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1、专题专题1:1:传统发酵技术的应用传统发酵技术的应用一、乳酸菌一、乳酸菌原核生物原核生物乳酸链球菌(球状)乳酸链球菌(球状)乳酸杆菌(杆状)乳酸杆菌(杆状)代谢类型:代谢类型:异养厌氧型异养厌氧型繁殖:繁殖:分裂生殖分裂生殖分类:分类:C6H12O6 2C3H6O3+能量能量酶酶为什么含有抗生素的牛奶不能发酵为酸奶?为什么含有抗生素的牛奶不能发酵为酸奶?牛奶发酵为酸奶主要依靠乳酸菌的发酵牛奶发酵为酸奶主要依靠乳酸菌的发酵作用,而作用,而抗生素能够杀死或抑制乳酸菌抗生素能够杀死或抑制乳酸菌。乳酸杆菌乳酸杆菌随堂练习1、乳酸菌和酵母菌相比,前者最显著的特点是、乳酸菌和酵母菌相比,前者最显著的特点是
2、()A、无各种细胞器、无各种细胞器 B、无成形的细胞核、无成形的细胞核C、无、无DNA D、不能进行无氧呼吸、不能进行无氧呼吸2、(北京高考)将鲜奶制成酸奶,其所含能量、(北京高考)将鲜奶制成酸奶,其所含能量和营养成分变化趋势是(和营养成分变化趋势是()A、能量增加营养减少、能量增加营养减少 B、能量减少营养增加、能量减少营养增加C、能量营养均减少能量营养均减少 D、能量营养均增加、能量营养均增加BB二、亚硝酸盐二、亚硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐(包括亚硝酸钾和亚包括亚硝酸钾和亚硝酸钠硝酸钠)为为白色粉末白色粉末,易溶于,易溶于水。当人体摄入的亚硝酸盐总水。当人体摄入的亚硝酸盐总量达到量达到0.30
3、.30.5g0.5g时,会引起时,会引起中毒,达中毒,达3g3g时会引起死亡。时会引起死亡。亚硝酸盐为亚硝酸盐为强氧化剂强氧化剂,能够把血液中携,能够把血液中携带氧的低铁血红蛋白转变为高铁血红蛋白,带氧的低铁血红蛋白转变为高铁血红蛋白,从而导致缺氧性中毒症状。从而导致缺氧性中毒症状。亚硝酸盐中毒事件 2011年年4月月21日日,一名一岁半的女婴在吃了张继存,一名一岁半的女婴在吃了张继存卖的炸鸡块后身亡,死因张继存在炸鸡中加多了卖的炸鸡块后身亡,死因张继存在炸鸡中加多了亚硝酸盐,致人中毒。亚硝酸盐,致人中毒。2011年年4月月7日上午,甘肃平凉市崆峒区发生一起食日上午,甘肃平凉市崆峒区发生一起食
4、物中毒事件,共造成物中毒事件,共造成37人中毒住院,其中人中毒住院,其中3名婴幼名婴幼儿已死亡,其余患者生命体征平稳。最后确认,儿已死亡,其余患者生命体征平稳。最后确认,本食物中毒事件由于散装奶被人恶意投入高含量本食物中毒事件由于散装奶被人恶意投入高含量的亚硝酸盐而导致群体中毒。的亚硝酸盐而导致群体中毒。2012年年3月月24日下午日下午2时左右,阜阳市颍州区金鹰巷时左右,阜阳市颍州区金鹰巷某快餐店发生一起因误用亚硝酸盐引起中毒。有某快餐店发生一起因误用亚硝酸盐引起中毒。有23人不同程度出现紫绀、头晕、呕吐等症状。人不同程度出现紫绀、头晕、呕吐等症状。膳食中的膳食中的绝大部分绝大部分亚硝酸盐亚
5、硝酸盐随尿排出随尿排出,只有在,只有在特定的条件下才会转变成致癌物特定的条件下才会转变成致癌物亚硝胺亚硝胺,亚硝,亚硝胺对动物还具有致畸和致突变作用(亚硝酸盐本身胺对动物还具有致畸和致突变作用(亚硝酸盐本身不是致癌物质)。不是致癌物质)。亚硝酸盐在亚硝酸盐在pH=3,温度适宜和一定微生物的,温度适宜和一定微生物的作用下转变成致癌物质亚硝胺,因此,霉变的食作用下转变成致癌物质亚硝胺,因此,霉变的食品亚硝胺可增至数十倍至数百倍。品亚硝胺可增至数十倍至数百倍。我国卫生标准规定:亚硝酸盐的残留量我国卫生标准规定:亚硝酸盐的残留量 在在肉制品肉制品中不得超过中不得超过30mg/kg,酱菜酱菜中不超过中不
6、超过20mg/kg,而而婴儿奶粉婴儿奶粉中不得超过中不得超过2mg/kg。选泡菜坛预处理新鲜蔬菜 配置盐水装坛发酵成品泡菜测定亚硝酸盐含量检查方法:坛口向上,检查方法:坛口向上,压入水中,看坛内壁有压入水中,看坛内壁有无渗水现象。无渗水现象。无裂纹、无砂眼无裂纹、无砂眼坛沿深、盖子坛沿深、盖子吻合好吻合好火火候候好好蔬菜处理蔬菜处理 将鲜菜将鲜菜修整、洗涤、阳光下晾晒修整、洗涤、阳光下晾晒,到菜表皮,到菜表皮萎焉时收下,切分成条状或片状。萎焉时收下,切分成条状或片状。配制盐水配制盐水清水与盐按4:1的比例配制好后煮沸冷却煮沸冷却。盐的作用:调味,抑制微生物生长,所以盐含量盐的作用:调味,抑制微
7、生物生长,所以盐含量过低会造成细菌污染。过低会造成细菌污染。煮沸的目的:杀菌煮沸的目的:杀菌冷却是为了不影响乳酸菌的生命活动冷却是为了不影响乳酸菌的生命活动。装坛发酵装坛发酵将将泡菜坛洗净泡菜坛洗净,并用热水洗坛内壁两次。,并用热水洗坛内壁两次。将经过处理的蔬菜将经过处理的蔬菜混合混合均匀,装入泡菜坛内,均匀,装入泡菜坛内,装至装至半坛时半坛时放入蒜瓣、生姜及其他香辛料,放入蒜瓣、生姜及其他香辛料,继续装至继续装至八成满八成满,再徐徐注入配好的盐水,再徐徐注入配好的盐水,使盐水没过使盐水没过全部菜料全部菜料,盖好坛盖。向坛盖边,盖好坛盖。向坛盖边缘的水槽中缘的水槽中注满水注满水。并注意发酵过程
8、中补充。并注意发酵过程中补充水。水。坛沿注满水是为了保证坛内乳酸菌的发酵所需的无坛沿注满水是为了保证坛内乳酸菌的发酵所需的无氧环境。氧环境。腌制条件腌制条件温度不能过高温度不能过高食盐含量不能过低食盐含量不能过低腌制时间不能过短腌制时间不能过短细菌污染大量繁殖后,细菌污染大量繁殖后,亚硝酸盐含量增加亚硝酸盐含量增加腌制过程中,亚硝酸盐含量先增多,后减腌制过程中,亚硝酸盐含量先增多,后减少。少。2001年年1月月4日日(封坛前)(封坛前)2001年年1月月8日日2001年年1月月12日日2001年年1月月15日日2001年年1月月19日日0.150.600.200.100.101号坛号坛2号坛号
9、坛0.150.200.100.050.053号坛号坛0.150.800.600.200.20泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化 泡菜发酵的阶段泡菜发酵的阶段泡菜在发酵期间,由于乳酸菌的发酵作用,发泡菜在发酵期间,由于乳酸菌的发酵作用,发酵产物乳酸不断累积,因此可以根据微生物的酵产物乳酸不断累积,因此可以根据微生物的活动情况和乳酸积累量,将泡菜发酵过程分为活动情况和乳酸积累量,将泡菜发酵过程分为三个阶段。三个阶段。蔬菜蔬菜刚入坛刚入坛时,时,蔬菜表面带入的微生蔬菜表面带入的微生物物,主要是以不抗酸的,主要是以不抗酸的大肠杆菌大肠杆菌和和酵母酵母菌菌等较为活跃,它们产
10、生较多的乳酸、等较为活跃,它们产生较多的乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等,二氧化碳以酒精、醋酸和二氧化碳等,二氧化碳以气泡从水槽内放出,逐渐使坛内形成嫌气泡从水槽内放出,逐渐使坛内形成嫌气状态。气状态。发酵前期:发酵前期:发酵中期:发酵中期:乳酸菌逐渐占据优势,其他发酵微生物受到乳酸菌逐渐占据优势,其他发酵微生物受到抑制,乳酸积累增多,这一期为完全成熟阶段,抑制,乳酸积累增多,这一期为完全成熟阶段,泡菜有酸味且清香品质最好。泡菜有酸味且清香品质最好。发酵后期:发酵后期:特点:乳酸含量过高,抑制乳酸菌活动,乳酸特点:乳酸含量过高,抑制乳酸菌活动,乳酸菌减少。此阶段泡菜酸度过高、风味不协调。菌减少。此
11、阶段泡菜酸度过高、风味不协调。1 1、为什么泡菜坛内有时会长一层白膜,这、为什么泡菜坛内有时会长一层白膜,这层白膜是怎么形成的?层白膜是怎么形成的?形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厌氧微生物,泡菜发酵液营养丰富,其是兼性厌氧微生物,泡菜发酵液营养丰富,其表面氧气含量也很丰富,适合酵母菌的繁殖。表面氧气含量也很丰富,适合酵母菌的繁殖。2 2、为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜,不、为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜,不吃存放时间过长、变质的蔬菜?吃存放时间过长、变质的蔬菜?有些蔬菜,如小白菜和萝卜等含有丰富的硝酸有些蔬菜,如小白菜和萝卜等含有丰富的硝酸盐。当
12、这些蔬菜放置过久时发生变质(发黄、腐盐。当这些蔬菜放置过久时发生变质(发黄、腐烂)或者煮熟后存放太久时,蔬菜中的硝酸盐会烂)或者煮熟后存放太久时,蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸盐,危害人体健康。被微生物还原成亚硝酸盐,危害人体健康。四、亚硝酸盐含量的测定四、亚硝酸盐含量的测定1 1、测定亚硝酸盐含量的原理、测定亚硝酸盐含量的原理 比色法比色法 在在在在盐酸酸化条件下盐酸酸化条件下盐酸酸化条件下盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与,亚硝酸盐与,亚硝酸盐与,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸发生发生发生发生重重重重氮化氮化氮化氮化反应后,再与反应后,再与反应后,再与反应后,再与
13、N-1N-1N-1N-1萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐结合生成结合生成结合生成结合生成玫瑰玫瑰玫瑰玫瑰红红红红溶液。溶液。溶液。溶液。将经过反应显色后的将经过反应显色后的泡菜待测样品泡菜待测样品与与标准液标准液比比色色,即可,即可估算估算出样品中的亚硝酸盐含量。出样品中的亚硝酸盐含量。3、步骤、步骤(1 1)配置溶液)配置溶液(2)配制标准液配制标准液(3)制备泡菜样品处理液制备泡菜样品处理液(4)比色)比色2、材料与器具、材料与器具泡菜、泡菜、对氨基苯磺酸、对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸萘基乙二胺盐酸盐、盐酸亚硝酸钠、亚硝酸钠、氯化镉、氯化钡、
14、氯化镉、氯化钡、氢氧化钠、氢氧化铝、氢氧化钠、氢氧化铝、蒸馏水、蒸馏水、榨汁机、移液管、容量瓶、比色管等榨汁机、移液管、容量瓶、比色管等(1 1)配置溶液)配置溶液对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液(4mg/mL)溶于溶于盐酸,避光保存盐酸,避光保存N-1萘基乙二胺盐酸盐溶液萘基乙二胺盐酸盐溶液(2mg/mL)避光保存避光保存亚硝酸钠溶液亚硝酸钠溶液(5ug/mL)提取剂:提取剂:氯化镉、氯化钡氯化镉、氯化钡氯化镉、氯化钡氯化镉、氯化钡氢氧化铝乳液氢氧化铝乳液氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液(2 2)配制标准显色液配制标准显色液 用移液管吸取用移液管吸取用移液管吸取用移液管吸取0.20mL0.20mL0
15、.20mL0.20mL、0.40mL0.40mL0.40mL0.40mL、0.60mL0.60mL0.60mL0.60mL、0.80mL0.80mL0.80mL0.80mL、1.00mL1.00mL1.00mL1.00mL、1.50mL1.50mL1.50mL1.50mL亚硝酸钠亚硝酸钠亚硝酸钠亚硝酸钠溶液溶液溶液溶液(相当于相当于相当于相当于1 1 1 1ugug,2ug2ug,3ug3ug,4ug4ug,5ug5ug和和和和7.5ug7.5ug亚硝酸钠亚硝酸钠亚硝酸钠亚硝酸钠),分别置于,分别置于,分别置于,分别置于50mL50mL50mL50mL比色管比色管比色管比色管中,再取中,再取中
16、,再取中,再取1 1 1 1支比色管作为支比色管作为支比色管作为支比色管作为空白对照空白对照空白对照空白对照。并分别加入并分别加入并分别加入并分别加入2.0mL2.0mL2.0mL2.0mL对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液,混匀,静置,混匀,静置,混匀,静置,混匀,静置3 3 3 35 5 5 5分钟后;分钟后;分钟后;分钟后;再分别加入再分别加入再分别加入再分别加入1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL N-1N-1N-1N-1萘基乙二胺盐酸盐溶液萘基乙二胺盐酸盐溶液萘基乙二胺盐酸盐溶液萘基乙二胺盐酸盐溶液,加,加,加,加蒸馏水至蒸馏水至蒸馏水至蒸馏水
17、至50mL50mL50mL50mL,混匀;,混匀;,混匀;,混匀;观察亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化(观察亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化(观察亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化(观察亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化(玫瑰红色玫瑰红色玫瑰红色玫瑰红色逐渐加逐渐加逐渐加逐渐加深)。深)。深)。深)。比色比色样品即滤液加入比色管样品即滤液加入比色管显色反应显色反应:先加对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸,后加 N-1萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐 比色比色:显色后与标准显色液对比,找出颜色:显色后与标准显色液对比,找出颜色最相近的记录对应亚硝酸盐含量最相近的记录对应亚硝酸盐含量测定反应原理总结酸化酸化:对氨基苯磺酸溶于对氨基苯磺
18、酸溶于对氨基苯磺酸溶于对氨基苯磺酸溶于盐酸中盐酸中盐酸中盐酸中重氮化重氮化:亚硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐+对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸 重氮盐重氮盐 酸酸显色显色:重氮盐+N-1N-1萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐 比色:样品和标准比色液对比,比色:样品和标准比色液对比,估算估算亚硝酸盐含量亚硝酸盐含量玫瑰红色玫瑰红色 某学生把甘某学生把甘蓝蓝切切丝丝后制作泡菜,后制作泡菜,为为了探究甘了探究甘蓝蓝在不在不同的温度下同的温度下经过经过3天天发发酵后所生成的乳酸量,在第酵后所生成的乳酸量,在第4天天检检测测的的实验结实验结果如表:果如表:
19、(1)分析分析资料,你可以得出什么料,你可以得出什么结论?(2)在泡菜制作在泡菜制作时,乳酸含量大致在,乳酸含量大致在0.8左右左右时风味最味最好,此好,此时维生素生素C的保存率也的保存率也较高,高,结合以上材料,你合以上材料,你在制作泡菜在制作泡菜时应该注意什么注意什么?练习题练习题(1)分析资料,你可以得出什么结论分析资料,你可以得出什么结论?从表中数据分析可得知,甘蓝在从表中数据分析可得知,甘蓝在31时所生成时所生成的乳酸含量最多,低于或者高于这个温度所生成的的乳酸含量最多,低于或者高于这个温度所生成的乳酸量都比较少一些。乳酸量都比较少一些。(2)在泡菜制作时,乳酸含量大致在在泡菜制作时
20、,乳酸含量大致在0.8左右时风左右时风味最好,此时维生素味最好,此时维生素C的保存率也较高,结合以上的保存率也较高,结合以上材料,你在制作泡菜时应该注意什么材料,你在制作泡菜时应该注意什么?注意把温度控制在注意把温度控制在16左右为宜左右为宜课堂练习课堂练习下图为泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图,下图为泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图,请据图回答:请据图回答:(1)制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料,原因是制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料,原因是 (2)制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比约为制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比约为 ,盐,盐水需煮沸并冷却后才可使用,原因是水
21、需煮沸并冷却后才可使用,原因是 ;试说明盐在泡菜制作中的作用:;试说明盐在泡菜制作中的作用:。(3)泡菜风味形成的关键在于泡菜风味形成的关键在于 的加入。的加入。亚硝酸盐的含量低亚硝酸盐的含量低 4:1 加热煮沸是为了杀灭杂菌,加热煮沸是为了杀灭杂菌,冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响 盐有灭菌、渗出蔬菜中过盐有灭菌、渗出蔬菜中过多的水以及调味的作用多的水以及调味的作用 调味料调味料 (4)泡菜的制作方法不当,很容易造成泡菜变质,甚至泡菜的制作方法不当,很容易造成泡菜变质,甚至发霉变味,试分析可能的原因:发霉变味,试分析
22、可能的原因:(5)发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量,原因是发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量,原因是 (6)测定亚硝酸盐含量的方法是测定亚硝酸盐含量的方法是 。泡菜坛子密封不严或取食工具不卫生,或盐的比泡菜坛子密封不严或取食工具不卫生,或盐的比例过小,都会引起杂菌滋生、泡菜变质例过小,都会引起杂菌滋生、泡菜变质 发酵不同时期亚硝酸盐的含量会发生变化,及时检测发酵不同时期亚硝酸盐的含量会发生变化,及时检测是为把握取食泡菜的最佳时机是为把握取食泡菜的最佳时机 比色法比色法 果酒果酒果酒果酒果醋果醋果醋果醋腐乳腐乳腐乳腐乳泡菜泡菜泡菜泡菜微生物类微生物类微生物类微生物类型型型型原理原理原理原理反应
23、条件反应条件反应条件反应条件检测方法检测方法检测方法检测方法酵母菌,酵母菌,真菌,兼真菌,兼性厌氧性厌氧醋酸菌,醋酸菌,细菌,好细菌,好氧菌氧菌毛霉,真毛霉,真菌,好氧菌,好氧乳酸菌,细乳酸菌,细菌,厌氧菌菌,厌氧菌酵母菌的酵母菌的无氧呼吸无氧呼吸产生酒精产生酒精1825 1825,无氧,无氧重铬酸钾重铬酸钾与其反应与其反应呈灰绿色呈灰绿色醋酸菌的醋酸菌的有氧呼吸有氧呼吸产生醋酸产生醋酸30353035,通,通入氧气入氧气品尝、品尝、pHpH试纸检试纸检测测毛霉产生毛霉产生蛋白酶和蛋白酶和脂肪酶脂肪酶15151818接接种,酒精含种,酒精含量控制在量控制在1212左右左右乳酸菌无乳酸菌无氧呼吸产氧呼吸产生乳酸生乳酸常温,无常温,无氧条件氧条件pHpH检测,亚检测,亚硝酸盐的检硝酸盐的检测方法测方法果酒果酒果酒果酒果醋果醋果醋果醋腐乳腐乳腐乳腐乳泡菜泡菜泡菜泡菜微生物类微生物类微生物类微生物类型型型型原理原理原理原理反应条件反应条件反应条件反应条件检测方法检测方法检测方法检测方法作业:作业:列表比较下列发酵过程列表比较下列发酵过程