《蛋白质含量的测定测定蛋白质含量的方法` ).ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白质含量的测定测定蛋白质含量的方法` ).ppt（14页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、蛋白质含量的测定蛋白质含量的测定n掌握蛋白质含量测定的原理和方法掌握蛋白质含量测定的原理和方法n学会标准曲线的绘制学会标准曲线的绘制n熟练使用分光光度计熟练使用分光光度计测定蛋白质含量的方法测定蛋白质含量的方法 n n测定蛋白质含量的方法较多测定蛋白质含量的方法较多n n基本上都是根据蛋白质的理化性质和生基本上都是根据蛋白质的理化性质和生物学活性建立起来的。物学活性建立起来的。二、比色法：二、比色法：利用蛋白质与不同试剂的呈色反应，利用蛋白质与不同试剂的呈色反应，测定蛋白质的含量，如双缩尿法和测定蛋白质的含量，如双缩尿法和酚试剂法酚试剂法（lowryslowrys method method）
2、。）。三、紫外分光光度法：三、紫外分光光度法：利用蛋白质对利用蛋白质对280nm280nm紫外紫外光有最大的吸光度而采用光有最大的吸光度而采用一、凯氏定氮法：一、凯氏定氮法：根据蛋白质的含氮量来根据蛋白质的含氮量来测定蛋白质的含量测定蛋白质的含量 公式公式:每每g样品中含氮克数样品中含氮克数 6.25 100蛋白质蛋白质呈色试剂呈色试剂:酚试剂酚试剂酚试剂酚试剂磷钼酸磷钼酸磷钼酸磷钼酸-钨酸的混和酸钨酸的混和酸钨酸的混和酸钨酸的混和酸半胱氨酸、半胱氨酸、半胱氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、酪氨酸、酪氨酸、酪氨酸、色氨酸色氨酸色氨酸色氨酸组氨酸组氨酸组氨酸组氨酸还原型还原型混和酸混和酸混和酸混和酸 (兰
3、色兰色兰色兰色)蛋白质肽键蛋白质肽键蛋白质肽键蛋白质肽键碱性碱性碱性碱性烯醇化烯醇化烯醇化烯醇化铜离子铜离子铜离子铜离子在在在在pH10pH10条件下螯合在肽键结构中条件下螯合在肽键结构中条件下螯合在肽键结构中条件下螯合在肽键结构中从而使电子转移到混和酸的显色剂上，从而使电子转移到混和酸的显色剂上，从而使电子转移到混和酸的显色剂上，从而使电子转移到混和酸的显色剂上，增强了增强了增强了增强了酚试剂酚试剂酚试剂酚试剂对蛋白质的敏感性。对蛋白质的敏感性。对蛋白质的敏感性。对蛋白质的敏感性。n n蛋白质与酚试剂呈色蛋白质与酚试剂呈色深浅深浅与蛋白质的与蛋白质的含量含量成正比成正比，利用蛋白质的浓度与呈
4、，利用蛋白质的浓度与呈色的关系，制备标准曲线，来测定样色的关系，制备标准曲线，来测定样品中的蛋白质含量。品中的蛋白质含量。n用已知浓度的标准牛血清白蛋白溶液用已知浓度的标准牛血清白蛋白溶液（浓度为（浓度为50mg%50mg%）配成一系列不同浓配成一系列不同浓度的蛋白质溶液。度的蛋白质溶液。n取七支试管，编号，按下表操作取七支试管，编号，按下表操作 编编编编号号号号 1 2 3 4 5 6 71 2 3 4 5 6 7蛋白蛋白蛋白蛋白质质质质含量含量含量含量（g g）标标标标准液准液准液准液(ml)(ml)生理生理生理生理盐盐盐盐水水水水ml)ml)试剂试剂试剂试剂A(mlA(ml)50 100
5、 150 200 250 50 100 150 200 250 空白空白空白空白 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 /0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 /0.5 0.5（样样样样品）品）品）品）0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 1.0 0.50.9 0.8 0.7 0.6 0.5 1.0 0.5 0.9 0.9 0.90.9 0.90.9 0.90.9 0.90.9 0.90.9 0.90.9 混匀，置混匀，置混匀，置混匀，置5050水浴十分水浴十分水浴十分水浴十分钟钟钟钟，冷却至室温，冷却至室温，冷却至室温，冷却至室温试剂试剂试剂试剂B B 0.1 0.1 0.10.1 0
6、.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 室温放置十分室温放置十分室温放置十分室温放置十分钟钟钟钟试剂试剂试剂试剂C(C(混匀混匀)3.0 3.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 冷却后在波长冷却后在波长650nm650nm条件下比色条件下比色,测定其光密度测定其光密度值。以空白管调零值。以空白管调零.50水浴水浴10分钟分钟,标准曲线的绘制标准曲线的绘制n n以蛋白质的含量（以蛋白质的含量（gg）为横坐标，光为横坐标，光密度值（密度值（ODOD）为纵坐标，绘制出蛋白为纵坐标，绘制出蛋白质含量的标准曲线。质含量的标准
7、曲线。n n根据样品中的根据样品中的OD650,OD650,从蛋白质标准曲从蛋白质标准曲线中找到样品中蛋白质的线中找到样品中蛋白质的gg数。数。计计 算算 每每100ml血清中所含蛋白质的克数为：血清中所含蛋白质的克数为：g%=样品中蛋白质含量（样品中蛋白质含量（g数）数）1/0.510010-6500注注 意意 事事 项项n n测定蛋白质的浓度最好在测定蛋白质的浓度最好在25100g之之间，故血清稀释倍数一般为间，故血清稀释倍数一般为200500。n n各管加酚试剂应快，必须立即混匀，各管加酚试剂应快，必须立即混匀，否则就会出现浑浊。否则就会出现浑浊。2、绘制出标准曲线：要求规范作图、绘制出标准曲线：要求规范作图 铅笔作图、铅笔作图、横、纵坐标名称及单位横、纵坐标名称及单位 日期、作者日期、作者、曲线名称、曲线名称 曲线上体现出待测样品的曲线上体现出待测样品的OD值及值及 ug数。数。3、计算：、计算：100ml血清中的蛋白质含量。血清中的蛋白质含量。要求：要求：写出公式、代入数据、写出结果。写出公式、代入数据、写出结果。1、原始数据原始数据:各管的各管的OD值值n n 分析实验误差产生的原因分析实验误差产生的原因n n 总结该方法测定蛋白质含量的优缺点。总结该方法测定蛋白质含量的优缺点。