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1、氨基葡糖盐酸盐体内外抗肿瘤作用实验研究:D葡萄糖盐酸盐 摘要：目的探讨D-氨基葡糖盐酸盐（GAH）的抗肿瘤作用。方法用SRB法视察GAH的体外抗肿瘤作用，通过GAH对S180，H22荷瘤小鼠瘤重和生存时间的影响，视察 GAH的体内抗肿瘤作用。结果GAH可明显抑制S180小鼠瘤体的生长，明显延长H22荷瘤小鼠的生存时间；对3种人癌细胞（HepG-2，LS-174，BGC-7901）具有肯定的杀伤作用，以对HepG-2细胞的抑制作用较为明显。结论GAH于试验条件下在体内外均有肯定的抗肿瘤作用。 关键词：D-氨基葡糖盐酸盐；抗肿瘤作用 中图分类号：R979.1文献标识码：A文章编号：1672-979
2、X(2007)02-0008-03 Study on Antitumor Effect of D-Glucosamine Hydrochloride in Vitro and in Vivo XU Hai-jiao1, CAO Xiu-ming1、2, JI Yu-bin1, LI Hui1 （1.Center of Research and Development on Life Sciences and Environmental Sciences, Harbin University of Commerce, Harbin 150076,China; 2.School of Life S
3、ciences, Ocean University of China, Qingdao 266003,China) Abstract：Objective To study the antitumor activity of D-glucosamine hydrochloride(GAH). Methods The antitumor activity in vitro was observed by SRB, and the effect in vivo was studied by observing tumor weight and survival time of S180 and H2
4、2 mice. Results GAH was a powerful antitumor agent in 3 kinds of human cancer cell lines(HepG-2、LS-174、BGC-7901), especially HepG-2. GAH also inhibited the growth of cancer cells of S180 mice and prolonged the survival time of H22 mice. Conclusion GAH has a relative high potent antitumor effect both
5、 in vitro and in vivo. Key words：D-glucosamine hydrochloride; antitumor activity D-氨基葡糖盐酸盐又称葡糖胺盐酸盐（D-glucosamine hydrochloride，GAH），化学名2-氨基-2-脱氧-D-葡糖盐酸盐，其结构为D-葡糖分子中C2-羟基被氨基取代，因氨基显碱性，与盐酸成盐1, 2。目前，GAH抑制癌细胞及肿瘤细胞生长等作用的探讨日益受到重视。本探讨围绕GAH的体内、外抗肿瘤作用绽开，以冀为本品的深化探讨及应用供应试验基础。 1材料 1.1肿瘤细胞系和瘤株 人肝癌细胞（HepG-2）、肠癌细胞（
6、LS-174）、胃癌细胞（BGC-7901）、小鼠肉瘤（S180）、小鼠肝癌（H22）（哈尔滨医科高校肿瘤防治所供应）。 1.2动物 昆明种小鼠（黑龙江省肿瘤防治探讨所供应，体重202.0g，雄性。合格证号：黑动字P00101014）。 1.3主要试剂与仪器 GAH（中国海洋高校刘万顺教授惠赠）；小牛血清、RPMI-1640培育液（Gibco）；SRB（Sigma）；5-氟尿嘧啶（5-FU，上海海普制药厂）；环磷酰胺（CTX，江苏恒瑞医药股份有限公司）；LNA-型二氧化碳培育箱（日本）；EL311型酶标仪（美国BIO-TEK公司）。 2方法 2.1体外抗肿瘤作用 SRB法检测GAH体外细胞毒。
7、SRB法为一种细胞毒试验，以检测培育细胞的蛋白质来确定细胞生长和存活状况。本试验通过SRB法检测GAH体外对HEPG-2，BGC-7901，LS-174细胞的抑制作用3。 试验所用细胞于含5% CO2的37 培育箱中培育传代，用含10%胎牛血清及100 U/mL青霉素、100 g/mL链霉素的RMPI 1640培育液培育；用0.25% 胰酶消化传代，每34 d换培育基1次，待细胞长满刚好传代。 将对数生长期的细胞经0.25% 胰酶消化分散后计数制成细胞悬液，细胞浓度调至1104个/mL，接种于96孔板，100 L /孔。培育箱中培育24 h后, 每孔加入GAH 100 L（终浓度分别为0.05
8、，0.1，0.2，0.4 mg/mL）；同时设空白比照孔（每孔加RPMI-1640培育液100 L）；阳性比照组（每孔加5-FU 100 L，终浓度为0.2 mg/mL）。每个剂量设6个平行孔，接着培育。48 h后取出培育板，每孔加50 L预冷的50%的TCA固定细胞（TCA终浓度10%），静置5 min，用去离子水洗45次，空气干燥。每孔加0.4% SRB溶液100 L，室温放置 30 min，弃去液体，用1%醋酸轻洗45次，甩干。加10 mmol/L非缓冲三羟甲基胺基甲烷碱液（Tris）200 L，稳定10 min后用酶标仪检测各孔吸光度A值（570 nm）4。 抑瘤率(1用药孔A值/空白
9、比照孔A值)100% 2.2体内抗肿瘤作用 2.2.1GAH对S180小鼠瘤重的影响取1822 g昆明种小鼠接种S180瘤株，方法5是在无菌条件下抽取接种7 d并生长良好的S180荷瘤小鼠腹水，用灭菌生理盐水1:3稀释，分别将0.2 mL稀释液接种于每只小鼠右腋下。接种后次日称重，随机将小鼠分为4组，即阴性比照组（生理盐水组），阳性比照组（环磷酰胺组，灌胃25 mg/kg），及GAH低、中、高剂量组（分别灌胃30，60，120 mg/kg的GAH生理盐水溶液）。每日灌胃1次，每次每只小鼠0.2 mL。连续7 d，于第8日称重，处死，分别取肿瘤和脾脏，称重，并按下列公式计算肿瘤生长抑制率以及脾脏
10、指数（试验重复3次）。 2.2.2GAH对H22小鼠生存时间的影响为昆明种小鼠移植肿瘤细胞 5，取接种7 d生长良好的H22小鼠，无菌条件下抽取腹水，在冰浴条件下用灭菌生理盐水1:3稀释，分别将0.2 mL稀释液接种于昆明种小鼠腹腔内。24 h后称重，随机分组，分组与给药同2.2.1，停药后视察记录各组小鼠的死亡数。各组小鼠全部死亡后，计算生命延长率（试验重复3次）。 2.3统计学处理 用SPSS11.5软件处理，各组数据以 表示，组间比较用t检验。 3试验结果 3.1GAH体外抗肿瘤作用 3.1.1对人肿瘤细胞的抑制作用见表1。由表1 可见，GAH对HepG-2细胞有肯定的抑制作用，0.2 mg/mL浓度的GAH抑瘤率最大，为42.4%，对LS-174、SGC-7901抑制作用较弱，最大抑制率分别为28.7%和24.2%。 表1 GAH对人肿瘤细胞的抑制作用（SRB法） *P0.05，*P