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1、小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 苦瓜蛋白对小鼠移植性肝癌22肿瘤的抑制作用 (1温州医学院附属第一医院，浙江温州325000；2汕头高校医学院，广东汕头510031) 摘要：目的：探讨苦瓜蛋白对荷瘤小鼠肿瘤生长和免疫器官的影响。方法：将清洁级ICR雄性小鼠按体重随机分成4组，建立肝癌H22皮下移植瘤模型，分为生理盐水比照组(con)、高剂量组(t3)、中剂量组(t2)和低剂量组(t1)。在一般饲料饲喂的基础上采纳腹腔注射给药法分别予空白比照组给以生理盐水；高、中、低剂量组分别给以不同剂量苦瓜蛋白。视察其对肿瘤生长的影响；并视察其对肝、脾组织脏器指数的影响。结果：苦瓜蛋白干预组与比照组相比，低、中
2、、高组抑瘤率分别为52.05、66.89及85.81；与比照组比较，体重、瘤重等指标改变均具有统计学意义(P0.05)；肝、脾组织脏器指数改变等方面无统计学差异(P0.05)。结论：苦瓜蛋白对在体肿瘤的生长具有显著抑制作用，对荷瘤小鼠的肝脾等免疫器官无明显抑制作用。 关键词：苦瓜蛋白；移植性肿瘤；H22；抗肿瘤作用 中图分类号：R286.9文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-0949-03 苦瓜为葫芦科苦瓜属植物，始载于明代滇南本草，在中国、东南亚、土耳其等地均有广泛的栽种和药用历史。本草纲目中记载，苦瓜具有“除邪热，解劳乏，清心明目”等功效。近年来的探讨发觉，苦瓜具
3、有降血糖、抗肿瘤、抗病毒及抗生育等功效。苦瓜蛋白(Momor-din)是从苦瓜籽中分别出来的一种分子量约为30KD的碱性糖蛋白质，属于型核糖体失活蛋白(ribosome inhibitingprotein，RIP)。近年来探讨表明苦瓜蛋白具有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。笔者探讨亦表明苦瓜蛋白诱导细胞凋亡时相关细胞黏附分子改变发生改变，CD54表达上调可能是苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一(invitro)。为进一步了解苦瓜蛋白对动物移植性肿瘤的作用(in vivo)的影响，促进苦瓜蛋白的应用于肿瘤治疗供应理论和试验基础。笔者视察了不同剂量苦瓜蛋白对移植性肝癌H22笠荷瘤小鼠肿瘤的作用及其对
4、肝、脾等免疫器官的影响，结果表明苦瓜蛋白具有明显的肿瘤抑制作用，但同时对肝、脾等器官无明显抑制作用。 1材料与方法 1.1苦瓜蛋白分别与纯化预冷梯度丙酮沉淀得到的苦瓜籽粗蛋白经SP sepharose High Performance阳离子交换层析柱在GE-Health中压层析系统中分别纯化得到(方法略)。 1.2试验动物与细胞株清洁级ICR雄性小鼠，体重1822g，温州医学院试验动物中心供应。ICR小鼠H22腹水瘤细胞由浙江中医药高校生命科学系惠赠。 1.3荷瘤小鼠模型的建立无菌条件下抽取肝癌小鼠腹水中的H22笠细胞，用无菌生理盐水将收集到的肿瘤细胞浓度调整为1106/mL，于ICR小鼠左前
5、肢腋下行无菌皮下接种，每只小鼠接种0.2mL细胞悬液，细胞总数为2105。 1.4试验动物分组及处理小鼠接种H22细胞后24h分组(每组12只)，随机分为低剂量苦瓜蛋白给药组(t1，25mg/kg)、中剂量苦瓜蛋白给药组(t2，50mg/kg)和高剂量苦瓜蛋白给药组(t3，100mg/kg)；另设阴性比照组(con，给以等量生理盐水)。各组均腹腔注射给药，给药体积为每只0.2mL，每日1次，连续12天。 1.5苦瓜蛋白对荷瘤小鼠肿瘤抑制作用停药后次日处死小鼠，剥离瘤体称其质量，计算肿瘤生长抑制率(抑瘤率)。抑瘤率=(比照组平均瘤质量一治疗组平均瘤质量)100比照组平均瘤质量。 1.6苦瓜蛋白对
6、荷瘤小鼠免疫器官肝脏和脾脏的影响各组小鼠停药后次日处死，完整取出肝脏和脾脏后称质量，计算肝脏指数和脾脏指数。肝脏(脾脏)指数=肝脏(脾脏)质量体重100。 1.7病理学组织切片视察肿瘤、脾脏等组织行病理学切片HE染色视察。 1.8统计学处理试验数据以xs表示，运用SPSS10.0统计学软件进行单向方差分析(oreway ANOVA)，并进行组间比较，以P0.05表示有显著性差异。 2结果 2.1苦瓜蛋白对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用的影响不同剂量苦参碱对ICR小鼠H22实体瘤均有明显抑制作用。25、50及100mg/kg苦瓜蛋白组抑制率分别为52.05、66.89及85.81。与比照组比较差异显著(
7、P0.01)，苦瓜蛋白高与中及低剂量组间差异显著(P0.05)，中与低剂量组问无统计学意义(P0.05)。 2.2苦瓜蛋白对荷瘤小鼠体重的影响不同剂量苦瓜蛋白对1CR荷瘤H22小鼠体重增长均有具有抑制作用。高、中及低剂量苦瓜蛋白组体重与比照组比较差异显著(P0.05)。 2.3苦瓜蛋白对荷瘤小鼠肝脾等免疫器官的影响。与比照组相比，只有高剂量苦瓜蛋白组小鼠的肝脏指数稍有变更(P0.05)，中、低剂量苦瓜蛋白组小鼠的肝脏指数无明显变更(P0.05)；脾脏指数无降低(P0.05)，中、高剂量苦瓜蛋白组小鼠的脾脏指数比较有统计意义(P0.05)。显示苦瓜蛋白对小鼠的肝脏、脾脏的抑制作用不明显。 2.4
8、病理形态学视察苦瓜蛋白处理组(t3)小鼠脾脏较比照组(con)体积稍缩小，质量稍减轻；石蜡切片HE染色见白髓结构轻度破坏，红髓淋巴细胞改变不明显，脾窦扩张充血，可见巨核细胞散在分布。各试验组和比照组肝脏病理切片无明显异样病理学变更。 3探讨 肿瘤是严峻危害人类健康的一大病因，近年来，从祖国传统医药宝库中发掘的抗肿瘤药物用于肿瘤治疗已经成为一个新的探讨和发展方向，并在临床应用中取得了可喜进展。苦瓜作为药食同源的植物，苦瓜蛋白药理活性显著，毒副作用小，具有抗肿瘤、抗病毒等作用，具有极大的药用价值。其中苦瓜蛋白属于型核糖体失活蛋白，是从苦瓜种仁中分别出来的一类能够使核糖体失活、抑制细胞蛋白质合成的碱
9、性糖蛋白。近年来探讨发觉某些植物来源的型RIP能够诱导肿瘤细胞产生凋亡。如用提取自麦仙翁种子的型RIP-Agrostin处理HL-60细胞后发觉其不仅可以抑制细胞增殖并且能够诱导HL-60细胞发生凋亡。从樟树种子中提取出的型RIP对肝癌细胞7221有明显的抑制、杀伤效应，而对正常的小鼠上皮培育细胞(Smac-13)无抑制作用。南瓜蛋白免疫毒素对黑色素瘤细胞具有抗肿瘤作用，相思豆毒素可以通过线粒体通路驱动Jurkat细胞发生细胞凋亡。另外，笔者探讨表明苦瓜蛋白可以明显诱导K562细胞产生细胞凋亡。表明不同来源的植物I型RIP对于上皮来源和间质来源的肿瘤细胞都能够发挥其抑制、杀伤效应，而诱导细胞凋
10、亡的发生则是I型RIP发挥抗肿瘤功能的重要机制所在。 本探讨结果表明，苦瓜蛋白对小鼠移植性肿瘤H笠的生长有显著的抑制作用，高、中、低剂量组对小鼠移植性肿瘤H22的抑制率分别为52.05、66.89及85.81，与生理盐水比照组相比有显著性差异(P0.05)，同剂量呈正相关。而给药组除对小鼠增重有肯定影响外，对脾肝等免疫器官基本影响较轻。而环磷酰胺在抑制肿瘤的同时对小鼠的体重及胸腺、脾等重要免疫器官也产生了明显的抑制。因此，苦瓜蛋白作为中草药用来治疗肿瘤可能具有其独特的优势。同时，各剂量组小鼠的体重有明显的下降，说明在上述给药剂量范围内苦瓜蛋白还是具有肯定的毒副作用。 综上所述，苦瓜蛋白具有较强的体内和体外抗肿瘤作用的活性，对荷瘤小鼠的肝脾等免疫器官毒副作用小。假如对给药方式及给药剂量进行进一步优化，以降低其毒副作用，可能使苦瓜蛋白具有进一步临床应用的价值。 注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。