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1、关于菠菜色素的提取与分离第一页，本课件共有24页实验目的实验目的1、学习从植物中提取色素的方法。、学习从植物中提取色素的方法。2、学习薄层色谱和柱色谱的原理及其操、学习薄层色谱和柱色谱的原理及其操作方法。作方法。第二页，本课件共有24页实验原理实验原理 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿色绿色)、胡萝卜素、胡萝卜素(橙黄色橙黄色)和叶黄素和叶黄素(黄色黄色)等多种等多种天然色素。天然色素。通过柱色谱和薄层色谱对菠菜叶中的上述通过柱色谱和薄层色谱对菠菜叶中的上述几种色素进行分离。几种色素进行分离。第三页，本课件共有24页实验原理实验原理 薄层色谱，常用薄层色谱，常用TL
2、CTLC表示，属于固液吸附表示，属于固液吸附色谱。化合物在薄层板上的吸附剂（色谱。化合物在薄层板上的吸附剂（固定相固定相）和）和溶剂展开剂（溶剂展开剂（流动相流动相）之间进行分离，由于各）之间进行分离，由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。也就是在反复的吸附解析吸附分离的目的。也就是在反复的吸附解析吸附过程中，吸附能力较弱的溶质，首先被展开过程中，吸附能力较弱的溶质，首先被展开剂解析下来，随展开剂推向前去；而吸附能剂解析下来，随展开剂推向前去；而吸附能力强的溶质解
3、析较慢，被展开剂推移不愿，力强的溶质解析较慢，被展开剂推移不愿，从而达到分离的目的。从而达到分离的目的。第四页，本课件共有24页实验原理实验原理展开前展开前展开后展开后吸附吸附解析解析吸附吸附解析解析第五页，本课件共有24页实验原理实验原理在色谱法中，展开剂移动的速率与溶质移动的速在色谱法中，展开剂移动的速率与溶质移动的速率的比值，常用比移值率的比值，常用比移值Rf来来表示表示:第六页，本课件共有24页溶剂的洗脱能力按下列次序递增：溶剂的洗脱能力按下列次序递增：石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、氯仿、乙醚、乙酸乙
4、酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、乙酸。甲醇、水、吡啶、乙酸。吸附剂吸附剂 常用吸附剂有氧化铝、硅胶等。吸附剂对常用吸附剂有氧化铝、硅胶等。吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越强。团，其吸附能力也越强。实验原理实验原理第七页，本课件共有24页实验原理实验原理前沿线色斑起始线第八页，本课件共有24页实验原理实验原理薄层色谱的用途：薄层色谱的用途：1 1、化合物的定性检验、化合物的定性检验2 2、快速分离少量物质、快速分离少量物质3 3、跟踪反应
5、进程、跟踪反应进程4 4、化合物纯度的检验、化合物纯度的检验第九页，本课件共有24页实验原理实验原理 柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱内装有固体吸附剂柱内装有固体吸附剂(固定相固定相)如氧化铝或硅胶。如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂(流动相流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端
6、流出，根据不同颜色分段收集。序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。第十页，本课件共有24页实验原理实验原理第十一页，本课件共有24页实验装置实验装置第十二页，本课件共有24页实验步骤实验步骤1、菠菜色素的提取、菠菜色素的提取 2、薄层层析、薄层层析 3、柱层析、柱层析 第十三页，本课件共有24页菠菜色素的提取菠菜色素的提取1、研磨、研磨 在研钵中放入在研钵中放入10 g新鲜并剪新鲜并剪碎的菠菜叶，加入碎的菠菜叶，加入15 mL3：2(体积比体积比)石油醚一乙醇混合液，石油醚一乙醇混合液，适当研磨适当研磨(不要研成糊状，否则不要研成糊状，否则会给分离造成困难会给分离造成困难)，将提取液，将提
7、取液用滴管转移到分液漏斗中。反用滴管转移到分液漏斗中。反复三次，合并提取液。复三次，合并提取液。第十四页，本课件共有24页2、洗涤和干燥、洗涤和干燥 向提取液中加入向提取液中加入l0 mL饱饱和和NaC1溶液，弃去水层，溶液，弃去水层，再用再用l0 mL蒸馏水洗涤两次。蒸馏水洗涤两次。将有机层转入干燥的小锥形将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加无水硫酸钠干燥半瓶中，加无水硫酸钠干燥半小时。小时。菠菜色素的提取菠菜色素的提取第十五页，本课件共有24页3、蒸馏、蒸馏 将干燥后的液体过滤至将干燥后的液体过滤至圆底烧瓶中，进行蒸馏，圆底烧瓶中，进行蒸馏，直至烧瓶中浓缩液直至烧瓶中浓缩液1mL左左右。右。菠
8、菜色素的提取菠菜色素的提取第十六页，本课件共有24页薄层层析薄层层析1、点样、点样 先用铅笔在距薄层板一端先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超上小心点样，斑点直径一般不超过过2mm。若在同一板上点几个。若在同一板上点几个样，样点间距离应为样，样点间距离应为1-1.5cm。第十七页，本课件共有24页2、展开、展开 在层析缸中加入配好的展开剂，在层析缸中加入配好的展开剂，使其高度不超过使其高度不超过1cm。将点好的薄。将点好的薄层板小心放入层析缸中，点样一端层板小心放
9、入层析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿取出，尽快在板上标上展开剂前沿位置。位置。薄层层析薄层层析第十八页，本课件共有24页薄层层析薄层层析色素种类色素种类胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素a a叶绿素叶绿素b b展展开开剂剂1 1a ab bR Rf f展展开开剂剂2 2a ab bR Rf f薄层层析结果薄层层析结果展开剂：展开剂：（1 1）石油醚）石油醚-丙酮，体积比为丙酮，体积比为4:1 （2 2）石油醚）石油醚-乙酸乙酯，体积比为乙酸乙酯，体积比为3
10、:2第十九页，本课件共有24页柱层析柱层析1、装柱、装柱 在层析柱中加入在层析柱中加入60mL石油醚，石油醚，称取称取30g中性氧化铝中性氧化铝缓缓缓缓加入层加入层析柱中。打开下端活塞，放出析柱中。打开下端活塞，放出溶剂，直至氧化铝表面剩下溶剂，直至氧化铝表面剩下12mm高，关闭活塞。高，关闭活塞。第二十页，本课件共有24页柱层析柱层析2、过柱、过柱 将菠菜色素的浓缩液用滴管小心将菠菜色素的浓缩液用滴管小心滴加到层析柱顶部。加完后打开滴加到层析柱顶部。加完后打开下端活塞，让液面下降到柱面以下端活塞，让液面下降到柱面以下下1mm左右，关闭活塞。加数左右，关闭活塞。加数滴石油醚，打开活塞，使液面滴
11、石油醚，打开活塞，使液面下降经过几次反复，使色素全下降经过几次反复，使色素全部进入柱体。部进入柱体。第二十一页，本课件共有24页柱层析柱层析3、洗脱、洗脱 从柱顶加入石油醚从柱顶加入石油醚-丙酮溶液丙酮溶液（9:1），层析即开始进行，用），层析即开始进行，用锥形瓶收集。当第一个有色成锥形瓶收集。当第一个有色成分即将滴出时，取另一锥形瓶分即将滴出时，取另一锥形瓶收集。接收完后用石油醚收集。接收完后用石油醚-丙酮丙酮溶液（溶液（7:3）洗脱，换锥形瓶接）洗脱，换锥形瓶接收。收。第二十二页，本课件共有24页注意事项注意事项1、点样不能戳破薄层板面，各样点间距、点样不能戳破薄层板面，各样点间距1-1.
12、5cm，样点直径应不超过，样点直径应不超过2mm。2、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则，无法确定展开剂上升高度，即无法求得则，无法确定展开剂上升高度，即无法求得Rf 值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。对位置。3、层析柱中氧化铝表面任何时候都不得露出液、层析柱中氧化铝表面任何时候都不得露出液面，以防有空气进入。面，以防有空气进入。4、待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱，以、待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱，以防有拖尾影响分离效果。防有拖尾影响分离效果。第二十三页，本课件共有24页感感谢谢大大家家观观看看第二十四页，本课件共有24页