没有温度验证仪软件没有F F0 0值的计算功能，数据值的计算功能，数据导入导入ExcelExcel中，可用下列公式计算：中，可用下列公式计算：F F0 0 t10t10（T T1 1-121-121）/10/10 第四十页，共一百一十五页。湿热灭菌温度记录仪湿热灭菌温度记录仪生产生产生产生产(shngch(shngchn)n)单位：浙江泽大科学仪器公司单位：浙江泽大科学仪器公司单位：浙江泽大科学仪器公司单位：浙江泽大科学仪器公司第四十一页，共一百一十五页。6.生物生物(shngw)(shngw)指示剂挑战
50、试验指示剂挑战试验 7.1 7.1随热穿透试验同时进行。放置在灭菌物品内部。随热穿透试验同时进行。放置在灭菌物品内部。上层一个点，中间层上层一个点，中间层1 1个点，最下层个点，最下层3 3个点（其中个点（其中(qzhng)(qzhng)1 1个放个放在冷凝水排放点附近），每个点放在冷凝水排放点附近），每个点放2 2支指示剂。支指示剂。7.2 7.2采用嗜热脂芽孢杆菌（采用嗜热脂芽孢杆菌（ATCC7953ATCC7953）；含菌量）；含菌量5105105 56 6个个/支。支。7.3 7.3可接受标准：阳性对照菌瓶有菌生长（培养液由紫可接受标准：阳性对照菌瓶有菌生长（培养液由紫色变成黄色），灭