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1、组织细胞凋亡检测 在直肠癌组织中检测细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达的意义 摘 要 目的:探讨直肠癌细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达与直肠癌预后的关系。方法:应用免疫组化TUNEL及SP法对106例直肠癌进行细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达检测,并分别以已知阳性比照切片作为阳性比照。结果:不同分化程度直肠癌中,细胞凋亡及c-erbB-2的阳性率不同。分化程度高,则细胞凋亡率高;分化程度低,则c-erbB-2阳性率高。同时有细胞凋亡和c-erbB-2阳性表达的几率在低分化直肠癌中最高。结论:细胞凋亡及c-erbB-2可作为判定直肠癌预后的牢靠指标。 关键词 直肠肿瘤 凋亡 c-erb
2、B-2癌基因 doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.158 AbstractObjective:To study the relationship between apoptosis and c-erbB-2 in rectal carcinoma.Methods:Using immunohistochemical method,we examined 106 samples of rectal carcinoma.Results:The results show that the positive rates of apoptosis and c-erbB
3、-2 were different in carcinoma tissue with different degree of differentiation,The higher the differentiation,the higher the rate of apoptosis,and the lower the differentiation,the higher the expression rate ofc-erbB-2.Conclusion:The examination of apoptosis and expression of c-erbB-2 in rectal carc
4、inoma may be reliable indicators to judge the prognosis. Key WordsRectal carcinoma;apoptosis;c-erbB-2 资料与方法 一般资料:收集直肠活检标本106例,其中高分化腺癌22例;中分化腺癌20例;低分化腺癌64例。全部病例活检术前均未进行抗肿瘤治疗。 方法:将原蜡块切片,分别作HE及免疫组化染色。检测细胞凋亡运用TUNEL试剂盒,检测方法参照试剂盒说明书进行。切片脱蜡无水,以3%过氧化氢、甲醛处理5分钟,蛋白酶K室温消化20分钟,蒸馏水洗涤后加标记缓冲液,1分钟后甩干;加反应液,TBS洗涤后用DAB
5、显色,苏木素复染,分化、脱水、中性树胶封固。以已知凋亡细胞阳性切片作阳性比照。免疫组化用S-P法,均以已知阳性比照切片作为阳性比照,以PBS取代一抗作阴性比照。染色结果:凋亡细胞核呈棕褐色,非凋亡细胞核呈绿色。c-erbB-2的阳性部位为细胞膜和细胞浆。 统计学处理:采纳X2检验。 结 果 在直肠癌中凋亡细胞表现为细胞变圆或不规则,与邻近细胞的连接消逝,呈空晕状,染色质浓缩聚集呈圆形或紧贴核膜边缘呈新月状,细胞核碎裂等。检测发觉,22例直肠癌高分化腺癌组织中,细胞凋亡呈阳性者20例,阳性率99.99%;20例中分化腺癌中,细胞凋亡呈阳性者16例,阳性率80.00%;在64例低分化腺癌中,细胞凋
6、亡呈阳性者48例,阳性率75.00%。 免疫组化技术检测发觉,在22例直肠高分化腺癌组织中,4例可见 c-erbB-2阳性细胞,阳性率36.36%;20例中分化腺癌中,有12例c-erbB-2呈阳性细胞,阳性率60.00%;64例低分化腺癌中,有54例c-erbB-2阳性细胞,阳性率84.38%。在20例中分化腺癌和22例高分化腺癌中,同时有细胞凋亡及c-erbB-2癌基因阳性表达者分别为10例(50.00%)和6例(27.27%)。64例低分化腺癌中,同时有细胞凋亡及c-erbB-2癌基因阳性者42例(65.62%)。结果见表1。阳性细胞呈灶状分布,无明显规律性。 讨 论 直肠癌与细胞凋亡的
7、关系:细胞凋亡是指在活体组织中,单个细胞受其内在基因的编程调控,通过主动的生化过程而“自杀”死亡的现象,是机体的一种生理现象,贯穿于生命过程。细胞凋亡是在某种因素的作用下,由细胞自身设计的死亡程序13,常常参加多种疾病的发生与发展。肿瘤的发生,不仅与细胞增殖,而且与细胞凋亡有着亲密的关系。细胞凋亡被认为对肿瘤有预后评估的意义4。但细胞凋亡与肿瘤分化程度的关系迄今尚不很清晰。本探讨的旨在初步探讨细胞凋亡与各分化程度直肠癌的关系,对直肠癌的防治供应参考。 肿瘤不仅是一类增生异样的疾病,也是凋亡异样的疾病,肿瘤中瘤细胞增殖和凋亡关系失调,可表现在3个方面:瘤细胞增殖力增加,细胞凋亡受抑制;瘤细胞增殖
8、活性无明显增加,但瘤细胞凋亡却明显受抑制;瘤细胞增殖和凋亡都增加,但增殖超过凋亡,细胞数不断增加。本组检测发觉,直肠癌组织凋亡阳性率与分化程度有亲密关系。分化程度高,则凋亡阳性率高。这提示细胞凋亡变异对直肠癌的发展影响较大。可以认为,在直肠癌发展过程中,具有异样分化特征的细胞对凋亡调控信号的敏感性增加。通过凋亡机制的启动,可筛选掉分化异样的细胞,这可能与部分直肠癌能够在相当长的时间内维持相对稳定的状态有肯定的关系。 癌基因与直肠癌的关系:在已知的癌基因中,c-erbB-2与肿瘤关系亲密。国内外学者的探讨表明,它们在癌组织中均有高度表达的状况5。本探讨表明,与细胞凋亡相反,c-erbB-2表达越
9、多,预后越差。有的组织还可以见到灶性的阳性细胞团,提示该组织增生活跃,预后较差。本探讨不仅视察了细胞凋亡,而且视察了c-erbB-2在直肠癌中共同表达的状况。检测发觉,有的标本虽然c-erbB-2有相同程度的表达,但细胞凋亡数不同;有的组织凋亡细胞数相近,而表达c-erbB-2的细胞数相差许多。因此,单独用其中一个指标进行直肠癌的预后评估,并不非常客观,而应当用综合指标推断。本试验结果表明,细胞凋亡与c-erbB-2的表达与直肠癌有肯定关系,两个指标不同,可能干脆影响直肠癌的预后。直肠癌的发生是多种因素共同参加的结果,c-erbB-2的扩增和过表达,均会导致正常细胞的恶化转化,随着探讨的深化,将为临床有效治疗供应理论依据。