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1、实验十四：分枝杆菌实验目的掌握结核分枝杆菌的基本特征和常用鉴定方法。掌握临床标本中检查抗酸杆菌的方法。实验内容1、示教：卡介苗（减毒结核分枝杆菌）和耻垢分枝杆菌在罗氏培养基上的生长表现。2、痰标本直接涂片检查抗酸杆菌：抗酸染色法。3、尿标本漂浮集菌检查抗酸杆菌。示教：卡介苗（减毒结核分枝杆菌）和耻垢分枝杆菌在罗氏培养基上的生长表现：改良罗氏培养基是专门用于分枝杆菌的分离培养的，主要成分为甘油、鸡蛋液、马铃薯粉、孔雀绿。结核分枝杆菌的培养特性：1、懒：初次分离需2-8周才能看到菌落，一代需要18小时。2、馋：营养要求高，专性需氧。3、丑：菌落呈菜花样，干燥、粗糙、灰白或灰黄，凸起。耻垢分枝杆菌的
2、培养特性：生长速度较快，1周就能长出，菌落颜色更黄。痰标本直接涂片检查抗酸杆菌：涂片：标本经适当处理后直接涂片或厚膜涂片。用接种环直接挑取标本中脓性或干酪样部分痰，制成20MMX25MM大小的均匀薄涂片，或经多次薄涂片制成厚涂片。自然干燥后火焰固定。抗酸染色：1、初染：将涂片用夹子夹住，表面覆盖一层吸水纸，滴加石碳酸复红，并在载玻片下方用酒精灯弱火加热至出现蒸汽（勿煮干或煮沸），随时补充染料以防干涸，持续5分钟，水洗。2、脱色：用3%盐酸酒精脱色，直至无红色染液脱下，水洗。3、复染：用美兰染1分钟，水洗，吸干，在油镜下观察。结果观察：淡蓝的背景下可见染成红色的细长或略带弯曲的杆菌，有分枝生长趋向，此即为抗酸阳性杆菌，其他细菌或细胞被染成蓝色，根据各实验室的标准报告：-，+，+，+，+，+。结核分枝杆菌镜下形态尿标本漂浮集菌检查抗酸杆菌取尿液10-20ml，放入三角烧瓶中，高压灭菌。加1ml汽油用力震荡10分钟。再加水至瓶颈上，静置30分钟。用吸管小心吸取瓶颈处泡沫上层液，滴于玻片中央，烘干后再滴，重复5-6次，直至适宜的厚度，待干后固定。抗酸染色查找抗酸阳性杆菌。思考题抗酸染色法的原理。结核分枝杆菌的传播途径和抵抗力与其培养特性之间的关系。