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1、第一页，共四十五页。动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞核移植、动物细胞融合、动物细胞融合、单克隆抗体单克隆抗体动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的根底。动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的根底。提问：提问：v植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养植物组织培养,植物体细胞杂交植物体细胞杂交第二页，共四十五页。动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适
2、宜的培养基将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。中，让这些细胞生长和增殖。1、选材：、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。程度低，容易培养。第三页，共四十五页。v在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的适宜的PH为为7.27.4，此环境下胃蛋白酶，此环境下胃蛋白酶2.0没有活性，而胰蛋白酶没有活性，而胰蛋白酶(7.
3、2-8.4)的活性较高。的活性较高。2.分散成单个细胞分散成单个细胞第四页，共四十五页。3.动物细胞生长特性动物细胞生长特性：细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。称为细胞贴壁。要求：要求：培养瓶或培养皿的内外表光滑、无毒、易于贴培养瓶或培养皿的内外表光滑、无毒、易于贴附。附。细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时，细胞就会当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。第五页，共四十五页。4.4.过程：过程：第六页，共
4、四十五页。细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限传无限传代代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系5.5.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面多数组织细胞固定在表面生长和分裂。生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变第七页，共四十五页。动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄动动物的组织、器官物的组织、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单个细胞单个细胞加培养液加培养液制成制成细胞细胞悬浮悬浮液液细胞株细胞株细胞系细胞系细胞增值细胞增值无
5、限传代无限传代去掉组织去掉组织间蛋白间蛋白动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成生物体最终培养成生物体第八页，共四十五页。动物细胞培养条件：动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加一定量的抗生素，定期更换培养液2、营养、营养葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。3、温度和、温度和PH 36.5+-0.5度度,7.2-7.44、气体环境：、气体环境：O2和和CO295%空气和空气和5%CO2 保证细胞顺利的生保证细胞顺利的生长增殖长增殖第九页，共四十五页。动物细胞培养液的主要成分：动物细
6、胞培养液的主要成分：葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和、氨基酸、无机盐、维生素和动物动物血清血清等。等。与植物培养基相比其特点是：与植物培养基相比其特点是：1 1液体培养基液体培养基2 2含有动物血清含有动物血清动物体细胞大都生动物体细胞大都生活在活在液体液体的环境的环境第十页，共四十五页。细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细或细胞产物胞产物快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物葡萄糖、动物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固
7、体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较工程比较工程植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较第十一页，共四十五页。动物细胞培养应用动物细胞培养应用大规模培养生产生物制品病毒疫苗、干扰大规模培养生产生物制品病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体素、单克隆抗体作为基因工程中的受体细胞作为基因工程中的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据第十二页，共四十五页。二、动物体细胞核移植
8、技术二、动物体细胞核移植技术:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物用核移植的方法得到的动物称为克隆动物称为克隆动物核移植核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植难度高难度高受体细胞：受体细胞：M期的卵期的卵母细胞母细胞第十三页，共四十五页。卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早
9、期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞第十四页，共四十五页。克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.1.克隆动物作为生物反响器，生产医用蛋白克隆动物作为生物反响器，生产医用蛋白2.2.改进动物品种改进动物品种 3.3.治疗人类疾病，作为供体治疗人类疾病，作为供体4.4.保护濒危动物保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题：体细胞核移植技术存在的问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，
10、免疫失调等。陷，免疫失调等。第十五页，共四十五页。1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是-A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的根底是、动物细胞工程技术的根底是-A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD第十六页，共四十五页。3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细
11、久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞胞 A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D第十七页，共四十五页。4.4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只
12、能培 养成植株。养成植株。A第十八页，共四十五页。植物体细胞杂交的意义：植物体细胞杂交的意义：打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种育作物新品种第十九页，共四十五页。1.1.过程：过程：诱导方式诱导方式物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性不感染细胞不感染细胞保存融合活性保存融合活性诱导细胞融合诱导细胞融合第二十页，共四十五页。1.1.过程：过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融
13、合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）第二十一页，共四十五页。1.其由何种细胞产生？其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？3.如何得到抗体？如何得到抗体？提提问问？第二十二页，共四十五页。抗体抗体1 1。抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激效应效应B 抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激效应效应B 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一效应筛选单一效应B细胞细胞不能增值产生大量抗体不能增值产生大量抗体2 2。特异性差、纯度低；。特异性差、纯度低；产量低、反响不够灵敏产量低、反响不够灵敏第二十三页，共四十五页。设计方案：设
14、计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖-化学性质单一、特异性强的抗体。化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞杂种细胞第二十四页，共四十五页。？诱导其融合的方法诱导其融合的方法有哪些？有哪些？抗原抗原 效应效应B细胞细胞2.2.制备过程：制备过程：第二十五页，共四十五页。B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞细胞融合后培养液中有几种细胞筛选杂种筛选杂种细胞细胞能看出细胞合成能看出细胞合成DNA有有D和和S两条途径，其中两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两途径能被氨基嘌
15、呤阻断。人淋巴细胞中有这两条条DNA合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增值，途径，但能不断分裂增值，将这两种细胞在试管中混合，加将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获促融，获得杂种细胞。得杂种细胞。第二十六页，共四十五页。主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法同左同左灭活的病毒灭活的病毒物理离心、振物理离心、振动、电刺激动、电刺激化学聚乙二醇化学聚乙二醇诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁
16、后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较工程比较工程植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较第二十七页，共四十五页。除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外，还有什么方法？外，还有什么方法？第二十八页，共四十五页。3.3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：在根底理论研究中具有重要意义在根底理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性高、灵敏度高
17、等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹生物导弹第二十九页，共四十五页。一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势第三十页，共四十五页。多莉与多莉与“母亲母亲第三十一页，共四十五页。卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞第三十二页，共四十五
18、页。克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.1.用于生物学和医学研究的实验动物用于生物学和医学研究的实验动物2.2.改进动物品种改进动物品种 3.3.治疗人类疾病治疗人类疾病4.4.保护濒危动物保护濒危动物第三十三页，共四十五页。6.6.世界上第一只克隆绵羊世界上第一只克隆绵羊“多莉的培育等程序如下图。请仔多莉的培育等程序如下图。请仔细看图后答复以下的问题：细看图后答复以下的问题：黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊卵白面绵羊卵腺细胞核腺细胞核重组细胞重组细胞早期胚胎早期胚胎另一头母绵羊子宫另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉克隆绵羊多莉ab电脉冲处理妊娠、出生写出写出、所指的细胞工程各、所指
19、的细胞工程各称：称：。实施细胞工程时，所需的受体实施细胞工程时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。多莉面部的毛色是多莉面部的毛色是 ，判断，判断依据：依据：。继植物组织培养之后，克隆绵羊继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞也具有培育成功，证明动物细胞也具有 。请举例说明克隆绵羊培育成请举例说明克隆绵羊培育成功的实际意义功的实际意义：。第三十四页，共四十五页。动物的胚胎移植动物的胚胎移植 解决某些妊解决某些妊娠时间长、每胎娠时间长、每胎产子数量少的优产子数量少的优良种畜的繁殖速良种畜的繁殖速度问题。度问题。第三十五页，共四十五页。1 1、科学
20、家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是髓疤细胞融合的是 A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A第三十六页，共四十五页。2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品
21、种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的选项是动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的选项是 诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段根本相同所用的技术手段根本相同 C.所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 AD第三十七页，共四十五页。4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个
22、B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D第三十八页，共四十五页。第三十九页，共四十五页。1.1.过程：过程：第四十页，共四十五页。2.2.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用1 1生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。单克隆抗体等。3 3用于检测有毒物质用于检测有毒物质2 2获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。4 4用于生理、病理、药理等方面的研究，为用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗
23、和预防疾病提供理论依据治疗和预防疾病提供理论依据第四十一页，共四十五页。1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是细胞是-A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的根底是、动物细胞工程技术的根底是-A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD第四十二页，共四十五页。3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，
24、其主要原因是这样的组织细久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞胞 A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D第四十三页，共四十五页。4.4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A第四十四页，共四十五页。内容总结动物细胞工程。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。36.5+-0.5度,7.2-7.4。大规模培养生产生物制品病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体。A。一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖。能看出细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。写出、所指的细胞工程各称：。实施细胞工程时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：第四十五页，共四十五页。