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1、 红细胞比容测定红细胞比容测定 血红蛋白测定血红蛋白测定 一、红细胞比容测定一、红细胞比容测定 目的目的 掌握红细胞比容的测定方法。掌握红细胞比容的测定方法。原理原理 将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中，定时、定速将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中，定时、定速离心后离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出
2、红细胞在正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）。离心后血液分层离心后血液分层 layer after blood centrifugated 方法与步骤方法与步骤改进的温氏分血管比容法改进的温氏分血管比容法 采血（加入抗凝剂肝素钠，抗凝血）采血（加入抗凝剂肝素钠，抗凝血）用移液器取用移液器取1 ml抗凝血，放入抗凝血，放入EP管中。管中。离心：将分血管以离心：将分血管以3000 r/min离心离心30 min，取出分血管，读取红细胞柱的高度。，取出分血管，读取红细胞柱的高度。注意事项注意事项 选择抗凝剂
3、必须考虑到不能使红细胞变形、选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。本实验采用肝素钠抗凝。溶解。本实验采用肝素钠抗凝。血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。烈引起红细胞破裂。温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。气泡。二、血红蛋白的测定二、血红蛋白的测定目的目的 掌握用掌握用比色法比色法测定动物的血红蛋白的含量。测定动物的血红蛋白的含量。原理原理 血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。但当用
4、一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为但当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血红蛋白克数（中含血红蛋白克数（g gL-1L-1）。）。方法与步骤方法与步骤沙里氏血红蛋白计测定沙里氏血红蛋白计测定沙里氏比色法是用沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。血红蛋白，然后和标
5、准比色板进行比色。沙里血红蛋白计沙里血红蛋白计 主要具有标准褐色玻璃比色箱和主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方只方形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以为血红蛋白量的绝对值，以gdl-1(每每100 ml血液中所含血液中所含血红蛋白的克数血红蛋白的克数)表示，从表示，从222 g；另一侧为血红蛋白；另一侧为血红蛋白相对值，以相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从从10%160%。为避免所使用的平均值不一致，因此。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表
6、示。一般采用绝对值来表示。具体测定方法如下：具体测定方法如下：用滴管加用滴管加5 56 6滴，滴，0.1 mol0.1 molL-1 L-1 HClHCl到刻度到刻度管内管内,(,(约加到管下方刻度约加到管下方刻度”2 2”或多或或多或10%10%处处)。用微量采血管吸血至用微量采血管吸血至20l20l，仔细揩去吸管外，仔细揩去吸管外的血液。的血液。将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管再吸上清液洗吸管3 3次。操作时勿产生气泡次。操作时勿产生气泡,以以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混
7、合，静置酸充分混合，静置10 min10 min，使管内的盐酸和血，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。一致为止。读出管内
8、液体面所在的克数，即是每读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中血中所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血液中含血红蛋白克数（液中含血红蛋白克数（gL-1）。）。【注意事项注意事项】血液要准确吸取血液要准确吸取20 l，若有气泡或，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤酒精、乙醚洗涤采血管采血管12次，使采血管内干净、干次，使采血管内干净、干燥。燥。