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1、荧光共振能量转移FERTFRET 原理(Principle)FRET的条件发生发生FRETFRET需要三个条件：需要三个条件：1 1、供体分子的发射光谱和受体分子的吸收光、供体分子的发射光谱和受体分子的吸收光谱必须有显著的重迭，一般大于谱必须有显著的重迭，一般大于 30 30；2 2、供体分子和受体分子间的距离必须在、供体分子和受体分子间的距离必须在 1 10 nm 1 10 nm 之间之间.D.D和和A A间的间的FRET FRET 效率：效率：3 3、供体分子的发射态偶极矩与受体分、供体分子的发射态偶极矩与受体分子的吸收态偶极矩、以及它们的向量必子的吸收态偶极矩、以及它们的向量必须满足一定
2、的条件须满足一定的条件R0:E=50%时供体和受体分子间的距离.对于特定的供体受体对是常数;R:供体和受体分子间的距离.E:FRET效率.对于R特别灵敏.举例:假设 R0=5nm,1）R=10nm,E=1.5%2）R=5nm,E=50%3）R=6nm,E=25%450 500 550 600l(nm)D EmA Ex1)蛋白分子的共定位;2)蛋白分子聚合体;3)转录机制;4)转换途径;5)分子运动;6)蛋白折叠等生物学问题.FRET的应用的应用通过 FRET 技术可以获得有关两个蛋白分子之间相互作用的空间信息。常用于解决如下问题:LaserLaserDAFRET技术应用一:检测两个发光分子间的
3、重合与共定位荧光标记利用FRET技术检测不发光分子间相互作用的策略FRET技术应用二:检测分子间的相互作用LaserLaserFRET技术应用三:检测分子的折叠与构象变化FRET技术应用举例：细胞内钙离子浓度的实时测量Miyawaki A,et al.,Nature 1997,388:882-887(b)BFP-GFP BFP-YFP CFP-YFP CFP-dsRED GFP-dsRED在FRET实验中经常使用的供体-受体荧光分子对2.绿色荧光蛋白类(Green Fluorescent Proteins,GFPs)1.染料类(Dye)FITC-Rhodamine Alexa488-Cy3 C
4、y3-Cy5参考阅读文献参考阅读文献1.Jonathan D.Violin,et al.,A genetically encoded fluorescent reporter reveals oscillatory phosphorylation by protein kinase C.J Cell Biology,2003,161:8999092.Elizabeth A J et l.,FRET Imaging.Nature Biotechnology,2003,21:13887-13953.Rajesh B S.Fluorescence resonance energy transfer(
5、FRET)microscopy imaging of live cell protein localizations.J Cell Biology,2003,160:6296334.Jin Zhang,et al.,.Genetically encoded reporters of protein kinase A activity reveal impact of substrate tethering.PNAS,2001,98:14997150025.Michael G.Erickson,et al.,DsRed as a Potential FRET Partner with CFP a
6、nd GFP.Biophysical Journal,2003,85:5996116.Alexander Sorkin,et al.,Interaction of EGF receptor and Grb2 in living cells visualized by fluorescence resonance energy transfer(FRET)microscopy.Current Biology 2000,10:13951398 思思 考考 题题2.你认为FRET技术特别适合什么领域?举例说明。1.为什么FRET效率对供体受体分子间的空间距离非常灵敏?3.A和B分子都不能发射荧光,要求采用FRET技术检测二者之间的相互作用特征,请问应该如何处理?论文题目：供体受体对之间R0定量分析与计算此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢