《SN∕T 5334.3-2020 转基因植物产品的数字PCR检测方法 第3部分：转基因玉米(出入境检验检疫).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SN∕T 5334.3-2020 转基因植物产品的数字PCR检测方法 第3部分：转基因玉米(出入境检验检疫).pdf（8页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 5334.32020转基因植物产品的数字 PCR 检测方法 第 3 部分：转基因玉米Protocol of digital PCR for quantitatively detecting genetically modified plants and their derived productsPart 3:Genetically modified maize2020-12-30 发布2021-07-01 实施ICS 65.020.01CCS B 16中华人民共和国海关总署发 布以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫中国
2、海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023）编辑部：（010）65194242-7509中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 8801230 1/16 印张 0.5 字数 14 千字2021 年 6 月第一版 2021 年 6 月第一次印刷印数 1000书号：000000 定价 14.00 元转基因植物产品的数字PCR检测方法第3部分：转基因玉米行 业 标 准SN/T5334.32020*网址 5334.32020前 言SN/T53342020转基因植物产品的数字 PCR 检测方法共分为 8 个部分：第 1 部分：通用要求及定义；第 2 部分：转基因大豆；第 3 部
3、分：转基因玉米；第 4 部分：转基因油菜；第 5 部分：转基因棉花；第 6 部分：转基因马铃薯；第 7 部分：转基因苜蓿；第 8 部分：转基因甜菜。本文件为 SN/T53342020 的第 3 部分。本文件按照 GB/T1.12020 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳海关食品检验检疫技术中心。本文件主要起草人：凌杏园、潘广、朱鹏宇、付伟、向才玉、章桂明、朱水芳、黄文胜。I以正式出版文本为准以正式出版文本为准1SN/T 5334.320
4、20转基因植物产品的数字 PCR 检测方法 第 3 部分：转基因玉米1 范围本文件规定了玉米中转基因品系数字 PCR 定量检测方法。本文件适用于玉米种子、叶片中 10 种转基因品系定量检测。本文件检测限参见附录 A。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T5334.1 转基因产品定量检测数字 PCR 方法第 1 部分：通用要求及定义3 术语和定义SN/T5334.1 界定的术语与定义适用于本文件。4 方法原理见 SN/T533
5、4.1。5 主要设备及试剂5.1 内源基因和外源基因：内源基因为玉米高速泳动蛋白基因（HMG：highmobilitygroupproteins）；外源基因为品系 98140、DAS40278-9、VCO-01981-5 和 MON87427 插入位点 5 端跨边界序列，以及品系 BVLA430101、Bt799、IE034、12-5、C0010.3.7 和 C0030.3.5 插入位点 3 端跨边界序列。引物及探针序列参见附录 A。5.2 其他设备及试剂要求见 SN/T5334.1 的规定。6 方法操作步骤6.1 一般性操作步骤一般性操作步骤见 SN/T5334.1 的规定。6.2 数字 P
6、CR 反应体系实时荧光 PCR 反应体系配制见表 1。以正式出版文本为准2SN/T 5334.32020表 1 数字 PCR 反应体系试剂终浓度2ddPCRSuperMix1内参基因上游引物参见附录 A内参基因下游引物参见附录 A内参基因探针参见附录 A品系上游引物参见附录 A品系下游引物参见附录 A品系探针参见附录 ADNA 模板60ng水补足至反应体系 注：推荐使用市面上现售的数字 PCR 平台进行实验6.3 数字 PCR 反应程序其他要求见 SN/T5334.1，数字 PCR 反应程序见表 2。表 2 数字 PCR 反应程序反应温度反应时间循环数热启动a502min1955min热变性9
7、515s40退火b参见附录 A60s a：根据不同数字 PCR 平台的要求，可以对反应程序中热启动步骤进行修改，但是不得修改热循环（扩增）步骤。b：根据不同数字 PCR 平台的要求，有可能要在热循环（扩增）步骤结束后进行后处理，可按照不同平台要求进行。7 结果判定与表述结果计算见 SN/T5334.1。结果表述如下：检测结果中内标准基因与外源基因均符合阴性以及空白的质量控制要求，说明未检出玉米内源基因 Adh1，表述为“未检出玉米成分”；检测结果中，内标准基因结果为阳性，但是外源基因符合阴性以及空白的质量控制要求，说明检出玉米内源基因 Adh1，但未检出 XXX 品系特异性序列，表述为“未检出
8、玉米 XXX 转基因品系”；检测结果中，内标准基因与外源基因组均符合试样数字 PCR 检测的质量控制要求，说明该转基因品系 XXX 检测为阳性且满足定量要求，表述为“检出玉米 XXX 转基因品系，含量为 XX%。以正式出版文本为准3SN/T 5334.320208 防污染措施防污染措施见 SN/T5334.1 的规定。9 样品保存样品保存见 SN/T5334.1 的规定。以正式出版文本为准SN/T 5334.32020附 录 A（资料性附录）引物探针序列、反应程序以及检测限表 A.1 引物探针序列、反应程序以及检测限基因/品系名称序列（5-3，品系探针均用 5FAM、3BHQ-1 标记）终浓度
9、/nM退火温度/Tm定性检测限定量检测限Adh1上游引物TTGGACTAGAAATCTCGTGCTGA30060下游引物GCTACATAGGGAGCCTTGTCCT300探针HEX-CAATCCACACAAACGCACGCGTA-BHQ-118098140上游引物GTGTGTATGTCTCTTTGCTTGGTCTT300601212下游引物GATTGTCGTTTCCCGCCTTC300探针CTCTATCGATCCCCCTCTTTGATAGTTTAAACT180DAS40278-9上游引物CACGAACCATTGAGTTACAATC30060125下游引物TGGTTCATTGTATTCTGGCT
10、TTG300探针CGTAGCTAACCTTCATTGTATTCCG180VCO-01981-5上游引物AAGGCCTTCAGTCTACTCCTCGGG30060125下游引物CTAGCGGCCGCTACTCGAGGGATTT300探针CGTCACCAAGAAGATCAGTACTCAAACAC180MON87427上游引物ACGGAAACGGTCGGGTCAAATG30060126下游引物CCATGTAGATTTCCCGGTTTTCTC300探针TCGGGACAATATGGAGAAAAAGAAAGAG180BVLA430101上游引物AATTGCGTTGCGCTCACT50060310下游引物G
11、CAACACATGGGCACATACC500探针CCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCC250Bt799上游引物GTACCGTGGACTCCCTT50060310下游引物TAAGGTTTCGGTCCCAATTAC500探针CCCGTCTCCTGTGAGATCAGCT250IE034上游引物GAAGCAGGTCCCAGTATATTT50060310下游引物TTCGGCGTTAATTCAGTACA500探针ACGCTTAGACAACTTAATAACACATTGCGG25012-5上游引物GAATGCTAGAGCAGCTTGA50060310下游引物CTCGAGCTCAACCACATC500探针AGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAGT250C0010.3.7上游引物CGGTCCCGTTTAAACCTAAT50060310下游引物TGGATTCACCAGCCTCA500探针TTCCAGGCAGCTACGCTCTCAC250C0030.3.5上游引物CGGTCCCGTTTAAACCTAAT50060310下游引物TGGATTCACCAGCCTCA500探针TTCCAGGCAGCTACGCTCTCAC250SN/T 5334.32020书号：00000000定价：14.00 元