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1、质谱技术在临床微生物质谱技术在临床微生物检验中的应用检验中的应用（一）、现代感染性疾病和（一）、现代感染性疾病和 临床微生物检测现状临床微生物检测现状耐耐药菌株菌株增多增多疑疑难菌株菌株增多增多现代感代感染性疾染性疾病新特病新特点点条件致条件致病菌增病菌增多多人人员少、少、鉴定定速度速度较慢慢感染感染菌种菌种类增增多多临床微生物当前现状病原病原生长时间生长时间报告时间报告时间需氧菌需氧菌24h2-3个工作日个工作日厌氧菌厌氧菌48h酵母菌酵母菌2-5天天2-5个工作日个工作日丝状真菌丝状真菌2-5天天常规微生物检验遇到的困惑：呼吸道、肠道标本的细菌种类繁多，常规的鉴定成本高或者操作麻烦，容易漏
2、掉或者忽视某些细菌。厌氧菌、弯曲菌、分枝杆菌和真菌：细菌鉴定的死角，技术上不好掌握或者目前的方法难以实施。微生物的分级报告制度：存在很多变数，使得初次报告的结果可靠性得不到临床的认可。（比如：直接涂片，初步能估比如：直接涂片，初步能估计细菌大菌大类，但是，但是 无法确切的到种，和耐无法确切的到种，和耐药情况。）情况。）实验室要求：操作方便的，成本便宜的，性价比高的，临床迫切需要的。临床微生物实验室自动化 将实验室人员从一些技术要求较低的、能由仪器完成的工作中解脱出来，提高标本处理效率，缩短TAT时间。临床的需求安安图生物生物Autof ms1000MALDI-TOF革命性（二）（二）、基质辅助
3、激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-TOF MS MALDI-TOF MS 的组成的组成飞行时间质量飞行时间质量检测器（检测器（TOFTOF）基质辅助激光解吸基质辅助激光解吸电离离子源（电离离子源（MALDIMALDI）数据库MALDI-TOF MSMALDI-TOF MSMALDI-TOF MSMALDI-TOF MS主机（三（三）、MALDI-TOF MS MALDI-TOF MS 的原理的原理基本原理是将样品分散在基质分子中并形成晶体。基本原理是将样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质样品解吸
4、附，基质-样品之间发生电荷转移使得样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比（被检测，即通过离子的质量电荷之比（M/ZM/Z）与）与离子的飞行时间成正比来分析离子，从而测得并离子的飞行时间成正比来分析离子，从而测得并绘出样品分子的质谱图。绘出样品分子的质谱图。（四）、操作简便（四）、操作简便样品靶板细菌与基质飞行管检测器质谱图真空系统样品靶板入口几秒钟即可得到结果基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TO
5、F MS)MALDI-TOF MS蛋白质指纹特征蛋白质指纹特征MALDI TOF检测挑取部分菌落点样至靶板加基质液生成图谱搜库鉴定质谱质谱检测流程检测流程鉴定结果显示绿色并且分数最高的为该样品的鉴定结果。与现有传统的鉴定诊断技术相比，具有操作简单、快速、通量高、灵敏度高、准确度好、试剂耗品非常经济等优势。准确度准确度时间成本成本MALDI-TOF90%5 min2元常规方法80%548 h50元对临床的意义：分级报告，缩短了TAT时间，尤其是厌氧菌、奴卡菌等非常难鉴定的菌提供巨大的帮助。五、实现血培养的三级报告五、实现血培养的三级报告微生物诊断技术不断发展给临床带来了什么？1、非培养/难培养微
6、生物的检测能力大大提高2、缩短了常规微生物培养鉴定诊断药敏时间(即TAT时间)3、从微生物检验角度提供精准的诊断六、安图微生物质谱Autof ms1000的优势1 1、本土、本土产品品维护保养保养方便及方便及时试剂、耗、耗材供材供应及及时价格便宜价格便宜数据库主要包含：数据库主要包含：474474个属、个属、26132613多种、多种、95319531株（包含株（包含细菌、真菌等）细菌、真菌等）正在开发的数据库：生物反恐生物反恐、肠道微生物、海洋致病微生物、肉类蛋白数据库操作操作简便便中文界面，中文界面，单个个软件件即可完成即可完成编辑、采集、采集、鉴定；快速定；快速鉴定功能定功能方便使用。方
7、便使用。准准确度高，重复性确度高，重复性好好上海临检中心评估项目总结：01 ATCC标准菌株鉴定准确性安图质谱检测微生物的结果与172株ATCC国际标准菌株的一致性为97.67%，高于布鲁克的93.60%。02 临床菌株鉴定准确性安图质谱Autof ms1000对176株临床菌株的鉴定准确性为100%，高于布鲁克的98.30%。04 鉴定重复性安图质谱Autof ms1000对65株实验菌株的鉴定结果全部可靠，重复性较好。03 不同前处理方法的鉴定准确性三种前处理方式安图质谱Autof ms1000的鉴定准确性均高于布鲁克质谱，其中甲酸裂解法更适于临床使用。Autof ms1000鉴定结果准确
8、、可靠，适于临床微生物检测。中国检验检疫科学研究院评估结论Autof ms1000鉴定结果准确性、重复性可靠MALDI-TOF MS对血培养阳性样本的直接检测优点：快速。缺点：操作麻烦，且抽滤容易产生气溶胶，污染环境。不易于在临床推广。鉴定的缺陷：多重菌感染不能鉴定，或者鉴定有误，链球菌等难于区分的菌是最大的问题。MRSA的鉴别和分型Edwards-Jones et al.J Med Microbiol.2000MRSA的鉴别和分型Wolters et al.IJMM.2011从图中可见，可以做同源性的比较使用体会成本低，快速，鉴定结果准确，性价比高。可以聚类分析，即同源性的研究，在耐药上有优势。可以建立库中没有的细菌的数据库，有地域性的数据库。最好选择血平板上的菌落，含指示剂的平板容易降低检出得分，鉴定准确性受影响。质谱技术的局限性1、样品必须单一、纯净2、对某些相似性高的菌种无法鉴定到种水平或出现错误3、某些菌只能鉴定到属的水平，不能鉴定到种或亚种结束语：质谱技术虽然现在仍有一定的缺陷，但在目前仍不失为微生物检验中的最先进的技术。它的广泛应用必将引发微生物检验技术的革命性突破！感感谢聆听！聆听！