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1、ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3147一2017饲料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定液相色谱-串联质谱法Determination of epinephrine and isoprinosine in feeds一Liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)2017-12-22发布2018-06-01实施，;侈中华人民共和国农业部发布目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。
2、NY/T 3147-2017 本标准起草单位:中罔农业科学院农业质量标准与检测技术研究所同家饲料质量监督检验中心(北京)J。本标准主要起草人:索德戚、魏书林、王培龙、李阳、王瑞同、苏晓鸥、樊霞、李宏、周炜、冯二.令。I NY/T 3147-2017 饲料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定液相色谱一串联质谱法1 范围本标准规定了饲料中肾上腺素(epinephrine)和异丙肾上腺素(isoprinosine)含量测定的液相色谱串联质谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂研泪A相知pE精料补充料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定。肾上腺素检出限为10g/g/kg。2 规范性引用文件3 原理4.1 4
3、.2 4.3 4.4 4.5 腊混合均匀。4.6 3.0 mmol/L七氟丁酸4.7 试样稀释液:取乙脂10mL，4.8 肾上腺素和异丙肾上腺素标准储备液:质谱仪检mL 水，加50mL乙OOmL，混匀。但上腺素和异丙肾上腺素对照品(精确至0.00001 g)至棕色容量瓶中，用甲醇(4.1)配成浓度各为1mg/mL的标准储备液，20C80C冷藏保存，有效期6个月。4.9 肾上腺素和异丙肾上腺素标准工作液:分别吸取肾上腺素和异丙肾上腺素标准储备液(4.肘，用试样稀释液(4.7)稀释成浓度为1g/mL的标准工作液，20C80C冷藏保存，有效期1个月。4.10 肾上腺素-D6同位素内标储备溶液:分别精
4、密称取肾上腺素-D6对照品(精确至0.00001g)至棕色容量瓶中，用甲醇(4.1)配成浓度各为1mg/mL的标准储备液，20C80C冷藏保存，有效期6个月。4.11 肾上腺素D6同位素内标工作液:临用前配制，将肾上腺素-D6同位素内标储备溶液(4.10)用甲NY/T 3147-2017 醇(4.1)稀释至1g/mL。4.12 氨水甲醇溶液:取5mL氨水与95mL甲醇混合。4.13 氮气:纯度99.9%。4.14 同相萃取小柱:混合型阳离子交换柱(3mL,60 mg)，或其他性能相当的小柱。4.15 滤膜:0.22m，有机系。5 仪器和设备5.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾电离源。5.2
5、 离心机:转速不低于8000r/min。5.3 氮吹仪。5.4 涡旋振荡器。5.5 粉碎机。5.6 恒温水浴振荡摇床。5.7 罔相萃取装置。5.8 天平:感茧0.01g;感量0.00001g。6 采样和试样的制备按GB/T14699.1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195的规定制备试样，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，装入磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1 提取称取配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料及精料补充料2g(精确至0.01g)于50mL离心管中，准确加入20L肾上腺素-06同位素内标工作液(4.11)、20mL试样提取液(4.日，涡旋混合305，超
6、声提取30min,8000 r/min离心5min，上清液备用。7.2 净化固相萃取小柱依次用3mL甲醇、3mL7.K活化。取适量或全部上清液过柱，依次用3mL水和2mL甲醇淋洗，抽干，用3mL氨水甲醇榕液(4.12)洗脱，收集洗脱液，速度控制在约1滴/5，用纸吹仪在30.C条件下氮气吹干，用1.OmL试样稀释液(4.7)、溶解，过O.22m滤膜。如果检测含量超出线性范罔(1g/L100g/L)，适当减少称样量重新处理或减少过同相萃取小柱的溶液茧，将上机溶液所含药物的浓度稀释至线性范用内上样。7.3 液相色谱参考条件色i普柱:C8柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径2.1m(或其他效果等同
7、的C8柱)。柱温:30.C。进样量:10L。流动相及参考梯度洗脱程序见表1。表1流动相及参考梯度洗脱程序时间，min流速，mL/min3.0 mmol/L七氟丁股溶液，%乙脯，%O 0.3 98 2 O.3 98 2 5.0 0.3 70 30 2 NY/T 3147-2017 表1(续)时间，mln流速，mL/min3.0 mmol/L七氟丁股溶液，%乙脯，%6.0 O.3 70 30 6.1 O.3 98 2 8.0 O.3 98 2 注:七氟丁般对检测负离子有抑制作用，如?后检测其他药物，rti.用适量的50%巾醉和水溶液冲洗色谐和质辩。7.4 质谱参考条件离子源:电喷雾离子源。扫描方式
8、:正离子模式。检测方式:多反应监测。脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。毛细管电压、碰撞能盐等电压值应优化至最佳灵敏度。定性离子对、定量离子对及对应碰撞能量见表2。表2肾上腺素和异丙肾上腺素的定性离子对、定量离子对、碰撞能量的参考值被测物名称定性离子对，m/z立起茧离子对，m/z碰撞能茧，cV184.1166.2 肾上腺素184.1 130.3 20 184.1166.2 25 212.2 152.2 20 异丙肾上腺素212.2 152.2 25 212.2 194.1 肾上腺素-)6190.2 172.0 190.2 172
9、.0 20 7.5 定性测定每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合标准工作液中对应的保留时间偏差在士O.5之内，且样品谱阁中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。相对离子丰度允许的最大偏差7.6 定量测定表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差50 土202050(含)士251O20(含)士30单位为百分率10 士50在仪器最佳工作条件下，取试样榕液和标准榕液分别进样，以标准榕液中被测组分峰面积和其内标峰面积的比值为纵坐标，被测组分浓度
10、和内标浓度的比值为横坐标，用标准系列进行单点或多点校准，采用内标法定量，以肾上腺素因为内标物计算肾上腺素、异丙肾上腺素含量。试样榕液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围(1g/L100g/U内，在上述色谱和质谱条件下，肾上腺素和异丙肾上腺素标准溶液的液相色谱-串联质谱离子流色谱阁参见附录A。8 计算试样中肾上腺素和异丙肾上腺素的质量分数XilJ.毫克每千克Cmg/kg)表示，按式(1)计算。式中:xi=f i X V,X Ci X V3 X Pi.X C,;S X 1000 Pg X m X Vz X P X Cis X 1000(1)3 NY/T 3147一2017P;二一试样溶液中肾上
11、腺素和异丙肾上腺素的峰面积值;Vj-一试样提取液体积，单位为毫升(mL);C;二一肾上腺素和异丙肾上腺素标准溶液浓度，单位为微克每毫升(g/mL);只二一上机前定容体积，单位为毫升(mL);Pist二一肾上腺素内标的峰面积值;Csis二一样品榕液中肾上腺素内标溶液浓度，单位为微克每毫升(g/mL);Pst 标准溶液峰面积平均值;m 一一试样质量，单位为克(g);V2-一净化时分取溶液的体积，单位为Pis二一试样榕液中肾上腺素Cis 二一标准榕液中肾测定结果用平行测定9 重复性在重复性条件均值的20%。4 2个值的算术平NY/T 3147-2017 附录A(资料性附录)肾上腺素和异丙肾上腺素标准
12、溶液的液相色谱-串联质谱离子流色谱图和肾上腺素和异丙肾上腺素标准榕液的液相色谱-串联质谱离子流色谱阁见罔A.l。RT:4.83 响应伯AA:3445574 SN:31 19 E 3o 250()()200。150)()00 500 tlH二巳26飞171.27 2.44 3.48 RT:4.76 AA:289988 300 SN:327 25删f1 2 200 150 100 50。RT:6.41 AA:10345934 SN:7221 3 8000 6)()4o RT:5.07 AA:306601 SN:151。rI L I I 1-1 I I I 1 I I I I I I I I.b.L
13、-L.J。2 3 4 5 6 7 8 l,mtn 说明:l一一肾上腺素;3一一异丙肾上腺素。2一-肾上腺素06;图A.1肾上腺素和异丙肾上腺素标准溶液(浓度为100g/L)的液相色谱-串联质谱离子流色谱图5 巳ON-h寸的HFZ中华人民共和国农业行业标准饲料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定液相色谱-串联质谱法Y/T 3147-2017*提9导中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码100125网址)北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销争导争等.*开本880rnrnX1230rnrn 1/16 印张O.75 字数15千字2018年5月第1版2018年5月北京第1次印刷书号16109 4390 定价18.00元NY/T 3147-2017 版权专有侵权必究举报电话(010)65005894