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1、第四节尿液化学检验v一、尿液酸硷度检验v二、尿液蛋白质测定v三、尿液糖测定v四、尿液酮体测定v五、尿液胆红素测定v六、尿胆原、尿胆素测定v七、尿中含铁血黄素定性检查上一页 下一页 返回v尿液酸碱度即尿pH值,可反映肾调节体液酸碱平衡的能力。尿液容易因细胞生长而变质,故测尿液pH值标本必须新鲜。一、尿液酸碱度检验上一页 下一页 返回v测定方法v酸碱指示剂法见本章第五节。v临床上进行肾小管酸、碱负荷试验时,可用酸度计精确测定出尿pH值。v报告方式v报告时直接报告出pH值,也可用“酸性”、“弱酸性”、“中性”、“碱性”描述。v参考区间v正常新鲜尿液多为弱酸性,pH值约6.0。因饮食种类影响和生理活动
2、变化,pH波动在5.48.0之间。一、尿液酸碱度检验上一页 下一页 返回v临床意义临床意义v 尿pH在诊断上有特别重要意义的是:肾小管性酸中毒,虽然肾小球滤过功能正常,但肾小管排H和H与Na+交换能力明显减弱,此时尿pH值仍可大于6.5,甚至呈中性或弱碱性。判断泌尿系统结石种类:草酸盐、磷酸盐、碳酸盐结石多见于碱性尿;尿酸盐、胱氨酸结石多见于酸性尿。初步判断感染细菌种类:具有分解尿素能力的细菌如变形杆菌、铜绿假单胞菌所致的泌尿系统感染存在时,尿液多为碱性。一、尿液酸碱度检验上一页 下一页 返回二、尿液蛋白质测定v正常人肾小球滤液中有小分子量蛋白质(约2g24尿),但在通过近端肾小管时,多数蛋白
3、质被重吸收,终尿中蛋白质含量极微,约为0.02g0.08g24尿,一般尿蛋白定性试验为阴性。v健康人尿液中蛋白质含量很少,仅为30130mg/d,随意一次尿蛋白质为580mg/L。尿液蛋白质定性为阴性。若尿液蛋白质定性为阳性,即为Proteinuria。上一页 下一页 返回(一)正常尿中蛋白质成分v如将正常人尿液中微量蛋白质浓缩后经免疫电泳等技术测定,可按其分子量大小分成三组:v第一组:高分子量蛋白质,分子量万,含量极微,包括由肾小管分泌而来的sLgA和由髓伴升支及远曲小管上皮细胞所分泌的T-H糖蛋白。v第二组:中分子量蛋白质,分子量介于万万之间。包括血浆中大部分的蛋白质,但以白蛋白为主,占尿
4、液中蛋白质总量的。v第三组:低分子量蛋白质,分子量万,因多数已经重吸收,因此在尿中含量极少,包括免疫球蛋白的Fc片段、-微球蛋白、-微球蛋白、自由轻链和溶菌酶等。上一页 下一页 返回健康人尿中蛋白质以健康人尿中蛋白质以白蛋白白蛋白为主,还为主,还有少量有少量TH蛋白、分泌型蛋白、分泌型IgA、1 1-微球微球蛋白、蛋白、2 2-微球蛋白微球蛋白等。等。v蛋白尿的定义v各种原因造成尿内蛋白质含量超过0.15g24,或浓度0.1g/L,常规蛋白定性检查为阳性反应即称为蛋白尿,也称临床蛋白尿。(二)蛋白尿形成的原因和机理:上一页 下一页 返回蛋白尿生成的原因v1、肾小球滤过蛋白质超过了肾小管重吸收能
5、力。v2、肾小管病变导致其吸收功能受损。v3、血浆蛋白成分增加,超过了肾小管重吸收能力。v4、肾小管分泌T-H糖蛋白增加。蛋白尿生成原因v定义:v指泌尿系统并无器质性病变,尿内一过性暂时出现蛋白。可见于:v(1)功能性蛋白尿;v(2)体位性蛋白尿;v(3)摄食性蛋白尿。v特征:v尿蛋白电泳仅有白蛋白峰。1.生理性蛋白尿上一页 下一页 返回(1)功能性蛋白尿:v包括剧烈运动、发热、寒冷、以及精神过度紧张等因素所引起的蛋白尿。v在休息或刺激消失后即可恢复正常,尿蛋白定性一般不超过()。v原因:前者是由于肾缺血和乳酸增加,使局部环境改变,蛋白分子缩小和肾小球滤性增加而产生;后者是由于神经反射而使肾血
6、管痉挛或充血,导致肾小球渗透性增加而产生蛋白尿。上一页 下一页 返回(2)体位性蛋白尿v如脊柱前凸者,直立时压迫左肾静脉而致肾脉脉压升高,使通过肾小球过滤的蛋白质重吸收不全,呈暂时性蛋白尿。当卧床休息后不出现蛋白尿,故称直立性蛋白尿。上一页 下一页 返回()摄食性蛋白尿:v如注射分子量小于万的蛋白质,或食入大量蛋白质(清蛋白分子量为.5万),这些蛋白能通过肾小球滤过膜而出现于尿中。上一页 下一页 返回2.病理性蛋白尿v定义:系指因器质性病变,尿内持续性出现的蛋白尿。从蛋白质来源上可分为以下几种类型:v肾性:肾小球滤过膜受损v肾小管重吸收功能障碍v非肾性:肾以下器官感染v异常蛋白质的排泄:(特殊
7、形式蛋白尿)上一页 下一页 返回(1)肾性蛋白尿v又称真性蛋白尿、是由于肾脏病变,血浆蛋白出现在尿中而形成的蛋白尿。从产生的机理上可分为:v肾小球性蛋白尿v肾小管性蛋白尿v混合性蛋白尿上一页 下一页 返回肾小球性蛋白尿v因炎症等因素的损害,导致肾小球毛细血管壁通透性增加及肾小球毛细动脉网的各层静电屏障作用减弱所致的蛋白尿。v特征:以白蛋白增多为主,约占7080,2微球蛋白正常或轻度增多,尿蛋白含量常2g/24(尿)。v主要见于肾小球疾病如急性肾小球肾炎等。上一页 下一页 返回产生的机制v孔径学说肾小球病变时,漏出蛋白质分子的大小,取决于受损膜孔大小的变化。先是小微孔的孔径扩大,中等分子量的蛋白
8、滤出增加,因此尿内白蛋白(分子量66500)增多,以后滤膜增厚变性,小微孔减少或消失,大微孔增多增大,大分子量蛋白如Ig(分子量160000)随着病变的进展而显著增加。上一页 下一页 返回产生的机制v肾小球病变时,根据孔径学说,漏出蛋白质分子的大小,取决于受损膜孔大小的变化。先是小微孔的孔径扩大,中等分子量的蛋白滤出增加,因此尿内白蛋白(分子量66500)增多,以后滤膜增厚变性,小微孔减少或消失,大微孔增多增大,大分子量蛋白如Ig(分子量160000)随着病变的进展而显著增加。实验证明,肾小球的炎症还可使肾小球基底膜上的酸性糖蛋白减少,使其原带有的负电荷消失,破坏肾小球基底膜静电屏障作用,引起
9、蛋白滤出增加。上一页 下一页 返回选择性蛋白尿与非选择性蛋白尿v选择性蛋白尿-若肾小球损伤较轻,以万万的中分子量蛋白尿为主时,通过测定尿中白蛋白球蛋白比值,其比值者为选择性蛋白尿,表示病变不甚严重,对类固醇激素疗效好。v非选择性蛋白尿-病变加重,大分子量蛋白质如Ig、Ig甚至Ig也漏出,则称为非选择性蛋白尿,预后不好。上一页 下一页 返回肾小球性蛋白尿v选择性蛋白尿:判断肾小球损伤程度有一定的参考价值,肾小球损伤比较轻时,主要滤过的物质是清蛋白、转铁蛋白等相对分子量为49万的蛋白质。蛋白质定量为+,当尿蛋白定量3.5g/24h时,称为肾病性蛋白尿,最典型的例子是肾病综合症。v非选择性蛋白尿:反
10、应的是肾小球毛细血管壁有严重的损伤,尿蛋白成分以大和中分子量的蛋白质存在,如免疫球蛋白、补体、清蛋白等。多见于原发性肾小球疾病及继发性肾小球疾病如糖尿病肾炎、红斑狼疮肾炎。如果不及时治疗,会导致肾衰。v是因为感染或中毒所致肾小管损害或继发于肾小球疾病时,近曲小管损伤,重吸收能力下降,出现的蛋白尿称之为肾小管性蛋白尿。v尿中以小分子蛋白质为主(-2微球蛋白、溶菌酶),白蛋白正常或轻度。v尿蛋白定量:12g/24hv定性:为+v常见疾病:肾小管间质病变、中毒性肾间质损害、草药中毒引起的选择性肾小管蛋白尿,常伴有明显的管型肾小管性蛋白尿混合性蛋白尿v肾脏病变同时累及肾小球和肾小管,其蛋白尿特征为低分
11、子量和高分子量蛋白均大量增多,是肾功能不全的指标。见于慢性肾炎,慢性肾盂肾炎、肾小球滤过率降低,慢性阻塞性或非阻塞性间隙性肾脏病变等有关疾病。上一页 下一页 返回(2)特殊形式的蛋白尿v肾小球和肾小管功能均正常,但由于血浆中含有大量低分子蛋白质,致使肾小球滤过液内的蛋白质超过肾小管的重吸收能力而产生溢出性蛋白尿。上一页 下一页 返回血红蛋白尿v在急性溶血性疾病时,红细胞大量破坏,血浆中游离血红蛋白超过肾阈值(1.5g/L)后,即可出现于尿中。可用隐血试验检查。上一页 下一页 返回肌红蛋白尿v骨骼肌或心肌损害时,释放出大量肌红蛋白(分子量16700),易随尿排出。v用80%饱和硫酸胺沉淀Hb后再
12、行隐血检验,若结果呈阳性反应,可证实其存在。上一页 下一页 返回溶菌酶尿v单核细胞性白血病合并高溶菌酶血症、慢性鎘中毒时,血浆中溶菌酶浓度增高,尿中排出也增多。上一页 下一页 返回本-周蛋白尿v本-周蛋白(BJP)于1948年ence-Jones首先发现而命名。v它实属免疫球蛋白的轻链部分,因此又称轻链尿。主要由骨髓瘤细胞制造,因其轻重链的产生失去同步性(每致轻链过剩),或轻重链结合上有缺陷而致血中轻链过剩。上一页 下一页 返回本-周蛋白尿v本-周蛋白分子量很小,单体者仅22000,其二聚体也仅为44000,可自由地通过肾小球滤膜,若其量超过近曲小管所能重吸收的极限,则自尿排出。vBJP尿可见
13、于5070的多发性骨髓瘤和1625的原发性巨球蛋白血症患者。上一页 下一页 返回组织蛋白尿v由于炎症或药物等刺激泌尿系统分泌的蛋白质增多,如-糖蛋白、粘蛋白,肾小管代谢产生的蛋白质和肾组织破坏解离的蛋白质等。v其他:如核蛋白、蛋白胨等。前者见于泌尿系炎症尿中,后者可见于有组织破坏、肿瘤,或脓肿吸收时。上一页 下一页 返回(3)非肾性蛋白尿v指尿内混有来自肾脏以下的泌尿生殖器官的大量血、脓、粘液等含蛋白成份的物质,可致尿蛋白定性阳性。故又称为假性蛋白尿。v这些混入物可引起肉眼可见的混浊且易沉于管底,而真性蛋白尿并不影响尿的外观,它可以在完全透明的尿内存在,但在振荡时产生大量不易消失的泡沫。上一页
14、 下一页 返回二、尿液蛋白质测定方法v(一)定性试验目前临床上应用的蛋白定性试验,检出的灵敏度不尽相同,从0.05.15g/不等。上一页 下一页 返回尿液蛋白质的定性检验尿液蛋白质的定性检验加热乙酸法加热乙酸法:加热可使蛋白质变性凝固,加酸使蛋加热可使蛋白质变性凝固,加酸使蛋白质接近等电点,促使蛋白沉淀。白质接近等电点,促使蛋白沉淀。灵敏度为灵敏度为0.15g/L,影响因素少。影响因素少。磺基水杨酸法磺基水杨酸法:在略低于蛋白质等电点的:在略低于蛋白质等电点的pH条件下,条件下,蛋白质带有正电荷的氨基与带负电荷的磺基水杨酸根蛋白质带有正电荷的氨基与带负电荷的磺基水杨酸根相结合,形成不溶性蛋白沉
15、淀。相结合,形成不溶性蛋白沉淀。灵敏度灵敏度0.05-0.1g/L,某些药物可以造成假阳性。某些药物可以造成假阳性。干化学试带法干化学试带法:蛋白质与溴甲酚蓝、四溴酚蓝二酯:蛋白质与溴甲酚蓝、四溴酚蓝二酯结合,蛋白质离子吸引带相反电荷指示剂,形成复合结合,蛋白质离子吸引带相反电荷指示剂,形成复合物发生颜色改变。物发生颜色改变。只与白蛋白反应,不与球蛋白反应。只与白蛋白反应,不与球蛋白反应。庆大霉素、磺胺、含碘造影剂等1加热乙酸法v原理v加热使蛋白质变性凝固,加稀乙酸使尿液pH值下降接近蛋白质等电点(约为H4.),有利于变性蛋白凝固沉淀。加酸还可消除尿中受热而出现的磷酸盐结晶等。上一页 下一页
16、返回试剂v.0乙酸溶液:v冰乙酸5mL加蒸馏水至100L上一页 下一页 返回操作v取试管一支,加清晰尿液至试管的/处,用试管夹斜持试管下端,于酒精灯火焰上加热尿液的上/段,使之沸腾。滴加冰乙酸滴滴,再继续煮沸,以试管下段未曾受热处作对照,立即按表判读结果。上一页 下一页 返回注意事项v()本法检出灵敏度为50gL15mgL,干扰因素很少被确认为尿蛋白定性试验的参考方法。尿蛋白含量较低时,加酸后才有混浊出现,因此必须坚持加热-加酸-再加热的程序。加入的乙酸量要适当,过多过少均可导致阳性反应程度的减弱。上一页 下一页 返回注意事项v(2)长期禁盐患者,因尿中电解质含量过少可致假阴性,试验时须先于尿
17、液中加滴一滴饱和氯化钠液,再行操作。v(3)陈旧尿液含大量细菌可引起假阳性,标本内含有其他分泌物(如女性生殖道分泌物)或碘造影剂、降血糖药等也可出现假阳性。上一页 下一页 返回请您思考:v导致加热乙酸法假阴性的因素有哪些?v答案:v1.加入的乙酸量过多过少v2.长期禁盐尿中缺乏电解质上一页 下一页 返回v原理:v在略低于等电点的pH条件下,蛋白质带有阳电荷的氨基与带有阴电荷的磺基水杨酸根相结合形成不溶性蛋白盐沉淀而显现混浊现象。2.200g/磺基水杨酸法上一页 下一页 返回v本法操作简便、灵敏度高,可检出少于50g的蛋白尿,又可用以筛查本-周蛋白,本法对选择性及非选择性蛋白尿反应基本一致。故已
18、被确定为蛋白尿定性试验的首选方法。上一页 下一页 返回v00g/L磺基水杨酸水溶液:v取磺基水杨酸20g,用蒸馏水溶解后加至100。试剂上一页 下一页 返回操作v(1)试管法:取试管1支加清晰尿液约1,滴加磺基水杨酸溶液1滴轻轻混匀,于1min内观察结果。v(2)凹玻片法:在凹玻片的两个凹孔内,各加尿液滴(0.2),于一凹孔内加磺基水杨酸液1滴另一孔不加作对照,轻轻混匀,在黑色背景下立即观察结果。上一页 下一页 返回结果判断v清晰透明无变化阴性()v仅在黑色背景下可见极轻度混浊极微量v不需黑色背景即可见到轻度混浊微量v明显的白色混浊,但无颗粒沉淀十v明显混浊出现颗粒十十v明显混浊出现絮状沉淀十
19、十十v严重混浊并有大凝块十十十十上一页 下一页 返回注意事项v(1)本法操作简便,灵敏度高。可检出50g的蛋白尿。易见极微量蛋白,无临床意义。判断结果时间应严格控制在1min内,否则可使反应强度升级。v(2)尿液明显混浊不适用本法测定。v(3)本-周蛋白、蛋白胨、粘蛋白等均可呈阳性反应。上一页 下一页 返回注意事项v(4)超大剂量的青霉素(青霉素钾盐4万ml)、SMZ(200L),PAS(对氨水杨酸50L)时,可致明显混浊,但加热煮沸后均消失,有别于蛋白尿,且此类浓度临床治疗上难以达到。有机碘造影剂可致假阳性,应注意用药史。此外尿中含高浓度尿酸或尿酸盐时也可是假阳性,特点为滴加试剂1min后,
20、尿液逐渐呈蛛丝状混浊,其后漫漫扩散,薄薄覆盖于尿液表面,加热或加碱可迅速消失。上一页 下一页 返回请您思考:v导致磺基水杨酸法呈假阳性的因素有哪些?v答案:v1.观察结果的时间过长v2.超大剂量的青霉素,SMZ、PAS等药物v3.有机碘造影剂v4.高浓度尿酸或尿酸盐上一页 下一页 返回3.试纸法v原理:利用酸碱指示剂的蛋白质误差理v各种酸碱指示剂都有一定p变色范围,在一定pH缓冲液中色调比较稳定当溶液中存在蛋白质时,由于蛋白质离子与带相反电荷的指示剂离子的吸引形成复合物,引起指示剂的进一步电离,从而超越缓冲范围,指示剂发生颜色改变溶液中蛋白质浓度越大,变色程度亦相应越大,这一现象称指示剂的蛋白
21、质误差。上一页 下一页 返回原理:利用酸碱指示剂的蛋白质误差理v四溴酚蓝为酸性的酸碱指示剂(变色范围3.0.6)在溶液中产生指示剂阴离子,在p3的枸椽酸缓冲液中(此p值应低于蛋白质的等电点,使蛋白质在溶液中呈阳离子)与溶液中的蛋白质作用,产生颜色变化后与标准色板比色,测得结果。上一页 下一页 返回方法v取试纸条浸入被检尿中,立即取出,在盛尿瓶边刮去多余尿液,约S后,与所附标准色板进行比色v结果判断上一页 下一页 返回注意事项v.四溴酚蓝对白蛋白的反应较球蛋白、血红蛋白、本一周氏蛋白及粘蛋白灵敏,主要对白蛋白起反应,但肾病患者尿中蛋白质除白蛋白外还有球蛋白故不适用于肾脏病患者。v2.试纸必须防潮
22、、防日晒,避免油污酸碱,使用时手勿触及试剂部分v.浑浊尿不影响比色。但尿色异常如血尿、血红蛋白尿、黄胆尿等,则有妨碍血尿可离心后用上清液检查。上一页 下一页 返回注意事项v尿液过酸(pH)或过碱(p)时,超越试纸缓冲力,可出现假阴性或假阳性反应必要时用稀乙酸或氢氧化钠调整尿液p到之间后再测定蛋白质v尿液必须新鲜,陈旧尿液可因尿素分解而呈碱性,造成假阳性。其他药物、酮体等对本试验均无影响球蛋白、本-周蛋白,一般不呈阳性反应。上一页 下一页 返回(二)尿中本-周蛋白检验v本-周蛋白是免疫球蛋白的轻链单体或二聚体,因抗原性不同而分为(appa)型和(ambda)两型。在浆细胞恶性增生时由异常浆细胞合
23、成并且在未与重链装配前,即从细胞内分泌于血浆中。由于分子量小,故可自由地通过肾小球滤膜而排于尿中。本-周蛋白具有在40时凝固、接近100时又溶解的特性故又称为凝溶蛋白。其定性检查常用热沉淀法。上一页 下一页 返回v原理v利用本-周蛋白加热凝固,煮沸时溶解,温度降低后又出现凝固的特点,测定其存在。v试剂v2mol/乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4.90.1):冰乙酸4.1l、乙酸钠17.5g,蒸馏水溶解后加至100。上一页 下一页 返回v取新鲜透明尿液4l置试管内,加乙酸缓冲液1ml,混匀。在56水浴中15min尿液混浊或出现沉淀,再将试管移置于沸水中3min,如混浊变清或减弱,即为本-周蛋白阳性.如
24、尿液中同时存在白蛋白和球蛋白,煮沸后混浊沉淀比56时增加,可将沸水中的标本趁热立即过滤,滤液从透明至温度降低后又混浊,再煮沸又透明,为本-周氏蛋白阳性。操作上一页 下一页 返回v本-周蛋白的定性检测尚有盐析法、浓盐酸法及对甲苯磺酸试验等,确证试验以醋纤膜电泳为主要手段。本-周蛋白可在球蛋白区出现一条浓集的区带-M带。上一页 下一页 返回注意事项v.尿液必须新鲜,否则白、球蛋白分解变性可干扰试验。v.尿液p必须调整到4.5左右。混浊尿液应离心后取上清液试验。v.除去尿液中白、球蛋白时,动作要迅速并需保持高温,否则也将本-周蛋白滤掉。上一页 下一页 返回注意事项v.本-周蛋白含量过高时,可将尿液稀
25、释后再测,否则在100时溶解不完全;含量太少时,可将滤液分3管,各加等量30g/磺基水杨酸分别置室温、56和100中,当56管比室温和100管显混浊(后两者均无沉淀)时,可判为阳性。上一页 下一页 返回(三)尿蛋白定量v总体要求:v测量范围宽并有较高的灵敏度和特异性,不受白蛋白和球蛋白比值的影响,操作简便快速。常用方法有双缩脲比色法、考马斯亮兰250比色法。丽春红-法及磺基水杨酸-硫酸钠比浊法等。上一页 下一页 返回尿液蛋白质的定量检验尿液蛋白质的定量检验 比浊法比浊法磺基水杨酸磺基水杨酸三氯乙酸三氯乙酸钨酸钨酸氯化苄甲乙氧胺氯化苄甲乙氧胺氯化苯甲烃胺氯化苯甲烃胺 双缩脲法:双缩脲法:经典方法
26、经典方法通过加酸于尿液中使蛋白通过加酸于尿液中使蛋白质沉淀而形成一定的浊度质沉淀而形成一定的浊度碱性环境下,蛋白质与季碱性环境下,蛋白质与季胺盐结合形成不溶性沉淀胺盐结合形成不溶性沉淀染料结合法染料结合法直接法直接法考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250邻苯三酚红邻苯三酚红染料和蛋白质结染料和蛋白质结合时,其最大吸合时,其最大吸收峰发生漂移收峰发生漂移沉淀法沉淀法丽春红丽春红S苯胺蓝苯胺蓝蛋白质与结合的染料在蛋白质与结合的染料在TCA的作用下共沉淀。然的作用下共沉淀。然 后碱性后碱性环境使沉淀复溶,测定吸光度。环境使沉淀复溶,测定吸光度。尿尿液液蛋蛋白白质质电电泳泳尿液标本尿液标本葡聚糖、聚乙烯吡咯烷
27、酮、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、聚乙二醇羧甲基纤维素、聚乙二醇乙酸纤维膜电泳、琼脂或琼乙酸纤维膜电泳、琼脂或琼脂糖电泳、脂糖电泳、SDS-PAGE电泳电泳胶体金、胶体银、考胶体金、胶体银、考马斯亮蓝马斯亮蓝G-250染色染色光密度计扫描、结果分析光密度计扫描、结果分析尿液蛋白质检查的意义尿液蛋白质检查的意义v生理性蛋白尿:生理性蛋白尿:体位性、功能性体位性、功能性v病理性蛋白尿:病理性蛋白尿:肾前性、肾性、肾后性肾前性、肾性、肾后性v蛋白尿的分类:蛋白尿的分类:轻度蛋白尿轻度蛋白尿 4g/24h蛋白尿的选择性蛋白尿的选择性蛋白尿的选择性是判断肾小球损伤严重程度的指标蛋白尿的选择性是判
28、断肾小球损伤严重程度的指标选择性蛋白尿选择性蛋白尿非选择性蛋白尿非选择性蛋白尿选择性蛋白指数(选择性蛋白指数(SPI)SPI=(尿(尿IgG/血清血清IgG)/(尿(尿Alb/血清血清Alb)SPI0.2 选择性差选择性差其他几种选择性蛋白指数其他几种选择性蛋白指数球蛋白球蛋白/白蛋白:白蛋白:0.5非选择性蛋白尿非选择性蛋白尿肾小球蛋白比(肾小球蛋白比(RGP):):SDS-PAGE电泳电泳 RGP=分子量为分子量为6.6万万-9.0万的蛋白质量万的蛋白质量/分子量分子量超过超过15万的蛋白质量万的蛋白质量 7 选择性好选择性好思思考考题题:试试分分析析比比较较急急性性肾肾小小球球肾肾炎炎和
29、和慢慢性性肾肾盂盂肾肾炎炎患患者的尿液特点。者的尿液特点。n急性肾小球肾炎:肾小球性蛋白尿,白急性肾小球肾炎:肾小球性蛋白尿,白蛋白增多为主,约占蛋白增多为主,约占70-80%,2微球蛋白微球蛋白正常或轻度增加。尿蛋白定量正常或轻度增加。尿蛋白定量2g/24hn慢性肾盂肾炎:肾小管性蛋白尿,慢性肾盂肾炎:肾小管性蛋白尿,2微微球蛋白增加为主。白蛋白正常或轻度增加。球蛋白增加为主。白蛋白正常或轻度增加。尿蛋白定量尿蛋白定量20 20 mg/Lmg/L 或尿总蛋或尿总蛋或尿总蛋或尿总蛋 白白白白30mg/24h30mg/24h作为尿微量白蛋白的临界值。作为尿微量白蛋白的临界值。作为尿微量白蛋白的临
30、界值。作为尿微量白蛋白的临界值。临床意义v1.早期肾损害的筛检定期监测有助于早期发现肾脏损害v2.过敏性紫癜的肾功能监测早期发现有助于指导临床防止并发肾损害。v3.肾小球肾炎的病情观察v4.其它尿路感染等2-microglobulinv性质:一种低分子量的蛋白质(性质:一种低分子量的蛋白质(1.18万),是万),是细胞膜上完整组织相溶性抗原细胞膜上完整组织相溶性抗原HLA的一部分。的一部分。v检测方法:放射免疫分析(检测方法:放射免疫分析(RIA)、)、酶免疫分酶免疫分析(析(EIA)v参考值参考值:血血2-M 3.0mg/L 尿尿2-M0.2 mg/Lv临床意义:肾小管疾病、血清临床意义:肾
31、小管疾病、血清2-M异常增高异常增高尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查 1.hemoglobinv正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合,以复合物正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合,以复合物的形式运转至单核的形式运转至单核-巨噬细胞系统被代谢,不能从尿液巨噬细胞系统被代谢,不能从尿液中排出。中排出。v 疾病时尿液中血红蛋白有两个来源:疾病时尿液中血红蛋白有两个来源:1.发生发生血管内溶血管内溶血血,超过珠蛋白的结合能力,游离血红蛋白从尿液中,超过珠蛋白的结合能力,游离血红蛋白从尿液中排出。排出。2.尿路(尤其是上尿路)出血尿路(尤其是上尿路)出血,红细
32、胞在,红细胞在低渗低渗或者高渗或者高渗的环境下破坏逸出的血红蛋白。的环境下破坏逸出的血红蛋白。检测方法:检测方法:试纸法:试纸法:利用血红蛋白中利用血红蛋白中亚铁血红素亚铁血红素具有具有类过氧化物类过氧化物酶酶作用,在邻联甲苯胺等供氢体存在下,使过氧化物作用,在邻联甲苯胺等供氢体存在下,使过氧化物还原为水,而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。还原为水,而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。免疫测定方法:免疫测定方法:利用利用抗人血红蛋白单克隆抗体抗人血红蛋白单克隆抗体临床意义:临床意义:临床意义:临床意义:1 1、尿路炎症、结核等尿中红细胞增多时为阳性。、尿路炎症、结核等尿中红细胞增多时为阳性。、尿路炎症、
33、结核等尿中红细胞增多时为阳性。、尿路炎症、结核等尿中红细胞增多时为阳性。2 2、尿中、尿中、尿中、尿中HbHb增多见于阵发性增多见于阵发性增多见于阵发性增多见于阵发性HbHb尿症,还见于各种中尿症,还见于各种中尿症,还见于各种中尿症,还见于各种中毒、感染、烧伤、输血不合等毒、感染、烧伤、输血不合等毒、感染、烧伤、输血不合等毒、感染、烧伤、输血不合等3 3、明显的血尿和、明显的血尿和、明显的血尿和、明显的血尿和HbHb尿,可用显微镜鉴别。尿,可用显微镜鉴别。尿,可用显微镜鉴别。尿,可用显微镜鉴别。尿血红蛋白测定方法及评价测定方法测定方法原理原理评价评价湿化学法氧化还原法简便、快速,敏感度高,但受
34、VitC等氧化物干扰,特异性差,为过筛检查干化学试带法氧化还原法同上单克隆抗体免疫胶体金法抗原抗体结合法特异性强操作简便、快速v肌肌红蛋白尿检查红蛋白尿检查 肌红蛋白(肌红蛋白(myoglobin,Mb)是横纹肌、心肌细胞内的一是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚铁血红素的蛋白质。当有肌损伤时,肌红蛋白释放种含亚铁血红素的蛋白质。当有肌损伤时,肌红蛋白释放进入血循环,因其分子量较小,易通过肾小球滤过,而排进入血循环,因其分子量较小,易通过肾小球滤过,而排入尿中。其能溶于入尿中。其能溶于80%饱和度的硫酸铵溶液中,而血红蛋饱和度的硫酸铵溶液中,而血红蛋白则不能,可资区别。白则不能,可资区别。检测方法:
35、化学法检测方法:化学法临床意义:临床意义:1、阵发性肌红蛋尿、阵发性肌红蛋尿2、创伤:挤压综合症、子弹伤、烧伤等、创伤:挤压综合症、子弹伤、烧伤等3、组织局部缺血:如心肌梗塞早期、动脉阻塞缺血、组织局部缺血:如心肌梗塞早期、动脉阻塞缺血4、代谢性肌红蛋白尿、代谢性肌红蛋白尿5、原发性肌疾病、原发性肌疾病6、过度剧烈运动或长期行军、过度剧烈运动或长期行军 3.hemosiderin 当发生血管内溶血时,大部分血红蛋白随尿排出,其当发生血管内溶血时,大部分血红蛋白随尿排出,其中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上皮细胞内分解形成血铁黄素
36、,再随细胞脱落至尿中排出。皮细胞内分解形成血铁黄素,再随细胞脱落至尿中排出。检测方法:检测方法:检测方法:检测方法:PrussianPrussian反应,当尿中含有铁血黄素时,其反应,当尿中含有铁血黄素时,其反应,当尿中含有铁血黄素时,其反应,当尿中含有铁血黄素时,其中高铁离子与亚铁氰化钾作用,在酸性环境下,产生蓝中高铁离子与亚铁氰化钾作用,在酸性环境下,产生蓝中高铁离子与亚铁氰化钾作用,在酸性环境下,产生蓝中高铁离子与亚铁氰化钾作用,在酸性环境下,产生蓝色的亚铁氰化钾沉淀。色的亚铁氰化钾沉淀。色的亚铁氰化钾沉淀。色的亚铁氰化钾沉淀。注意事项:注意事项:注意事项:注意事项:1.1.避免铁污染;
37、避免铁污染;避免铁污染;避免铁污染;2.2.清晨第一次尿阳性率较高清晨第一次尿阳性率较高清晨第一次尿阳性率较高清晨第一次尿阳性率较高 临床意义:临床意义:临床意义:临床意义:血管内溶血、行进性血红蛋白尿。血管内溶血、行进性血红蛋白尿。血管内溶血、行进性血红蛋白尿。血管内溶血、行进性血红蛋白尿。TammHorsfall protein TH蛋白由蛋白由Henle袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基复合体产生,是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一复合体产生,是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种重要蛋白。种重要蛋白。检测方法检测方法:酶联免疫吸附法、放射免疫法:酶联
38、免疫吸附法、放射免疫法 临床意义临床意义:协助诊断上尿路疾患:协助诊断上尿路疾患 有助于泌尿系统结石形成机制的研究。有助于泌尿系统结石形成机制的研究。尿液酶测定尿液酶测定尿液酶的来源:尿液酶的来源:血液的酶:血液的酶:淀粉酶、溶菌酶淀粉酶、溶菌酶肾实质的酶:肾实质的酶:肾小管刷状缘肾小管刷状缘(-GT、AAP、LAP、ALP、-GLU)、)、溶菌体溶菌体(NAG、ACP、-葡萄糖醛酸葡萄糖醛酸苷酶)、苷酶)、胞浆胞浆(LDH)及线粒体及线粒体(AST)尿路及生殖系统的酶:尿路及生殖系统的酶:前列腺前列腺(ACP、NAG)、)、精液精液(LDH、hyaluronic acid)、)、肿瘤细胞肿瘤
39、细胞尿液酶测定时尿液标本的处理方法:尿液酶测定时尿液标本的处理方法:v尿液通常为弱酸性,且蛋白质浓度较低,不利于尿尿液通常为弱酸性,且蛋白质浓度较低,不利于尿酶活力的保存,因此必须酶活力的保存,因此必须及时测定和处理及时测定和处理。v大部分尿酶活性比血浆酶活性低,在测定时适当加大部分尿酶活性比血浆酶活性低,在测定时适当加大标本用量或延长酶作用时间。大标本用量或延长酶作用时间。v尿液中含有较高浓度的低分子物质,如尿素、尿酸、尿液中含有较高浓度的低分子物质,如尿素、尿酸、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等,他们可能是某些酶的抑制肌酐、硫酸盐、磷酸盐等,他们可能是某些酶的抑制剂,因此必须对尿液标本进行预处理:剂
40、,因此必须对尿液标本进行预处理:超滤法、透析超滤法、透析法、凝胶过滤法法、凝胶过滤法1.N-乙酰乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-D-glucosaminidase,NAG)NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶,存在于所是一种位于溶酶体内的酸性水解酶,存在于所有组织中,以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。有组织中,以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。临床应用:临床应用:各种肾脏疾病:急慢性肾功能不全、肾病综合症各种肾脏疾病:急慢性肾功能不全、肾病综合症肾移植排斥反应:早期诊断肾移植排斥反应:早期诊断药物性肾损害:药物性肾损害:其他系统疾病:糖尿病肾病、高血压肾病其他
41、系统疾病:糖尿病肾病、高血压肾病2.-葡萄糖苷酶(葡萄糖苷酶(-glucosdiase,-GLU)-GLU主要存在于主要存在于肾小管上皮细胞刷状缘,肾小管上皮细胞刷状缘,在血在血清中的含量极低,且分子量大(清中的含量极低,且分子量大(9万),不易通过肾小万),不易通过肾小球,因而尿中的球,因而尿中的-GLU主要来自肾小管上皮细胞。主要来自肾小管上皮细胞。测定:用麦芽糖做底物,经测定:用麦芽糖做底物,经-GLU的水解作用生的水解作用生成葡萄糖,再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。成葡萄糖,再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。临床意义:临床意义:肾小管损伤的敏感指标肾小管损伤的敏感指标3.谷氨
42、酰转移酶(谷氨酰转移酶(-glutamyl transferase,-GT)q-GT广泛存在于人体各组织中,以肾、肝、胰等组广泛存在于人体各组织中,以肾、肝、胰等组织含量最高。织含量最高。q尿中尿中-GT浓度较高,原尿无需预先浓缩。浓度较高,原尿无需预先浓缩。q用用-谷氨酰对硝基苯胺做底物,测定游历的对硝基苯谷氨酰对硝基苯胺做底物,测定游历的对硝基苯胺量。胺量。q临床意义:临床意义:-GT常作为药物性肾损害的诊断指标。常作为药物性肾损害的诊断指标。-GT在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高 -GT在慢性肾衰、肾癌时降低。在慢性肾衰、肾癌时降低。尿液绒毛膜促性腺激
43、素检验尿液绒毛膜促性腺激素检验 HCG是胎盘绒毛膜滋养层细胞产生的一种具是胎盘绒毛膜滋养层细胞产生的一种具有促性腺发育的蛋白类激素。由有促性腺发育的蛋白类激素。由和和两个肽两个肽链(或亚基组成)。其主要功能是刺激黄体,链(或亚基组成)。其主要功能是刺激黄体,有利于雌激素和黄体酮持续分泌,以促进子有利于雌激素和黄体酮持续分泌,以促进子宫蜕膜的形成,使胎盘生长成熟。临床上将宫蜕膜的形成,使胎盘生长成熟。临床上将其作为早期妊娠及滋养层肿瘤诊断的主要参其作为早期妊娠及滋养层肿瘤诊断的主要参考指标。考指标。v尿液尿液HCG检验检验(一)胶乳凝集抑制试验(一)胶乳凝集抑制试验(二)酶联免疫试验(二)酶联免疫试验(三)放射免疫吸附试验(三)放射免疫吸附试验(四)胶体金标记免疫试验(四)胶体金标记免疫试验方法学评价方法学评价HCG检查方法有生物法、化学检查方法有生物法、化学法、免疫学等,免疫法的检测手段不断更法、免疫学等,免疫法的检测手段不断更新,向特异、简便、快速、普及等方向发新,向特异、简便、快速、普及等方向发展。展。vHCG检查的临床意义检查的临床意义1、诊断早期妊娠。、诊断早期妊娠。2、异常妊娠与胎盘功能的鉴定、异常妊娠与胎盘功能的鉴定3、滋养细胞肿瘤诊断与治疗监测、滋养细胞肿瘤诊断与治疗监测4、其他、其他