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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 2727一2015蔬菜烟粉虱抗药性监测技术规程Guideline for insecticide resistance monitoring of Bemisia tabaci(Gennadius)on vegetables 2015-05-21发布2015-08-01实施中华人民共和国农业部发布前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并归口。NY/T 2727-2015 本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、中国农业科学院蔬菜花卉研究所、天津市植保植检站。本标准主要起草人
2、:张帅、张友军、邵振润、王少丽、杨爱宾、谢文。I NY/T 2727-2015 蔬菜烟粉虱抗药性监测技术规程1 范围本标准规定了琼脂保湿浸叶法对烟粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)成虫、浸茎系统测定法和叶片浸渍法对烟粉虱若虫和卵抗药性的监测方法。本标准适用于烟粉虱成虫、若虫和卵对常用杀虫剂的抗药性监测。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 琼脂保湿浸叶法leaf dipping method 将浸过药液的叶碟放在玻璃管底部平铺的固体琼脂上，昆虫通过接触和取食带毒叶片而进行生物测定的方法。2.2 浸茎系统测定法stem dipping method 将带有供试昆虫的
3、植物茎部插人装有药液的玻璃瓶中饲养，昆虫通过取食进入植物体内并传导扩散的药剂而进行生物测定的方法。2.3 叶片浸渍法leaf-pest dipping method 将带有供试昆虫的植物叶片浸渍在药液中，昆虫通过接触药液和取食叶片而进行生物测定的方法。3 试剂与材料3.1 生物试材试虫:烟粉虱成虫、若虫和卵。供试植物:甘蓝苗和棉花苗。成虫采用甘蓝叶片，若虫和卵采用棉花苗。3.2 试验药剂杀虫剂原药。3.3 试验试剂Triton X-100(或吐温80);丙酣(对不易洛解的药剂，可添加其他助榕剂);所用试剂为分析纯，水为蒸馆水。4 仪器设备电子天平(感量0.1mg);打孔器(直径2.2cm);平
4、底玻璃管(长7.8cm，直径2.2cm);微波炉;移液器(5mL);容量瓶ClOmL、50mL、100mL、500mL);量筒(500mL);NY/T 2727一2015烧杯(10mL、25mL、100mL、500mL);塑料培养皿(直径5cm);吸虫器;棕色玻璃瓶。OmL);显微镜;人工气候箱:温度(25士l)OC、相对湿度60%80%、光照周期16h:8 h(L:D)。5 试验步骤5.1 试材准备5.1.1 无虫苗培育5.1.1.1 甘蓝苗的培育将甘蓝籽播种到装好土的托盘里，盖上塑料布，无虫温室内培育，4d5 d后出苗，待甘蓝苗生长20 d30 d后，即4片5片真叶后进行分苗，在营养钵内单
5、独培育，供测试用。5.1.1.2 棉花苗的培育将催芽后的棉籽播种到装好士的苗盆里，元虫温室内培育，待棉苗长出第1片真叶，叶片直径2cm时，从根部切断棉苗，使棉茎长度为10cm，插入水中培养待用。5.1.2 试虫准备选当地具有代表性的农田2块3块，每块田随机10点采集，每地采集烟粉虱成虫至少1000头放置于玻璃试管内，或采集带有伪踊的植物叶片200片以上，带回室内饲养，鉴定烟粉虱的生物型。接虫产卵:将棉苗放于改造过的培养皿中。培养皿改造方法如下:培养皿盖中央开一个直径3cm的圆孔，用直径约4cm的60目100目纱网将培养皿的孔封上。在培养皿底盖侧边对应位置各开一个直径约为1cm的半圆，内侧贴上海
6、绵封口，在半圆的中间位置将海绵切开一条缝隙，一侧用于放置棉茎，另一侧用于接虫。每皿接入15对雌雄成虫产卵，24h后移去成虫，显微镜下记录每个叶片背面卵的数目，至少20粒。5.2 药剂配制5.2.1 琼脂玻璃管的制作用三角瓶配制15g/L17 g/L的琼脂，用微波炉充分榕解。取出后晾5min 10 min，至瓶口无热气涌出。用微量移液器吸取2mL液体琼脂，加入到平底玻璃管底部，冷却凝固后待用。5.2.2 药剂溶解和配制准确称取一定量的原药，用有机榕剂搭解，加入终浓度0.1%TritonX-100C或0.1%吐温-80)定容，配制成母液。用移液管吸取母液，用Triton水济液按照等比梯度配制成5个
7、7个系列浓度。每个浓度药液量不少于250mL5.3 处理方法5.3.1 叶碟制作及浸药用打孔器将新鲜、平展的甘蓝叶片打成直径2.2cm叶碟，避开叶脉部位。将叶碟浸于待测药液中，10 s后取出晾干，叶背向上平铺于琼脂玻璃管中。按浓度从低到高的顺序重复上述操作，每处理不少于4次重复，并设不含药剂的Triton水溶液作空白对照。5.3.2 接虫与计数5.3.2.1 烟粉虱成虫琼脂保湿浸叶法:将铺好叶碟的玻璃管，管口朝下倾斜放在有烟粉虱成虫的寄主植物上，轻拍植株或用吸虫器等使烟粉虱进入管内，每管20头25头，将棉塞塞至距离管底1.5 cm处。接虫30min后，记录每管内的活虫数(即总虫数)。NY/T
8、2727-2015 5.3.2.2 烟粉虱卵将带卵棉苗置于显微镜下检查记录每叶卵数，进行药剂处理。内吸性杀虫剂采用浸茎系统测定法，非内吸性杀虫剂采用叶片浸渍法。浸茎系统测定法:将带卵棉茵的棉茎插入装有10mL药液的棕色玻璃瓶中，并设空白对照。叶片浸渍法:将带卵棉苗的叶片浸入药液中，20s后取出晾干，将棉茎插入装有清水的棕色玻璃瓶中，并设空白对照。5.3.2.3 烟粉虱若虫将带有发育至2龄若虫的棉叶置于显微镜下，检查记录若虫基数，采用浸茎系统测定法或叶片浸渍法进行测定。5.4 结果检查处理后放置于温度为(26士l)OC、相对湿度60%80%、光照周期16h:8 h(L:D)条件下饲养和观察，处理
9、成虫的玻璃管管口朝下放置。5.4.1 烟粉虱成虫处理后48h，检查记录死亡情况，记录总虫数和死虫数。试虫不能正常活动视为死亡。5.4.2 烟粉虱卵处理8d以后，检查记录死亡情况，卵不能孵化视为死亡。5.4.3 烟粉虱若虫处理12d以后，检查记录死亡情况，若虫不能正常发育为伪踊视为死亡。6 数据统计与分析6.1 死亡率计算方法根据检查数据，计算各处理的校正死亡率。按式。)和式(2)计算，计算结果均保留两位有效数字。P=另X100.(1)式中:P一死亡率，单位为百分率(%);k一一表示死亡虫数，单位为头;N一一一表示处理总虫数，单位为头。P,=.t_-Po=一牛一;:x 100(2)100一Po式
10、中:Pj一一校正死亡率，单位为百分率(%);P Po一空白对照死亡率单位为百分率(%)。对照死亡率在10%以下。6.2 回归方程和致死中浓度(LC50)计算方法采用PoloPlus等统计软件进行概率值分析，求出每个药剂的LC50值及其95%置信限、斜率(b值)及其标准误。7 抗药性水平的计算与评估7.1 烟粉虱对部分杀虫剂的敏感性基钱参见附录A。3 NY/T 2727-2015 7.2 抗性倍数的计算根据敏感品系的LCso值和测试种群的LC50值，按式(3)计算测试种群的抗性倍数。m=f 式中:RR 测试种群的抗性倍数;T 测试种群的LCso值;S 敏感品系的LC50值。7.3 抗药性水平的评
11、估根据抗性倍数的计算结果，按照表1中抗药性水平的分级标准，结合烟粉虱所属生物型，对测试种群的抗药性水平做出评估。4 抗药性水平分级低水平抗性中等水平抗性高水平抗1主表1抗药性水平的分级标准抗性倍数，倍5.ORR10.。1O.0RR:100.0 NY/T 2727一2015附录A资料性附录)烟粉虱对部分杀虫剂的敏感性基线A.1 B型烟粉虱成虫对部分杀虫剂的敏感性基线见表A.l。表A.lB型烟粉虱成虫对部分杀虫剂的敏感性基线药剂名称斜率标准误LC,o mg/L(95%置信限)阿维菌素1.85:l:0.20 O.087(0.0630.120)烯吭虫胶1.15士O.12 2.22(1.573.12)喔
12、虫嚓1.06士0.1117.80(9.7832.50)院虫眯3.47:l:0.36 3.22(2.444.24)日比虫琳1.12士O.08 8.72(6.40 11.的澳氨虫眈胶1.58:l:0.11 6.23(4.的7.94)丁硫克百威1.12土O.10 441(332586)毒死蝉2.73土O.23 17 4(l42213)氯氧菊醋1.27士O.05 137(llO171)联苯菊醋1.54士0.13118(88159)注l:B型烟粉虱种群于2000年8月采自北尽市郊甘蓝田，在室内不接触任何药剂的情况下用尽丰1号甘蓝苗在室内饲养至今所建立的相对敏感品系。注2:烟粉虱成虫对氯氨菊酶敏感性基线数
13、据引自袁林泽等(应用昆虫学报，2011)的结果。A.2 B型和Q型烟粉虱卵对部分杀虫剂的敏感性基线见表A.2。表A.2B型和Q型烟粉虱卵对部分杀虫剂的敏感性基线药剂名称生物型斜率标准误LC,c mg/L(95%置信限)B O.95土0.060.00064(0.000 520.000 78)澳氯虫国先胶Q O.85:l:0.06 O.13(0.090.18)B 2.43士O.12 0.0034(0.002 90.003 8)口比丙隧Q 0.47士O.03 O.22(0.160.30)B 1.63:l:0.10 O.18(0.150.22)螺虫乙酶Q 0.47:l:0.04 4.34(2.268.
14、33)B 1.47:l:0.11 1.85(1.462.34)H定虫眯Q 1.85土O.12 8.97(7.4110.80)B O.97士0.1118.60(9.0438.30)氯虫苯甲酷胶Q 0.86士O.10 221(88558)B 1.11士0.0632.4(24.942.1)阿维菌素Q O.77:l:0.10 325(lOO 1051)B 0.54士0.07130(73230)喔虫嚓Q 1.58土O.13 860(669 1105)注l:B型烟粉虱种群于2000年8月采自北京市郊甘蓝田，在室内不接触任何药剂的情况下用京丰1号甘蓝苗在室内饲养至今所建立的相对敏感品系。注2:Q型:烟粉虱种
15、群于2009年采自北京一品红寄主植物上，经生物型鉴定后，在室内不接触任何药剂的情况下用一品红在室内饲养至今所建立的相对敏感品系。U NY/T 2727-2015 A.3 B型和Q型烟粉虱若虫对部分杀虫剂的敏感性基线见表A.3。表A.3B型和Q型烟粉虱若虫对部分杀虫剂的敏感性基线药剂名称生物型斜率土标准误LC5U mg/L(95%置信限)B 2.26士0.080.0015(0.001 30.001 9)澳氨虫瞰胶Q 2.06士O.10 0.013(0.0110.01日B O.73土O.05 0.0011(0.000 60.001 9)螺虫乙醋Q 1.88土O.10 0.0075(0.006 20
16、.0091)B 1.75:1:0.15 O.12(0.080.19)氯虫苯甲毗胶Q 0.89士0.05O.89(0.7l1.11)B O.67士0.09O.34(0.160.74)口比丙隘Q O.96士0.081.65(1.272.14)B 1.19土0.111.05(0.801.36)噬虫嚓Q 1.89土0.205.16(3.128.30)B 1.04土0.09O.72(0.550.94)喔嚓酣Q 0.83士0.055.23(4.256.43)B 0.69:1:0.04 3.63(2.954.46)院虫眯Q 1.10士0.0623.9(19.928.7)B 0.82士O.05 23.2(17.930.0)阿维菌素Q O.92:1:0.12 61.4(32.2117.1)注l:B型烟粉虱种群于2000年8月采自北京市郊甘蓝田，在室内不接触任何药剂的情况下用京丰1号甘蓝苗在室内饲养至今所建立的相对敏感品系。注2:Q型烟粉虱种群于2009年采自北京一品红寄主植物上，经生物型鉴定后，在室内不接触任何药剂的情况下用一品红在室内饲养至今所建立的相对敏感品系。6