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1、蛋白质印迹 目录/Contents 01 02 03 蛋白质印迹概述 蛋白质印迹实验流程 蛋白质印迹常见问题分析 概述 印迹（Blotting）是指将样品转移至相应的固相载体上后，利用相应的探针来检测样本的一种方法。蛋白质印迹(Western Blot)是指细胞或生物组织等蛋白样品经凝胶电泳分离后，转移至固相载体上，而后利用特异性抗体对目标蛋白进行定量或定性检测的一种技术。蛋白质印迹 概述 1975年，英国人Edwin Mellor Southern，创建了一个以标记核酸为探针来检测DNA的杂交技术，命名为“Southern blot”。1977年，George Stark及其同事用相同的原理
2、发明了检测RNA的方式，命名为“Northern Blot”。1979年，同样George Stark发展了早期的蛋白印迹技术，将蛋白经凝胶电泳分离后转移至活化的纤维素膜上。1981年，W.Neal Burnette正式将这一技术命名为“Western Blot”。Edwin Mellor Southern George Stark.W.Neal Burnette 概述 Western Blot 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样品，以非共价键形式转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上。以载体上的蛋白质或多肽作为抗原，一抗作为检测“探针”与对应的抗原起免疫反应，再与酶或同位素标记的二抗体起反应，
3、经过底物显色或放射自显影，检测通过电泳分离的蛋白产物。蛋白质印迹原理 概述 蛋白质印迹原理 蛋白样品 PAGE胶 NC膜 一抗:Y 二抗:Y 显色 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 概述 蛋白质印迹是一种将高分辩率凝胶电泳（PAGE）和免疫化学（IC）分析技术相结合的杂交技术。蛋白质印迹优点 蛋白质印迹具有分析容量大、灵敏度高、特异性强、成本低和效率高等优点。概述 蛋白质印迹应用（1）蛋白的定量检测（组织抗原、多肽分子及病毒抗体或抗原等）（2）蛋白表达的定位（细胞核、细胞质、线粒体等）（3）蛋白表达特性的分析（磷酸化、乙酰化等）（4）蛋白与蛋白相互作用的鉴定（与pull down、co-IP结合等）广泛应用亍蛋白水平的检测：