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1、实验二-叶绿体中色素的提取和分离实验目的实验目的 掌握提取和分离叶绿体色素的方法，探究叶绿体中掌握提取和分离叶绿体色素的方法，探究叶绿体中色素的种类。色素的种类。实验材料实验材料叶绿体中色素的提取和分离叶绿体中色素的提取和分离新鲜的绿色叶片新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片如菠菜叶片)。1、约5克的菠菜緑叶，剪碎，放入研钵中。2、研钵中加入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10mL无水乙醇。3、迅速研磨。4、将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤，将过滤液收集到烧杯或试管中。2、分离色素的步骤制备滤纸条：将预备在试验桌上的滤纸条一端剪去两个角作标记，在距离这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。画滤液细线：沿铅笔线
2、轻轻均匀地画一道线，每次划完尽量吹干，用提取液反复划好几次，不要弄破纸条。层析分离叶绿体中的色素：将3mL层析液倒入烧杯中，注意将纸条画有滤液细线的一端置于烧杯中的层析液中，注意注意千万不要将滤液细线浸没在层析液中。（干燥后）观察实验结果：四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b叶绿体中色素的提取和分离叶绿体中色素的提取和分离实验结果实验结果问题讨论：1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么？2、将滤液放在试管中，为什么要及时用棉塞将试管塞严？3、画滤液细线时重复画几次的目的是什么？1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么？
3、二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速；碳酸钙的作用是保护叶绿素不分解2、将滤液放在试管中，为什么要及时用棉塞将试管塞严？滤液含有丙酮，丙酮有毒，防止挥发3、画滤液细线时重复画几次的目的是什么？增加色素的含量，使分离后的色素带更加清晰问题讨论：问题讨论：4.为什么不能让滤液细线触及层析液？5.观察实验结果有什么现象？滤纸条上出现了几条色素带？每条色素带的颜色和排序如何？。问题讨论：4.为什么不能让滤液细线触及层析液？层析液会溶解色素使色素无法分离；5.观察实验结果有什么现象？滤纸条上出现了几条色素带？每条色素带的颜色和排序如何？滤纸条上将分离出四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和
4、黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素（最快）、叶黄素、叶绿素a（最多）和叶绿素b（最慢）。绿绿绿绿叶叶叶叶中中中中的的的的色色色色素素素素类胡萝卜素类胡萝卜素类胡萝卜素类胡萝卜素（含量约（含量约（含量约（含量约1/41/41/41/4）叶绿素叶绿素叶绿素叶绿素（含量约（含量约（含量约（含量约3/43/43/43/4）胡萝卜素（橙黄色）胡萝卜素（橙黄色）胡萝卜素（橙黄色）胡萝卜素（橙黄色）叶黄素（黄色）叶黄素（黄色）叶黄素（黄色）叶黄素（黄色）叶绿素叶绿素叶绿素叶绿素a a a a（蓝绿色）（蓝绿色）（蓝绿色）（蓝绿色）叶绿素叶绿素叶绿素叶绿素b b b b（黄绿色）（黄绿色）（黄绿色）（黄绿色）实验
5、关键:1.选材时应注意选择选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿鲜嫩、色浓绿、无浆汁、无浆汁的叶片的叶片.(如菠菜叶如菠菜叶)2.画滤液细线时应以画滤液细线时应以细、齐、直细、齐、直为标准，重复为标准，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复2-3次。次。3.层析时不要让滤液细线触及层析液层析时不要让滤液细线触及层析液。谢谢大家谢谢大家!随堂演练：1.通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，从上到下依次为（）A.胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素bB.胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素C.叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素D.叶黄素、叶绿素a、
6、叶绿素b、胡萝卜素2.下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是（）A.提取高等植物叶绿体中的色素B.用纸层析法分离色素C.了解各种色素的吸收光谱D.验证叶绿体中所含色素的种类3.用纸层析法将色素进行分离,在滤纸条上出现的最窄的一条色素带的颜色是（）A.黄色B.橙黄色C.黄绿色D.蓝绿色4.提取叶绿体中的色素时要加丙酮，其原因是（）A.让色素溶解B.防止叶绿素被破坏C.便于将叶片研磨成匀浆D.促使叶绿体中色素分离5.在叶绿体色素的提取和分离实验中，在滤纸条上扩散速度最快的色素是（）A.叶绿素aB.叶绿素bC.胡萝卜素D.叶黄素能力提高练习：(1)在圆形滤纸的中央，点上叶绿
7、体色素的提取液进行层析，随着层析液从滤纸的中央向四周扩散，形成四个色素环带，排在最里圈的色素是（）A.橙黄色B.黄绿色C.蓝绿色D.黄色(2)在做“叶绿体中色素的提取和分离”实验时，向研钵中加入SiO2的目的是：，加入CaC03的目的是在盛有层析液的烧杯上盖上培养皿盖的是在滤纸条上扩散速度最慢的色素带是其颜色是叶绿素叶绿素b b(3)某同学在做“叶绿体中色素的提取分离”实验时，操作情况如下所述，结果实验失败，请指出其错误所在:将5克新鲜完整的菠菜叶，放在研钵中，加入丙酮、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨。(原因是没有去除粗叶脉和将叶剪碎，这样降低了叶绿素的提取率）用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，并连续迅速地重复划23次。(原因是上一次滤液细线未干燥，即划下一次线，使滤液线过粗或线上色素量较低把划好细线的滤纸条插入层析液中，并不断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散。（原因是由于摇晃，层析液接触液线，溶解了色素）.