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1、YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 一、色谱法简介一、色谱法简介色谱法也叫色谱法也叫层析法层析法，它是一种，它是一种高效能的物理高效能的物理分离技术分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为手段，就成为色谱分析法色谱分析法。色谱法的最早应用是在色谱法的最早应用是在1906年俄国植物学家年俄国植物学家茨维特茨维特(Tswett)用于分离植物色素时采用，其方法用于分离植物色素时采用，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提
2、取液）的石油醚倒入管中。物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。第一节第一节概概述述YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 一、色谱法简介一、色谱法简介色谱法也叫色谱法也叫层析法层析法，它是一种，它是一种高效能的物理高效能的物理分离技术分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为手段，就成为色谱分析法色谱分析法。色谱法的最早应用是在色谱法的最早应用是在1906年俄国植物学家年俄国植物学家茨维
3、特茨维特(Tswett)用于分离植物色素时采用，其方法用于分离植物色素时采用，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。第一节第一节概概述述YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 色谱起源色谱起源加入石油醚分层胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素A、BChromatography 原理:基于物质在不同相之间具有不同的分配系数引起的分离YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪
4、器分析现代仪器分析现代仪器分析 此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得的色素，并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得名。名。现现在在的的色色谱谱法法早早已已不不局局限限于于色色素素的的分分离离，其其方方法法也也早早已已得得到到了了极极大大的的发发展展，但但其其分分离离的的
5、原原理理仍然是一样的。我们仍然叫它仍然是一样的。我们仍然叫它色谱法色谱法。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 在色谱法中，将填入玻在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为的一相（固体或液体）称为固定相固定相；自上而下运动的一相自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为（一般是气体或液体）称为流动相流动相；装有固定相的管子（玻装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为璃管或不锈钢管）称为色谱色谱柱柱。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分
6、析现代仪器分析 当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用；固定相发生作用；由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异；相互作用的类型、强弱也有差异；因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同；从而按先后不同的次序从固相滞留时间长短不同；从而按先后不同的次序从固定相中流出。定相中流出。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 色谱法发展的历史色谱法发展的历史：190
7、6年俄国植物学家Tswett命名自己发明的分离植物色素的新方法为色谱法。因为他并不是一个著名的学者，因此他发表出来的文章并没有得到重视。1931年，德国的Kuhn和Lederer重复了Tswett的实验，得到很好的结果，色谱法因此得到很大的推广。1940年，Martin和Synge提出了液液分配色谱法，又把塔板的概念引入色谱法中，初步建立了塔板理论。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 1941年，Martin和Synge提出了用气体代替流体做流动相的可能性，在他们发展了完整的气液色谱法之后，获得了1952年的诺贝尔化学奖。1957
8、年，Golay开展了开管柱气相色谱。1963年，Giddings把高压泵和键合相固定相结合，出现了高效液相色谱。随后，出现了色谱法和其他检测技术的联用，例如GC-MS、GC-IR等。上个世纪八十年代，毛细管电泳出现，此后得到长足的发展，并不断出现新的模式，一直成为研究的热点。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 二、色谱法的分类二、色谱法的分类色谱分析法有很多种类，从不同的角度色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。出发可以有不同的分类方法。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分
9、析现代仪器分析现代仪器分析 （一）从两相的物理状态分类：（一）从两相的物理状态分类：色色谱谱法法中中，流流动动相相可可以以是是气气体体，也也可可以以是是液液体体，由由此此可可分分为为气气相相色色谱谱法法（GC）和和液液相相色色谱谱法法（LC）。固固定定相相既既可可以以是是固固体体，也也可可以以是是涂涂在在固固体体上上的的液液体体，由由此此又又可可将将气气相相色色谱谱法法和和液液相相色色谱谱法法分分为为气气-液液色色谱谱、气气-固固色色谱谱、液液-固固色色谱谱、液液-液液色色谱谱。流流动动相相还可以是还可以是超临界流体超临界流体。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代
10、仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 物质通常有三种物质通常有三种状态：气态，液状态：气态，液态和固态。态和固态。除了这三种常见除了这三种常见的状态外物质还的状态外物质还有另外的一些状有另外的一些状态，如等离子状态，如等离子状态、超临界状态态、超临界状态等。等。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 物质处于临界温度（Tc）和临界压力（Pc）以上状态时，向该状态气体加压，气体不会液化，只是密度增大，具有类似液态性质，同时还保留气体性能，这种状态的流体称为超临界流体（Supercritical Fluid,简称SCF）。高于临界温度和临界压
11、力的状态称为超临界状态。处于超临界状态时，气液两相界面消失，性质非常接近，以至于无法分辨，故称之为超临界流体。这种流体(SCF)兼有气液两重性的特点，它既有与气体相当的高渗透能力和低的粘度，又兼有与液体相近的密度和对许多物质优良的溶解能力。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 色色谱谱法法液相色谱法液相色谱法气相色谱法气相色谱法气气-液色谱法液色谱法气气-固色谱法固色谱法液液-固色谱法固色谱法液液-液色谱法液色谱法超临界流体色谱法超临界流体色谱法分类情况如下分类情况如下：YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析
12、现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 （二）按固定相的形式分类：（二）按固定相的形式分类：按固定相的状态可分为柱色谱和平板色谱：按固定相的状态可分为柱色谱和平板色谱：柱色谱柱色谱：固定相装在色谱柱中；：固定相装在色谱柱中；平板色谱平板色谱：固定相呈平板状的色谱，它又可分：固定相呈平板状的色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。为薄层色谱和纸色谱。薄层色谱：将固体吸附剂在玻璃薄层色谱：将固体吸附剂在玻璃板或塑料板或塑料板上制成薄层作固定相；板上制成薄层作固定相；纸色谱：利用滤纸作载体，吸附在纸上的纸色谱：利用滤纸作载体，吸附在纸上的水作固定相。水作固定相。YANGTZE NORMAL UNIVERSI
13、TY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 （三）按分离原理分类：（三）按分离原理分类：可分为：可分为：吸附色谱法吸附色谱法：利用吸附剂（固定相：利用吸附剂（固定相一般是固一般是固体）表面对不同组分吸附能力的差别进行分体）表面对不同组分吸附能力的差别进行分离的方法；离的方法；分配色谱法分配色谱法：利用不同组分在两相间的分配：利用不同组分在两相间的分配系数的差别进行分离的方法。系数的差别进行分离的方法。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 离子交换色谱离子交换色谱：利用溶液中不同离子与离子：利用溶液中不同离子与离子交换剂间的
14、交换能力的不同而进行分离的方交换剂间的交换能力的不同而进行分离的方法。法。空间排斥（阻）色谱法空间排斥（阻）色谱法：利用多孔性物质对：利用多孔性物质对不同大小的分子的排阻作用进行分离的方法。不同大小的分子的排阻作用进行分离的方法。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 空间排斥（阻）色谱空间排斥（阻）色谱Size Exclusion ChromatographyM.W.tRYANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 空间排斥（阻）色谱空间排斥（阻）色谱Size Exclusion
15、 ChromatographyM.W.tRYANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 空间排斥（阻）色谱空间排斥（阻）色谱Size Exclusion ChromatographyM.W.tRYANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 空间排斥（阻）色谱空间排斥（阻）色谱Size Exclusion ChromatographyM.W.tRYANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 空间排斥（阻）色谱空间排斥（阻）色谱Size
16、Exclusion ChromatographyM.W.tRYANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 三、气相色谱分离过程及有关术语三、气相色谱分离过程及有关术语（一）气相色谱分离过程（一）气相色谱分离过程（二）气相色谱的常用术语（二）气相色谱的常用术语YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 （一）气相色谱分离过程（一）气相色谱分离过程YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 YANGTZE NORMAL UNIVERS
17、ITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 试样中各组分经色谱柱分离后，随气试样中各组分经色谱柱分离后，随气体依次流入检测器，检测器将各组分浓度体依次流入检测器，检测器将各组分浓度变化转换成电信号，在记录仪上记录为检变化转换成电信号，在记录仪上记录为检测器响应随时间变化的微分曲线，即色谱测器响应随时间变化的微分曲线，即色谱流出曲线，也称流出曲线，也称色谱图色谱图（见图（见图2-3）。）。（二）气相色谱的常用术语（二）气相色谱的常用术语YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 色谱图色谱图：若干物质的流出曲线，即在不同时间上的
18、：若干物质的流出曲线，即在不同时间上的浓度或者响应的大小。浓度或者响应的大小。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 1、基线、基线（Base-line）无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 2、色谱峰（、色谱峰（Peak of Chromatogram）曲线上突起部分就是色谱峰。曲线上突起部分就是色谱峰。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析
19、现代仪器分析 色谱峰的对称性色谱峰的对称性高斯（高斯（GaussianGaussian）曲线）曲线不对称因子（不对称因子（asymmetryasymmetry）拖尾峰（拖尾峰（tailing peaktailing peak）伸舌峰（伸舌峰（leading peakleading peak或或fronting peakfronting peak）高斯曲线：高斯曲线：在理想情况下在理想情况下(进样量很小，进样量很小，浓度很低，在吸附或分配等温线的线性范围浓度很低，在吸附或分配等温线的线性范围内内)，色谱峰的形状可以近似地用高斯曲线描，色谱峰的形状可以近似地用高斯曲线描述。图中述。图中 为标准偏差
20、（拐点处的半峰宽），为标准偏差（拐点处的半峰宽），h h为最大峰高，为最大峰高，w wb b为峰宽。为峰宽。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 不对称因子：不对称因子：在实际的色谱过程中，溶在实际的色谱过程中，溶质从色谱柱中流出时，很少符合高斯分布，质从色谱柱中流出时，很少符合高斯分布，而是具有一定的不对称性。而是具有一定的不对称性。我们可以定义一个不对称因子我们可以定义一个不对称因子AsAs来定量来定量地表示色谱峰的不对称程度，将地表示色谱峰的不对称程度，将1010峰高处峰高处前半峰的宽度设为前半峰的宽度设为a,a,同高度处后半
21、峰的宽度同高度处后半峰的宽度设为设为b b，将，将b b与与a a的比值定义为不对称因子的比值定义为不对称因子AsAs，即即YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 拖尾峰：拖尾峰：当当AsAs大于大于1 1时，色谱峰的形状是前半时，色谱峰的形状是前半部分信号增加快，后半部分信号减少慢。引起部分信号增加快，后半部分信号减少慢。引起峰拖尾的主要原因是溶质在固定相中存在吸附峰拖尾的主要原因是溶质在固定相中存在吸附作用，因此，拖尾峰也称为吸附峰。作用，因此，拖尾峰也称为吸附峰。伸舌峰：伸舌峰：当当AsAs小于小于1 1时，色谱峰是前半部分信号
22、时，色谱峰是前半部分信号增加慢，后半部分信号减小快。因为伸舌峰主增加慢，后半部分信号减小快。因为伸舌峰主要是固定相不能给溶质提供足够数量合适的作要是固定相不能给溶质提供足够数量合适的作用位置，使一部分溶质超过了峰的中心，即产用位置，使一部分溶质超过了峰的中心，即产生了超载，所以也称超载峰。生了超载，所以也称超载峰。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 3、色谱峰高（、色谱峰高（the Height of Peak of Chromatogram）色谱峰顶点与基线之间的垂直距离色谱峰顶点与基线之间的垂直距离hYANGTZE NORMA
23、L UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 4 4、色谱峰区域宽度、色谱峰区域宽度 （Regional width of Regional width of Peak of Peak of ChromatogramChromatogram）色谱峰的区域宽度是色谱流出曲线的重色谱峰的区域宽度是色谱流出曲线的重要参数之一。要参数之一。用于衡量柱效率及反映色谱操作条件的用于衡量柱效率及反映色谱操作条件的动力学因素，其宽度越窄越好动力学因素，其宽度越窄越好。表示色谱峰区域宽度通常有表示色谱峰区域宽度通常有三种方法三种方法。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY
24、现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 .标准偏差标准偏差（它是（它是0.607倍峰高处色谱峰宽的一半）倍峰高处色谱峰宽的一半）.半高峰宽半高峰宽Y（Y=2.354）.色谱峰底宽（色谱峰底宽（色谱峰两侧拐点上的切线在基线上色谱峰两侧拐点上的切线在基线上截距间的距离）截距间的距离）Wb（Wb=4 ）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 5、保留值（、保留值（Retation Value）是试样各组分在色）是试样各组分在色谱柱中保留行为的量度，它反映了组分与固定谱柱中保留行为的量度，它反映了组分与固定相间作用力大小，通常用保留
25、时间和保留体积相间作用力大小，通常用保留时间和保留体积表示。表示。（1）保留时间（）保留时间（Retation Time）tR指某组分通指某组分通过色谱柱所需要的时间，即从进样到出现某组过色谱柱所需要的时间，即从进样到出现某组分色谱峰最大值的时间，单位为分色谱峰最大值的时间，单位为min或或s。在一。在一定的色谱体系和操作条件下，任何一种化合物定的色谱体系和操作条件下，任何一种化合物都有一定的保留时间，这是色谱定性分析的依都有一定的保留时间，这是色谱定性分析的依据。据。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 （2）死时间（）死时间（D
26、ead Time）tM 不被固定相吸不被固定相吸附或溶解的气体（如空气、甲烷）从进样到附或溶解的气体（如空气、甲烷）从进样到出现其色谱峰最大值所需要的时间，也是气出现其色谱峰最大值所需要的时间，也是气体流经色谱柱中空隙所需要的时间。体流经色谱柱中空隙所需要的时间。（3）调整保留时间（）调整保留时间（Adjust Retation Time）tR扣除死时间之后的保留时间：扣除死时间之后的保留时间：tR=tRtM，它反映了组分在色谱过程中，与固定相它反映了组分在色谱过程中，与固定相相互作用所消耗的时间，是各组分产生差速相互作用所消耗的时间，是各组分产生差速迁移的物理化学基础。迁移的物理化学基础。Y
27、ANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 保留时间是色谱法定性的基本依据，保留时间是色谱法定性的基本依据，但但同一组分的保留时间常受到流动相流速的影同一组分的保留时间常受到流动相流速的影响。响。因此色谱工作者有时也用保留体积来表因此色谱工作者有时也用保留体积来表示保留值。示保留值。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 （4）保留体积）保留体积VR（Retation Volume）是）是指从进样到出现某组分色谱峰最大值时所指从进样到出现某组分色谱峰最大值时所通过的载气体积。通过的
28、载气体积。VR=tRF0F0为色谱柱出口的载气流量（为色谱柱出口的载气流量（mL min-1）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 （5）死体积）死体积VM（Dead Volume）指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和。当后两项很小可忽略及检测器的空间的总和。当后两项很小可忽略不计时，不计时，死体积可由死时间与色谱柱出口的载死体积可由死时间与色谱柱出口的载气流速气流速F0 （mL min-1
29、 ）计算）计算。等于在等于在tM这段这段时间内通过色谱柱的载气体积。时间内通过色谱柱的载气体积。VM=tMF0（仅适用于气相色谱仅适用于气相色谱，不适用于液相色谱，不适用于液相色谱。）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 （6）调整保留体积）调整保留体积VR（AdjustRetation Volume）指扣除死体积后的保留体积。）指扣除死体积后的保留体积。VR=VR -VM（7）相对保留值（）相对保留值（Relative Retation value）指在相同的操作条件下某组分指在相同的操作条件下某组分2的调整保留的调整保留值与另一
30、种组分值与另一种组分1的调整保留值之比。的调整保留值之比。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 相对保留值仅与相对保留值仅与柱温和固定相性质柱温和固定相性质有关，有关，而与柱径、柱长、载气流量等其它实验条件无而与柱径、柱长、载气流量等其它实验条件无关，因此，它是关，因此，它是色谱定性分析的重要参数之一色谱定性分析的重要参数之一。相对保留值还可以用来表示色谱柱的选择相对保留值还可以用来表示色谱柱的选择性。性。r2,1值越大，两组分的值越大，两组分的tR 值相差越大，越值相差越大，越容易实现分离，当容易实现分离，当r2,1=1时，两组分
31、色谱峰重时，两组分色谱峰重叠。叠。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（为标准（s s），然后再求其它峰（），然后再求其它峰（i i）对这个）对这个峰的相对保留值。此时可用符号峰的相对保留值。此时可用符号 表示，即表示，即 =t=tR R (i)(i)/t/tR R (s)(s)式中式中t tR R (i)(i)为后出峰的调整保留时间，所以为后出峰的调整保留时间，所以 总是大于总是大于1 1的。的。相对保留值相对保留值往往可作为衡量固定相选择往往可作为衡量固
32、定相选择性的指标，又称性的指标，又称选择因子选择因子。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 从色谱流出曲线可以获得许多重要信息：从色谱流出曲线可以获得许多重要信息：1.根据色谱峰的数目，可以判断试样中所根据色谱峰的数目，可以判断试样中所含有组分的最少个数。含有组分的最少个数。2.根据色谱峰的保留值可以进行定性分析。根据色谱峰的保留值可以进行定性分析。3.根据色谱峰高或面积可以进行定量测定。根据色谱峰高或面积可以进行定量测定。4.根据色谱峰间距及其区域宽度，可对色谱柱根据色谱峰间距及其区域宽度，可对色谱柱的分离效能进行评价。的分离效能
33、进行评价。5.色谱峰间距色谱峰间距固定相或流动相选择是否合固定相或流动相选择是否合适的依据。适的依据。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 问题问题1：不同组分在色谱柱中为什么呈现不同：不同组分在色谱柱中为什么呈现不同的运行速度？的运行速度？第二节第二节气相色谱理论基础气相色谱理论基础YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 因为固定相对不同组分有不同的吸附力，因为固定相对不同组分有不同的吸附力，吸附力强的组分难以被流动相冲洗出色谱柱，吸附力强的组分难以被流动相冲洗出色谱柱，
34、故运行速度慢，运行时间长。反之，吸附力弱故运行速度慢，运行时间长。反之，吸附力弱的组分则容易被流动相冲洗出色谱柱，故运行的组分则容易被流动相冲洗出色谱柱，故运行速度快，运行时间短。速度快，运行时间短。吸附吸附脱附脱附YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 同样的道理，若固定相呈液体状态，则不同样的道理，若固定相呈液体状态，则不同组分呈现不同运行速度则是因为固定液对不同组分呈现不同运行速度则是因为固定液对不同组分有不同的溶解能力，溶解性强的组分难同组分有不同的溶解能力，溶解性强的组分难以挥发至流动相中，故其在色谱柱中运行速度以挥发至流动
35、相中，故其在色谱柱中运行速度慢，运行时间长。反之，溶解性弱的组分则容慢，运行时间长。反之，溶解性弱的组分则容易挥发至流动相中，故其在色谱柱中运行速度易挥发至流动相中，故其在色谱柱中运行速度快，运行时间短。快，运行时间短。溶解溶解挥发挥发YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 问题问题2：吸附与脱附是怎么回事？：吸附与脱附是怎么回事？YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 吸附作用是指各种气体、蒸气以及溶液吸附作用是指各种气体、蒸气以及溶液里的溶质被吸着在固体或液体物质表面上的
36、里的溶质被吸着在固体或液体物质表面上的作用。具有吸附性的物质叫做吸附剂，被吸作用。具有吸附性的物质叫做吸附剂，被吸附的物质叫吸附质。吸附作用可分为物理吸附的物质叫吸附质。吸附作用可分为物理吸附和化学吸附。附和化学吸附。脱附作用正好与吸附作用相反，是指吸脱附作用正好与吸附作用相反，是指吸着在固体或液体物质表面上的物质在一定的着在固体或液体物质表面上的物质在一定的作用下离开原表面的过程。作用下离开原表面的过程。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 问题问题3：什么是溶解过程与挥发过程？：什么是溶解过程与挥发过程？YANGTZE NORM
37、AL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 溶解过程是指气态或液态组分进入固定液的溶解过程是指气态或液态组分进入固定液的过程，而挥发过程则是指组分离开固定液过程，而挥发过程则是指组分离开固定液回到气态或液态流动相的过程。回到气态或液态流动相的过程。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 色谱分离原理及实例：色谱分离原理及实例：色谱柱内紧密均匀地涂着在惰性载体上的色谱柱内紧密均匀地涂着在惰性载体上的液体固定相，流动相则连续不断流经其间，两液体固定相，流动相则连续不断流经其间，两相充分接触，但不相溶解。相充
38、分接触，但不相溶解。将混合样品一次注入色谱柱后，刚进柱将混合样品一次注入色谱柱后，刚进柱时，组分时，组分A和和B是一条混合带。是一条混合带。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 由于样品分子与两相分子间的相互作由于样品分子与两相分子间的相互作用，它们既可以进入固定相，又可以返回流用，它们既可以进入固定相，又可以返回流动相，这个过程就叫分配。动相，这个过程就叫分配。当样品进入流动相时，它就随流动相一当样品进入流动相时，它就随流动相一起沿柱床向前移动，当它们进入固定相时，起沿柱床向前移动，当它们进入固定相时，被滞留而不再向前移动。被滞留
39、而不再向前移动。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 与固定相作用越大的组分，越容易进入与固定相作用越大的组分，越容易进入固定相，向前移动的速度就愈慢；与流动相固定相，向前移动的速度就愈慢；与流动相作用力越大的组分，就越容易进入流动相，作用力越大的组分，就越容易进入流动相，向前移动的速度愈快。这样经过一定的柱长向前移动的速度愈快。这样经过一定的柱长后，由于反复多次（后，由于反复多次（103106次）的分配，即次）的分配，即使原来性质（如沸点、溶解度、分子结构及使原来性质（如沸点、溶解度、分子结构及极性等）差异微小的组分，也能达到很好
40、的极性等）差异微小的组分，也能达到很好的分离。分离。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 结果，与流动相作用力大的组分先从色结果，与流动相作用力大的组分先从色谱柱中流出来，与固定相作用力大的组分谱柱中流出来，与固定相作用力大的组分则后流出，从而使得样品内各个组分得到则后流出，从而使得样品内各个组分得到分离。分离。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 ABCD载气3种组分同时进入色种组分同时进入色谱柱谱柱3种组分开始在色谱种组分开始在色谱柱中分离柱中分离3种组分在色谱柱中种
41、组分在色谱柱中基本达到分离基本达到分离3种组分在色谱柱中种组分在色谱柱中完全达到分离完全达到分离YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 结论：色谱分离是基于样品中各组分在两相结论：色谱分离是基于样品中各组分在两相间间平衡分配平衡分配的差异。可用的差异。可用分配系数分配系数或或分配比分配比来表征。来表征。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 问题问题4:何谓分配系数？分配比？它在色谱分何谓分配系数？分配比？它在色谱分离过程中有什么作用？离过程中有什么作用？YANGTZE NO
42、RMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 1 1、分配系数、分配系数 K K 在一定的温度、压力下，组在一定的温度、压力下，组分在分在液相（固定相）液相（固定相）和和气相（流动相）气相（流动相）之间分之间分配达到平衡时的配达到平衡时的浓度比浓度比称为分配系数称为分配系数K K，即：，即：(物质在固定相和流动相之间发生的吸附、脱物质在固定相和流动相之间发生的吸附、脱附和溶解、挥发的过程叫附和溶解、挥发的过程叫分配过程分配过程。)（2-8）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 2、分配比分配比k在一
43、定的温度、压力下，组分在在一定的温度、压力下，组分在两相之间分配达到平衡时的两相之间分配达到平衡时的质量比质量比称为分配比称为分配比k，即：，即：它是衡量色谱柱对被组分保留能力的重要参数。它是衡量色谱柱对被组分保留能力的重要参数。k k值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称于柱的容量大，因此又称分配容量分配容量或或容量因子容量因子。（2-9）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 式中式中:V VM M为柱中流动相的体积，近似等于死体为柱中流动相的体积，近似等于死体积。积
44、。VsVs为柱中固定相的体积为柱中固定相的体积，在各种不同的在各种不同的类型的色谱中有不同的含义。类型的色谱中有不同的含义。例如，例如，在分配色谱中，在分配色谱中，VsVs表示固定液的体积；表示固定液的体积；在吸附色谱中，在吸附色谱中，VsVs表示吸附剂的表面容量；表示吸附剂的表面容量；在排阻色谱中，则表示固定相的孔体积。在排阻色谱中，则表示固定相的孔体积。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 3.3.分配系数分配系数K K与与分配比分配比k k的的关系关系由由2-9式：式：即即其中其中称为相比称为相比，它是反映各种色谱柱柱型特点的
45、，它是反映各种色谱柱柱型特点的又一个参数。又一个参数。分配系数和分配比都与分配系数和分配比都与组分及固定液组分及固定液的的热力学性质热力学性质有关，并随有关，并随柱温、柱压柱温、柱压的变化而的变化而变化。分配系数与两相体积无关，而分配比变化。分配系数与两相体积无关，而分配比随随固定液的量固定液的量的改变而改变。的改变而改变。（2-10）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 4.4.滞留因子滞留因子RsRs分配比分配比k k值可直接从色谱图测得：值可直接从色谱图测得：设流动相在柱内的线速度为设流动相在柱内的线速度为u u（=L/t=L
46、/tM M)，组，组分在柱内线速度为分在柱内线速度为u us s(=L/t(=L/tR R)，由于固定相对组，由于固定相对组分有保留作用，所以分有保留作用，所以u us su u，此两速度之比称为，此两速度之比称为滞留因子滞留因子RsRs。（2-11）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 RsRs若用质量分数表示，则有若用质量分数表示，则有结合两式有：结合两式有：（2-12）YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 经整理可得经整理可得（2-15）（2-16）可见，某组分的可
47、见，某组分的k k可直接从色谱图中测得：可直接从色谱图中测得：它等于该组分的它等于该组分的调整保留时间调整保留时间与与死时间死时间的比值。的比值。上式表明，上式表明，某组分的保留时间越长则某组分的保留时间越长则k k值越大，值越大，色谱柱对该组分的保留能力就越强色谱柱对该组分的保留能力就越强。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 5.5.分配系数分配系数 K K 及分配比及分配比 k k 与选择因子与选择因子的的关系关系 对对1 1、2 2两组分的选择因子，用下式表示：两组分的选择因子，用下式表示：=t t R R (2)(2)/t
48、 t R R (1)(1)=k k（2)2)/k k（1)1)=K K（2)2)/K K（1)1)对固定相的选择具有实际意义。对固定相的选择具有实际意义。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 如果两组分的如果两组分的K K或或k k值相等，则值相等，则=1=1，两，两个组分的色谱峰必将重合，说明分不开。个组分的色谱峰必将重合，说明分不开。两组分的两组分的K K或或k k值相差越大，则分离得越好值相差越大，则分离得越好。因此两组分具有不同的分配系数是色谱分离因此两组分具有不同的分配系数是色谱分离的先决条件。的先决条件。色谱分析的色谱分
49、析的目的目的是将样品中是将样品中各组分彼此各组分彼此分离分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远。必须足够远。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。因此，因此，要从热力学和动力学两方面来研
50、究色谱要从热力学和动力学两方面来研究色谱行为。行为。YANGTZE NORMAL UNIVERSITY现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析现代仪器分析 下图是下图是 A A、B B两组分沿色谱柱移动时，两组分沿色谱柱移动时，不同位置处的浓度轮廓。不同位置处的浓度轮廓。浓浓度度沿柱移动距离沿柱移动距离LABABKAKB图中图中K KA AKKB B ，因此，因此，A A组分在移动过程中滞后。组分在移动过程中滞后。随着两组分在色谱柱中移动距离的增加，两峰间的随着两组分在色谱柱中移动距离的增加，两峰间的距离逐渐变大，同时，每一组分的距离逐渐变大，同时，每一组分的浓度轮廓浓度轮廓（即区（即区域宽度）也