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1、葡萄糖的耐量实验葡萄糖的耐量实验小组人员王敏,张静雅,李诗雨,魏斌糖尿病的发病机制糖尿病的发病机制 治疗方法治疗方法u病因:胰岛素分泌不足及胰岛素受体缺陷所致的代谢性疾病.由于胰岛素调节血糖水平,故糖尿病患者的血糖水平升高.是常见的内分泌紊乱性疾病u分类:I型糖尿病 II型糖尿病 继发性糖尿病l l症状症状:(三多一少三多一少)多饮多饮 多食多食 多尿多尿 消瘦消瘦l l治疗方法治疗方法:口服药物治疗口服药物治疗常用的有：化学类有促胰岛素分泌剂、双胍类、常用的有：化学类有促胰岛素分泌剂、双胍类、AGI AGI 等；等；胰岛素治疗胰岛素治疗适应症：适应症：1 1型糖尿病患者，由于自身胰岛型糖尿病
2、患者，由于自身胰岛 细胞功能受损，胰岛细胞功能受损，胰岛素分泌绝对不足，在发病时就需要胰岛素治疗，而且需终素分泌绝对不足，在发病时就需要胰岛素治疗，而且需终生胰岛素替代治疗以维持生命和生活。约占糖尿病总人数生胰岛素替代治疗以维持生命和生活。约占糖尿病总人数5%5%。2 2 型糖尿病患者在生活方式和口服降糖药联合治疗的基型糖尿病患者在生活方式和口服降糖药联合治疗的基础上，如果血糖仍然未达到控制目标，即可开始口服药物础上，如果血糖仍然未达到控制目标，即可开始口服药物和胰岛素的联合治疗。一般经过较大剂量多种口服药物联和胰岛素的联合治疗。一般经过较大剂量多种口服药物联合治疗后合治疗后 HbA1cHbA
3、1c仍大于仍大于 7.0%7.0%时，就可以考虑启动胰岛素时，就可以考虑启动胰岛素治疗。治疗。口服葡萄糖耐量试验口服葡萄糖耐量试验(OGTT)临床上临床上OGTTOGTT主要适用于下列情况主要适用于下列情况:（1）无糖尿病症状，空腹血糖异常，或偶尔出现糖尿，或有明显糖尿病家族史者；（2）有糖尿病症状，血糖水平不够糖尿病诊断标准者；（3）妊娠期或甲状腺功能亢进出现糖尿者；（4）不明原因肾病与视网膜病者。(5)肥胖、血脂紊乱、高血压，高尿酸血症者；(6)屡发皮肤疖肿、皮肤感染，泌尿系感染者。实验目的实验目的掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理掌握血糖变化的临床生理意义掌握口服葡萄糖耐量试验的原理，适用
4、人群和临床意义。实验原理实验原理葡萄糖耐量试验（OGTT）是一种葡萄糖负荷试验，用于检查人体胰岛素B细胞功能和机体对糖的调节能力。正常人进食后血糖都会暂时性升高，3060分钟后可升到最高峰，但一般不超过8.9mmol/L，2小时左右又会回到空腹水平。这种现象称为耐糖现象。若内分泌失调或神经系统功能紊乱，则调节功能失常，食入大量糖后血糖浓度可急剧上升，短时间不能恢复到原值，称为耐糖失常现象。所以观察耐糖现象可以了解调节血糖的各种机能是否健全。血清葡萄糖浓度测定方法血清葡萄糖浓度测定方法1、GOD-POD法(酶测法)2、邻甲苯胺法3、其他方法举例 (福林马尔露斯（Folin-Malmors）超微量
5、法)1、GOD-POD法：以过氧化物酶作指示酶的偶联酶反应定量法。葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。偶联反应偶联反应 也作偶连反应、耦联反应、氧化偶联，也作偶连反应、耦联反应、氧化偶联，是由两个有机化学单位进行某种化学反应而得到是由两个有机化学单位进行某种化学反应而得到 一个有机分子的过程一个有机分子的过程.反应方程式反应方程式:GOD 葡萄糖葡萄糖+O+O2 2+H+H2 2O O 葡萄糖酸葡萄糖酸+
6、2H+2H2 2OO2 2 POD2H2H2 2OO2 2+4-+4-氨基安替比林氨基安替比林+苯酚苯酚红色醌类化合物红色醌类化合物2、邻甲苯胺法：葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Suchiff碱。Suchiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比与进行同样处理的标准葡萄糖液相比较，即可求出样品中葡萄糖的含量。由于邻甲苯胺只与醛糖作用显色，故此种测定方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需除去血浆或血清中的蛋白质。反应方程式反应方程式:H+葡萄糖 5-羟甲基-2-呋喃甲醛+3H2 2O 加热5-羟甲基-2-呋喃甲醛
7、+邻甲苯胺Schiff碱+H2 2O3、其他方法举例 福林马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法：在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原为低铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生成亚铁氰化铁（普鲁士蓝），与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，即可求出血糖含量。其反应如下：血糖测定方法归纳血糖测定方法归纳:血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光固相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度法和酶学方法。分光光度法中常见的是
8、邻甲光度法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法，是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与苯胺法，是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族胺类，可生成有色衍生物这一原理建某些芳香族胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法立的。酶学方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶法等。和葡萄糖脱氢酶法等。(己糖激酶法己糖激酶法)原理是用已原理是用已糖激酶催化葡萄糖同糖激酶催化葡萄糖同ATPATP反应，产生葡萄糖反应，产生葡萄糖6 6磷酸及磷酸及ADPADP，葡萄糖，葡萄糖6 6磷酸在葡萄糖磷酸在葡萄糖6 6磷磷酸脱氧酶存在时，同酸脱氧酶存在时，同NADPNADP
9、作用产生作用产生NADPHNADPH及及66磷酸葡萄糖酸内酯，磷酸葡萄糖酸内酯，NADPHNADPH在在340nm340nm有吸收峰。有吸收峰。葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖产生葡萄糖酸内酯和双氧水的反应而建立。血糖的酶法测定是利用酶的特异性催化而建立起来的，具有高度的特异性，同时，可以避免使用化学方法中的一些有害试剂等。操作过程简便，便于自动化检测应用应用GOD-PODGOD-POD法测定血糖浓度来法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量检测葡萄糖耐量实验器材与试剂实验器材与试剂:器材：5ml移液管50或100ul微量可调式移液器721E分光光度计1cm比色皿37恒温水浴试剂试剂:1、0.
10、1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠称取无水磷酸氢二钠8.67g8.67g及无水磷酸二氢钾及无水磷酸二氢钾5.3g5.3g溶于蒸馏水溶于蒸馏水800ml800ml中，调中，调pH7.0pH7.0，定容至，定容至1L1L。2、酶试剂 取过氧化物酶取过氧化物酶12000U12000U，葡萄糖，葡萄糖氧化酶氧化酶1200U1200U，4-4-氨基安替比林氨基安替比林10mg10mg，置，置44保存，保存，可稳定存放可稳定存放3 3个月。个月。3、酚溶液 称取重蒸馏酚称取重蒸馏酚100mg100mg溶于蒸馏水溶于蒸馏水100ml100ml中，用中，用棕色棕色瓶贮存。瓶贮存。4、酶酚
11、混合试剂 将酶试剂及酚溶液等将酶试剂及酚溶液等量混合，量混合，44可以存放可以存放1 1个月。个月。5、12mmol/L苯甲酸溶液 取苯甲酸取苯甲酸1.4g1.4g，于于800ml800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至容至1L1L。6、葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）称取已干燥恒重的无水葡萄糖称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g1.802g，溶于约，溶于约70ml 12mmol/L70ml 12mmol/L苯甲苯甲酸酸溶液中，以溶液中，以12mmol/L12mmol/L苯苯甲酸甲酸溶液定容至溶液定容至100ml100ml。2h2h后方可使用。
12、（后方可使用。（防止氧化的作用，葡萄糖为单糖，含醛基，易氧化成羧基，加入苯甲酸，平衡向左移动）7、葡萄糖标准工作液（5mmol/L）吸取吸取葡萄糖标准贮存液葡萄糖标准贮存液5.00ml5.00ml放于放于100ml100ml容量瓶中，容量瓶中，用用12mmol/L12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。血清中葡萄糖溶度的测定血清中葡萄糖溶度的测定 项目项目 空白管空白管 标准管标准管 测定管测定管血清血清/ml/ml0.0200.020葡萄糖标准葡萄糖标准液液/ml/ml0.0200.020蒸馏水蒸馏水/ml/ml0.0200.020酶酶-酚混合试酚混合试剂剂/
13、ml/ml3.003.003.003.003.003.00混匀，置37水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。计算公式计算公式:血清葡萄糖浓度血清葡萄糖浓度血清葡萄糖浓度血清葡萄糖浓度=（A A A A测定测定测定测定/A A A A标准标准标准标准）*5 5 5 5 mmolmmolmmolmmol/L/L/L/L参考值:空腹血清葡萄糖的浓度:3.896.11mmol/L注意事项：注意事项：实验前受试者应充分休息，避免体力活动，试验中亦不能吸烟、喝咖啡，以免影响实验结果。葡萄糖氧化酶对-D葡萄糖高度特异，溶液中葡萄糖约36%为型，64%为型。葡
14、萄糖的完全氧化需要型到型的变旋反应。新配制的葡萄糖标准液主要是型，故需放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。葡萄糖氧化酶法可以直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测定样品以草酸钾-氟化钠做抗凝剂以抑制糖酵解。严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。临床意义临床意义:生理性高血糖:可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺素分泌增加时。病理性高血糖 （1）糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。（2）内分泌腺功能障碍
15、：甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进，引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等，引起血糖增高。（4）脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动。病理性低血糖：特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性和胰岛素瘤等。临床诊断临床诊断:正常耐糖量：空腹血糖6.1mmol/L，口服1小时内血糖值升高至最高峰，但不超过11.1mmol/L，2小时后血糖水平（2hPG）基本恢复空腹水平，即2hPG7.8mmol/L。各次
16、尿液中均未检出糖。空腹血糖损害（IFG）：6.1mmol/LFPG7.0mmol/L，2小时后血糖水平7.8mmol/L。糖耐量减退（IGT）:FPG7.0mmol/L以及7.8mmol/L2hPG11.1mmol/L糖尿病：FPG7.0mmol/L,2hPG11.1mmol/L。耐量增加 见于肾上腺皮质功能减退患者，垂体前叶功能减退、甲状腺功能减退及胰岛素分泌过多。其曲线特征是：（1）空腹血糖值低于正常值；（2）服糖后不出现血糖高峰；（3）1小时内血糖即可恢复原值诊 断条件 静脉（全血）mmol/l毛细血管 mmol/l静脉（血浆）mmol/l糖尿病空腹 6.1 6.1 7.0服糖后2h 10.011.111.1糖耐量受损空腹 6.1 6.1 7.0服糖后2h 6.710.07.811.17.811.1空腹血糖受损 空腹5.6 6.15.6 6.16.1 7.0服糖后2h 6.7 7.8 7.8肾性糖尿，耐糖量曲线属正常，服糖后出现糖尿，此现象称为肾性糖尿。1616 1414mmolmmol/L/L 1212糖耐量正常糖耐量正常 1010糖耐量减退糖耐量减退 8 8空腹血糖损害空腹血糖损害 6 6糖尿病性他糖量糖尿病性他糖量 4 4 2 2 0 0 30 60 90 120 30 60 90 120 测定时间测定时间（minmin