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1、新检验项目结核感染特异性结核感染特异性结核感染特异性结核感染特异性T T T T细胞细胞细胞细胞（T-SPOT.TBT-SPOT.TB）检测技术检测技术检测技术检测技术1、结核病的疫情结核病的疫情 结核病是一种慢性传染病，可在身体各个器官发病，其中以肺结核最为常见，因此肺结核病是一种严重危害人类健康的传染病，得了肺结核病如果不能彻底治疗就会完全丧失劳动能力，而且还会传染他人，对个人、家庭和社会都是极大的危害。我国是全球22个结核病高负担国家之一，活动性肺结核病人数仅次于印度，居世界第二位。结核病仍是目前严重影响我国人民健康的公共卫生问题，而且影响到社会和经济的发展，是我国重点控制的疾病之一。1
2、.3 1.3 结核诊断结核诊断 2 2 2 2 结核诊断结核诊断结核诊断结核诊断 细菌培养细菌培养细菌培养细菌培养l不能区分非结核分 枝杆菌l敏感度低，近半肺结核阴性l肺外结核取材难结核杆菌生长缓慢，培养周期长，不利于早期诊断3.TSPOT检测原理原理v结核感染的免疫应答反应以结核感染的免疫应答反应以细胞免疫细胞免疫为主，结核感为主，结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细胞。细胞。v当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放干扰素干扰素v干扰素干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最是结核分枝杆菌感染后机体免疫
3、应答中最重要的细胞因子。重要的细胞因子。T-SPOT.TB技术：技术：v利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（PBMC）中存在）中存在结核特异性结核特异性T T细胞细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异这些淋巴细胞在受到结核特异 抗原刺激后分泌抗原刺激后分泌干扰素干扰素而设计的而设计的T T细胞免疫斑点试验。细胞免疫斑点试验。v检测外周血中受结核特异抗原刺激释放检测外周血中受结核特异抗原刺激释放干扰素干扰素的的T T淋巴细淋巴细胞，经酶联免疫显色后，通过胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOTELISPOT分析系统分析系统 对斑点进行计数，对斑点进行计数，1 1个斑
4、点代表一个分泌细胞，计算出抗原个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。特异性细胞的频率。v空白对照孔内斑点数小于空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数且阳性对照孔内斑点数大于大于20时视为试验有效时视为试验有效vT-SPOT.TB试验结果用每试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细中斑点形成细胞（胞（SFCs）的数目来描述，即）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs5.T-SPOT.TB的临床意义的临床意义vT-SPOT.TB高灵敏度高灵敏度种类种类内容摘要内容摘要受试者数受试者数量量文献发表文献发表活动性结核活动性结核/灵敏度灵敏度将将T-SPOT.TB的检测结果
5、与最后通过涂片和培养确诊的结的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的患者。患者。T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为97.2%。（。（CI 90.3-99.7%）72Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis(2005)；24:529-536在经培养确诊的活动性结核受试者中，在经培养确诊的活动性结核受试者中，T-SPOT.TB的灵敏的灵敏度为度为96.6%。其中。其中29例免疫力低下患者，例免疫力低下患者，T-SPOT.TB的灵的灵敏度为敏度为100%87Lee
6、 et al.ERJ 2006;28:2430在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床症状和抗痨治疗有效）中，症状和抗痨治疗有效）中，T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为90.3%，并且不受，并且不受CD4细胞数量影响。细胞数量影响。30Clark et al.Clin.Exp.Imm.2007;150(2):238-44在经痰培养或肺部病变组织病理活检确诊的结核患者中，在经痰培养或肺部病变组织病理活检确诊的结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为92%。140Kang et al Chest.2007 Sep;132(3
7、):959-65在确诊的肺结核患者和疑似肺外结核患者中，在确诊的肺结核患者和疑似肺外结核患者中，T-SPOT.TB的阳性率的阳性率94%。32Kim et al.Arch Intern Med.2007;167;20:2255-2259在免疫力正常和免疫力低下的受试人群中，在免疫力正常和免疫力低下的受试人群中，T-SPOT.TB的的灵敏度分别为灵敏度分别为94%和和95%。所有受试者中，所有受试者中，42%为肺外结为肺外结核患者。核患者。186Kim et al.Am J Med 2009；122,189-195经培养确诊、抗痨治疗不超过经培养确诊、抗痨治疗不超过2 2周的结核患者用周的结核患
8、者用T-SPOT.TB检测，阳性率检测，阳性率98%（57/58）。）。58Janssens et al ERJ 2007；30(4):722-8在经培养确诊的活动性结核患者中，在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度的灵敏度为为94%。32Dominguez et al Clin VaccImmunol 2008;15;168-71vT-SPOT.TB高特异性高特异性 检检测测所所用用的的ESAT-6CFP 10抗抗原原均均来来自自结结核核分分枝枝杆杆菌菌基基因因组组RD1区区域域，RD1区区基基因因仅仅存存在在于于结结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）。核分枝杆菌复合
9、群（人型、牛型、非洲型）。卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区区基因基因 因此因此 T-SPOT.TB不会受卡介苗或者非结核分枝杆不会受卡介苗或者非结核分枝杆菌影响。菌影响。种类种类内容摘要内容摘要受试者数受试者数量量文献发表文献发表特异性特异性用用T-SPOT.TB检测检测14例鸟分枝杆菌感染者，例鸟分枝杆菌感染者，13例阴性，例阴性，1例为临界值，复查也为阴性。例为临界值，复查也为阴性。14Adams et al Sc.J Inf.Dis.2008;40(3):196-203.经过结核筛查的无症状的受试者，经过结核筛查的无症状的受试者，T-SPOT.TB检测
10、结果检测结果全部为阴性，特异性全部为阴性，特异性100%。47Clark et al.Clin.Exp.Imm.2007;150(2):238-44在德国用在德国用T-SPOT.TB对健康的卫生保健工作者进行筛查。对健康的卫生保健工作者进行筛查。仅仅1例阳性例阳性（1/95），为影像学工作者，接触病人超过，为影像学工作者，接触病人超过35年。年。TST检测假阳性结果检测假阳性结果34%（32/95）。）。95Barsegian et al.J of Hospital Inf 2008；69(1):69-76在接触结核的健康医务工作者和健康对照受试者中用在接触结核的健康医务工作者和健康对照受试者
11、中用TST和和T-SPOT.TB检测。检测。155健康医务工作者中，健康医务工作者中，TST阳性的阳性的27例，而例，而T-SPOT.TB仅仅3例阳性。健康对照组例阳性。健康对照组T-SPOT.TB全部阴性而全部阴性而TST有有3例阳性。例阳性。218 Storla et al.BMC Infectious Diseases 2009,9:60 6.结论vT-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天，和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天，T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。可以给临床诊断提供参考。v基于结核抗原特异性基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点，细胞向病变部位集中的特点，T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气管肺的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。内及肺外结核的诊断。