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1、抗狂犬病血清抗狂犬病血清生产简介生产简介2006年年5月月抗狂犬病血清抗狂犬病血清 系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经精制、系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经精制、胃酶消化、胃酶消化、纯化纯化制得的液体或冻干免疫球蛋白制得的液体或冻干免疫球蛋白制剂。制剂。用于狂犬病的预防。用于狂犬病的预防。一、免疫血浆一、免疫血浆为获抗毒效价高的免疫血浆为获抗毒效价高的免疫血浆，马匹、免，马匹、免疫原及免疫方法是重要的条件。疫原及免疫方法是重要的条件。（一）（一）马匹的选择马匹的选择v制造抗毒素所用马匹应健壮制造抗毒素所用马匹应健壮(过幼者免疫器官过幼者免疫器官发育不健全，过老者免疫机能衰退，最好是发育不健全，过
2、老者免疫机能衰退，最好是48岁岁)。v无传染病无传染病(包括马传染性贫血、马鼻疽、布氏包括马传染性贫血、马鼻疽、布氏杆菌病、马副伤寒性流产及其他传染病杆菌病、马副伤寒性流产及其他传染病)和恶性肿和恶性肿瘤等。瘤等。由液体石蜡与羊毛脂配成由液体石蜡与羊毛脂配成“油包水油包水”的不的不完全福氏佐剂是马匹免疫最常用、效能最完全福氏佐剂是马匹免疫最常用、效能最好的佐剂。好的佐剂。（二二）免疫原长期反复地给马进行免免疫原长期反复地给马进行免疫，在马体内将产生高效价的抗血清。疫，在马体内将产生高效价的抗血清。(三三)免疫方法免疫方法v基础免疫：从马体初次接受免疫原刺激，基础免疫：从马体初次接受免疫原刺激，
3、到产生少量特异性抗体的阶段即第一次免到产生少量特异性抗体的阶段即第一次免疫应答阶段。疫应答阶段。v超免疫：基础免疫以后的强化免疫。超免疫：基础免疫以后的强化免疫。有了第一次免疫应答后，再次接触同一免疫原有了第一次免疫应答后，再次接触同一免疫原就会迅速出现第二次免疫应答。抗血清效价将会就会迅速出现第二次免疫应答。抗血清效价将会急剧上升。急剧上升。对超免成功的马匹予以采血并开始再对超免成功的马匹予以采血并开始再次免疫注射，如此反复的每一循环通称次免疫注射，如此反复的每一循环通称“1程程”、“2程程”超免疫。超免疫。(四四)采血及血浆的分离采血及血浆的分离v 免疫血清效价不低于免疫血清效价不低于10
4、0100IU/mlIU/ml时即可采血。时即可采血。(20052005年版药典三部年版药典三部 )v采血有采血有“部分采血部分采血”与与“全采血全采血”两种方式。前两种方式。前者指每程超免疫后由颈静脉采血者指每程超免疫后由颈静脉采血l3次，每次次，每次5000m1左右；后者指由颈动脉采血直至马匹死亡。左右；后者指由颈动脉采血直至马匹死亡。二、抗血清的精制二、抗血清的精制抗血清制造方法的改进与制品质量抗血清制造方法的改进与制品质量的提高大体经历了三个历史阶段。的提高大体经历了三个历史阶段。v最初的阶段是最初的阶段是“原制血清原制血清”即不做加工处理，仅即不做加工处理，仅加防腐剂、除菌过滤。加防腐
5、剂、除菌过滤。v其次是应用适宜的理化方法其次是应用适宜的理化方法(主要是硫酸铵盐析法主要是硫酸铵盐析法)去除血浆中的大部分非特异性蛋白去除血浆中的大部分非特异性蛋白(包括白蛋白、纤维包括白蛋白、纤维蛋白等蛋白等)，并使抗体蛋白得到一定的浓缩，单位体积所，并使抗体蛋白得到一定的浓缩，单位体积所含抗毒素单位数量显著提高，称为含抗毒素单位数量显著提高，称为“浓制血清浓制血清”。v蛋白酶精制法的研究和创建，使得抗血清制造方蛋白酶精制法的研究和创建，使得抗血清制造方法跨入了一个新的历史阶段。法跨入了一个新的历史阶段。纯净度：含杂蛋白的程度。纯净度：含杂蛋白的程度。提纯系数：通称提纯系数：通称R值，即精制
6、品每值，即精制品每g蛋白蛋白 所含单位数与原血浆每所含单位数与原血浆每g蛋白所含单位数的蛋白所含单位数的比值。比值。收获率：精制品总单位数与原血浆总单位收获率：精制品总单位数与原血浆总单位数的比值数的比值(%)。前两指标经常与后者互相矛盾，在工艺前两指标经常与后者互相矛盾，在工艺上予以适度调节而兼顾。上予以适度调节而兼顾。衡量精制效果优劣的主要指标衡量精制效果优劣的主要指标质量的要求及检定质量的要求及检定抗毒素除做预防用外还常被用于治疗，抗毒素除做预防用外还常被用于治疗，而且治疗剂量往往很大。而且治疗剂量往往很大。制造工艺比较复制造工艺比较复杂，生产周期较长，容易被污染。杂，生产周期较长，容易
7、被污染。1安全性安全性主要指制品污染的杂质引起的副作用。主要指制品污染的杂质引起的副作用。例如细菌、热原质、类例如细菌、热原质、类A血型物质以及其血型物质以及其它毒性物质等，它毒性物质等，20052005年版药典三部年版药典三部中中都有具体的检定方法并规定有最低要求标都有具体的检定方法并规定有最低要求标准准(参阅参阅20052005年版药典三部年版药典三部)。2纯度及比活性纯度及比活性 由于马匹免疫方法及抗血清精制方法的由于马匹免疫方法及抗血清精制方法的改进，抗血清的纯度改进，抗血清的纯度(免疫球蛋白的纯一性免疫球蛋白的纯一性)与比活性与比活性(每每g蛋白所含单位数蛋白所含单位数)均有显著的均
8、有显著的提高，这些是代表精制抗毒素质量的主要提高，这些是代表精制抗毒素质量的主要指标，指标，20052005年版药典三部中均有检查年版药典三部中均有检查方法及要求标准的规定。方法及要求标准的规定。精制工艺改进精制工艺改进 抗血清抗血清制造工艺的改进很大的提高了临制造工艺的改进很大的提高了临床应用于治病防病的免疫血清床应用于治病防病的免疫血清制品制品的质量。的质量。蛋白酶精制法蛋白酶精制法马血清抗体的分子结构与人的马血清抗体的分子结构与人的IgG基本相同，分子量基本相同，分子量184KD，大小大小427.7nm。马血清抗体在马匹免疫初期阶段从属于免疫血清的马血清抗体在马匹免疫初期阶段从属于免疫血
9、清的球蛋白。球蛋白。随着免疫程度的逐步加深，抗血清的分布逐渐向随着免疫程度的逐步加深，抗血清的分布逐渐向球球蛋白转移，从属于蛋白转移，从属于与与两球蛋白之间新出现的免疫球两球蛋白之间新出现的免疫球蛋白，被称为蛋白，被称为T球蛋白或球蛋白或22球蛋白球蛋白(此时原此时原球蛋白称球蛋白称作作11球蛋白球蛋白)。抗毒免疫马血清经硫酸铵盐析。抗毒免疫马血清经硫酸铵盐析。30一一50饱和沉淀物几乎全是饱和沉淀物几乎全是22(T)球蛋白部分。此部球蛋白部分。此部分经胃酶处理后，又在分经胃酶处理后，又在22与与之间出现一个之间出现一个新峰。进一步用硫酸铵盐析浓缩，此新峰乃被新峰。进一步用硫酸铵盐析浓缩，此新
10、峰乃被提纯成精制抗血清。提纯成精制抗血清。经胃酶处理，经胃酶处理，IgG分子在重链间的二硫键的分子在重链间的二硫键的c端侧被切断。切下的端侧被切断。切下的Fc片段无抗毒活性，不耐热，片段无抗毒活性，不耐热，经继续消化与热变性而被除掉。保留下来的经继续消化与热变性而被除掉。保留下来的F(ab)2片段具有抗毒活性，即前述的所谓改性球片段具有抗毒活性，即前述的所谓改性球蛋白抗毒素，分子量蛋白抗毒素，分子量98KD，分子大小分子大小4.113.6nm，电泳位置在电泳位置在22与与两球蛋白之间。两球蛋白之间。层析技术层析技术抗血清纯度提高抗血清纯度提高从从50%-60%提高到提高到80%以上。以上。比活性比活性从从10000IU/g以上。以上。抗狂犬病血清工艺流程抗狂犬病血清工艺流程免疫血浆免疫血浆 马匹检疫、免疫、基免、超免、马匹检疫、免疫、基免、超免、采血、血采血、血浆分离分离血浆精制血浆精制 去除杂蛋白去除杂蛋白胃酶消化胃酶消化 切去切去FcFc端端第一次沉淀第一次沉淀 硫酸铵沉淀、硫酸铵沉淀、去除去除FcFc端端及加热处理及加热处理第二次沉淀第二次沉淀 硫酸铵沉淀硫酸铵沉淀明矾沉淀明矾沉淀纯化纯化浓缩浓缩最后处理最后处理原液检定原液检定半成品配制及除菌半成品配制及除菌半成品检定半成品检定分装分装成品检定成品检定入库入库