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1、1、实验原理：（1）斐林试剂斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：由蓝色变成砖红色砖红色(沉淀)。斐林试斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦葡萄糖、麦芽糖、果糖芽糖、果糖是还原糖是还原糖。（2）苏丹苏丹染液染液遇脂肪的颜色反应为遇脂肪的颜色反应为橘黄色橘黄色，苏丹苏丹染液染液遇脂肪的颜色反应为遇脂肪的颜色反应为红色红色。（3）蛋白质可与蛋白质可与双缩脲试剂双缩脲试剂产生产生紫色紫色反应（肽键）反应（肽键）。第1页/共23页（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定（一）生物组织
2、中可溶性还原糖的鉴定1.1.实验原理实验原理 当质量浓度为0.1g/mL0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)Cu(OH)2 2悬浊液。Cu(OH)Cu(OH)2 2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的CuCu2 2O O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。RRCHOCHO+2Cu(OH)+2Cu(OH)2 2RRCOOHCOOH+CuCu2 2O O+2H+2H2 2O O第2页/共23页试剂配制试剂配制 甲液（0.1g/mL0.1g/mL的氢氧化钠溶液）斐林试剂 乙液（0
3、.05g/mL的硫酸铜溶液）甲液乙液等量混合，现用现配，甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后切不可分开滴加，或者久置后才用。才用。第3页/共23页（二）生物组织中蛋白质的鉴定（二）生物组织中蛋白质的鉴定1 1 实验原理实验原理 在碱性溶液（NaOHNaOH）中，双缩脲（H H2 2NOC-NH-CONHNOC-NH-CONH2 2）能与Cu Cu 2+2+作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。第4页/共23页试剂配制试剂配制 A A液（0.1g/mL0.1g/mL的氢氧化钠溶液
4、）双缩脲试剂 B B液（0.01g/mL0.01g/mL的硫酸铜溶液）第5页/共23页2、实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质3、实验选材（1、材料应富含相关物质，使现象更加明显；2、材料本身应无色，以免对结果产生干扰）（1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨，也可用白萝卜替代。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）（2）做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡34小时。（3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆(可用豆浆替代）或鸡蛋清。第6页/共23页4、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/m
5、LNaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液）、苏丹或苏丹染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液B液：质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。第7页/共23页5、方法步骤：方法步骤：（）可溶性可溶性还原糖糖的鉴定糖的鉴定（水浴加（水浴加热）热）操操作作方方法法注注意意问问题题解解释释1.制备组织样液。制备组织样液。（去皮去皮、切块、研磨、过滤）、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时苹果或梨组织液必须临时制备制备因苹果多酚氧化酶含量高，因苹果多酚氧化酶含量高，组组织液很易被氧化成褐色，将产织液很易被氧化
6、成褐色，将产生的颜色掩盖。生的颜色掩盖。2.取取1支试管，向试管内注支试管，向试管内注入入2mL组织样液。组织样液。3.向试管内注入向试管内注入1mL新制新制的斐林试剂，振荡。的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的应将组成斐林试剂的甲液、甲液、乙液分别配制，使用前才乙液分别配制，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；林试剂；切勿将甲液、乙液分别加切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检入苹果组织样液中进行检测。测。斐林试剂很不稳定，斐林试剂很不稳定，甲乙液分甲乙液分别加入时可能与组织样液发生别加入时可能与组织样液发生反应无反应无Cu(OH)2生成。生成。甲乙液甲乙液 等
7、量混合，现配先用，等量混合，现配先用，切不可分开滴加，或者久置后切不可分开滴加，或者久置后才用。才用。4.试管放在盛有试管放在盛有50-65温温水的大烧杯中，加热约水的大烧杯中，加热约2分分钟，观察到溶液颜色：浅蓝钟，观察到溶液颜色：浅蓝色色棕色棕色砖红色（沉淀）砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实杯底部，试管口不朝向实验者。验者。防止试管内的溶液冲出试管，防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；造成烫伤；甲、乙液混合保存甲、乙液混合保存时生成时生成Cu(OH)2在在7090下分解成黑色下分解成黑色CuO和水；
8、和水；第8页/共23页.实验步骤实验步骤（1 1）制备组织样液（教师制备）制备组织样液（教师制备）（2 2）鉴定样液）鉴定样液先在试管中加入2mL组织样液第9页/共23页再加入2mL刚配制的斐林试剂水浴煮沸2分钟注意观察整注意观察整个实验过程个实验过程中，溶液颜中，溶液颜色的变化！色的变化！第10页/共23页第11页/共23页操操 作作 方方 法法注注 意意 问问 题题解解 释释花生种子浸泡、去皮、切下一些花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。中的水。干种子要浸泡干种子要浸泡3434小小时，新
9、花生的浸时，新花生的浸泡时间可缩短。泡时间可缩短。因为因为浸泡时间短，不易切片浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形切下的薄片不易成形。切。切片要尽可能薄些，便于观片要尽可能薄些，便于观察。察。在子叶薄片上滴在子叶薄片上滴2323滴苏丹滴苏丹或苏或苏丹丹染液，染色染液，染色1 1分钟。分钟。染色时间不宜过长。染色时间不宜过长。苏丹苏丹中含有酒精，染色时中含有酒精，染色时间久了，把脂肪全部溶解间久了，把脂肪全部溶解了，观察不到脂肪粒了，观察不到脂肪粒用吸水纸吸去薄片周围染液，用用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%50%酒精洗去浮色，再用吸水酒精洗去
10、浮色，再用吸水纸吸去酒精。纸吸去酒精。酒精用于洗去浮色，酒精用于洗去浮色，不洗去不洗去浮色，会影响对橘黄色脂浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察肪滴的观察。同时，。同时，酒精酒精是脂溶性溶剂，是脂溶性溶剂，可将花生可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上上1212滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。产生气泡。低倍镜低倍镜下找到花生子叶薄片的最下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。黄色或红色圆形小
11、颗粒。装片不宜久放装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙时间一长，油滴会溶解在乙醇中醇中。（）脂肪的鉴定）脂肪的鉴定（需要显微镜）第12页/共23页实验步骤实验步骤（1 1）切片制作）切片制作去掉花生种皮用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（为什么？）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。）如此连续动作，切下一些薄片。第13页/共23页（2 2）染色）染色 用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央滴苏丹溶液2-32-3滴于花生子叶薄片上2-2-1min1
12、min后，吸去染液滴50%50%的酒精洗去浮色吸去多余酒精再滴1-21-2滴蒸馏水盖上盖玻片，制成临时装片。（3 3）镜检鉴定）镜检鉴定 在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（最好只有最好只有1-21-21-21-2层细胞层细胞），移至视野的中心换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来。第14页/共23页脂肪检测实验的实验结果脂肪检测实验的实验结果脂肪检测实验的实验结果脂肪检测实验的实验结果第15页/共23页若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透
13、明的油迹,说明子叶含有脂肪。第16页/共23页（）蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 操操 作作 方方 法法注注 意意 问问 题题解解 释释制备组织样液。制备组织样液。（浸泡、去皮研磨、过（浸泡、去皮研磨、过滤。）滤。）黄豆浸泡黄豆浸泡1 1至至2 2天，容易研磨成天，容易研磨成浆浆，也可购新鲜豆浆以节约，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。实验时间。鉴定。加样液约鉴定。加样液约2ml2ml于试管于试管中，加入双缩脲试剂中，加入双缩脲试剂A A，摇匀；再加入双缩脲试摇匀；再加入双缩脲试剂剂B B液液3434滴，摇匀，溶滴，摇匀，溶液变紫色。液变紫色。A A液和液和B B液也要分开配液也要分开配制，储存。鉴定时
14、先制，储存。鉴定时先加加A A液后加液后加B B液。液。CuSO4CuSO4溶液不能多加。溶液不能多加。先加先加NaOHNaOH溶液溶液，为，为Cu2+Cu2+与蛋与蛋白质反应白质反应提供一个碱性的环提供一个碱性的环境境。A A、B B液混装或同时加入，液混装或同时加入，会导致会导致Cu2+Cu2+变成变成Cu(OH)Cu(OH)2 2沉淀，而失效。沉淀，而失效。否则否则CuSO4CuSO4的蓝色会遮盖反应的蓝色会遮盖反应的真实颜色。的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。蛋清要先稀释。如果如果稀释不够，在实验中蛋清稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁粘在试管壁，与双缩脲试剂
15、与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净管也不易洗干净。附：淀粉的检测和观察附：淀粉的检测和观察用试管取用试管取2ml2ml待测组织样待测组织样液，向试管内滴加液，向试管内滴加2 2滴碘滴碘液，观察颜色变化。液，观察颜色变化。碘液不要滴太多碘液不要滴太多以免影响颜色观察以免影响颜色观察第17页/共23页实验步骤：实验步骤：（1 1）制备生物组织样液（教师制备）制备生物组织样液（教师制备）（2 2）鉴定）鉴定先加2mL组织样液再加2mL双缩脲试剂A液加3-4滴双缩脲试剂B液第18页/共23页蛋白质检测实验的实验
16、结果蛋白质检测实验的实验结果第19页/共23页6、讨论:(1)选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗?为什么?答:不行.橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果;而甘蔗不含还原糖,蔗糖不是还原糖.(2)斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？a溶液浓度不同:斐林试剂中CuSO4溶液溶液为0.05g/mL,双缩脲试剂中CuSO4溶液溶液为0.01g/mLb使用原理不同:斐林试剂实质是新制Cu(OH)2沉淀,双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2+c使用方法不同:斐林试剂使用时,先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液溶液混合,然后立即使用;双缩脲试剂是先加NaOH溶液溶液,然后再加入3至4滴CuSO4溶液溶液第20页/共23页7、练习与巩固(1)检查尿液中有无葡萄糖,下列试剂中可选用的是()A.斐林试剂B.碘液C.双缩脲试剂D.二苯胺(2)下列生物材料中，可用于还原糖鉴定的是()A.柑橘B.苹果C.新鲜肝脏D.甘蔗AB第21页/共23页第22页/共23页感谢您的观看！第23页/共23页