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1、培养基的配制和灭菌 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望v学习培养基配制的原理和基本步骤学习培养基配制的原理和基本步骤 v学习高压蒸汽灭菌的原理和方法学习高压蒸汽灭菌的原理和方法 实验目的实验目的实验原理实验原理一、常用器皿的洗涤与包扎：一、常用器皿的洗涤与包扎：v试管（塞）：试管（塞）：10支支v三角瓶三角瓶250mL（棉塞）：（棉塞）：1个个v1ml吸管吸管6支支,10ml吸管吸管1支支v培养皿培养皿10个（一包）个（一包）v制作涂布器制作涂布器2个
2、：用酒精灯个：用酒精灯 将以上用品包扎后，灭菌。将以上用品包扎后，灭菌。三三.实验步骤实验步骤培养基的配制培养基的配制二二牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养养基基的的制制备备（斜斜面面1支支/人人、培养皿培养皿1个个/人、三角瓶固体人、三角瓶固体200mL/3组）组）配方：配方：v营养肉汤营养肉汤 1.8gv琼脂琼脂 2gv固体培养基固体培养基 2%(1.5-2.5%)v蒸馏水蒸馏水 100mL 三三.实验步骤实验步骤培养基的配制培养基的配制1.斜面的制备斜面的制备v准确地称取营养肉汤准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入烧杯中。在上述烧杯中放入烧杯中。在上述烧杯中先加入先加入200 ml水，用玻棒
3、搅匀，然后，将称好的琼脂水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，每支试管约每支试管约4ml。（。（注意：每人注意：每人1支试管，支试管，3个组一起做个组一起做）。加塞，包扎后，灭菌。加塞，包扎后，灭菌。v注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基
4、时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。子进入培养基中，影响细菌生长。三三.实验步骤实验步骤培养基的配制培养基的配制2.固体培养基的制备固体培养基的制备 准确地称取营养肉汤准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入三角瓶中。放入三角瓶中。加入加入200 ml水，然后，将称好的琼脂水，然后，将称好的琼脂4g加入，加入，用玻棒搅拌均匀。加塞，包扎后，灭菌。每用玻棒搅拌均匀。加塞，包扎后，灭菌。每3组组1瓶。瓶。注意：在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先注意：在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶
5、中，然后按将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%2.0%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。节省时间。三三.实验步骤实验步骤培养基的配制培养基的配制 说明：说明：v加塞：加塞：培养基分装完毕后，在试管口和三角瓶口上塞上培养基分装完毕后，在试管口和三角瓶口上塞上棉花塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养棉花塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。v包扎：加塞后，将全部试管用
6、麻绳捆好，再在棉塞外包包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。一道麻绳扎好。v标记：用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三标记：用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组使使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。别、配制日期。三三.实验步骤实验步骤培养基的配制培养基的配制4灭菌灭菌v将上述培养基以将上述培养基以0
7、.103Mpa,121,20min高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌.5.搁置斜面搁置斜面v将灭菌的试管培养基冷至将灭菌的试管培养基冷至50左右左右(以防斜面上冷凝水太以防斜面上冷凝水太多多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度将试管口端搁在玻棒或其他合适高度 的器具上的器具上,搁置搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。6.到固体平板到固体平板v将灭菌培养基降温将灭菌培养基降温50，到固体平板。，到固体平板。三三.实验步骤实验步骤培养基的配制培养基的配制高压蒸汽灭菌操作步骤：高压蒸汽灭菌操作步骤：121,20min（15-30min）v1.首先将内层锅取出，再向外
8、层锅内加适量的水，首先将内层锅取出，再向外层锅内加适量的水，使水面与三角架相平为宜。使水面与三角架相平为宜。v注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅干而引起爆炸事故防灭菌锅干而引起爆炸事故v2.放回内层锅，并装入灭菌物品。放回内层锅，并装入灭菌物品。v注意：不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响注意：不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞 三三三三.实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤高压蒸汽灭菌高压蒸
9、汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌v3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。v4.加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至内压力升到所需压力时，控制电源，维持
10、压力至所需时间。本实验用所需时间。本实验用0.1MP，121.5，20分钟灭分钟灭菌。菌。v注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力。故锅注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力。故锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。持所需压力。三三三三.实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌v5.灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。出灭菌物品。v注意：压力必须降至注意：压力必须降至“0”时才能打开排气时才能打开排气阀，开盖取物。否则，就会因锅内压力突然阀，开盖取物。否则，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。养基而发生污染，甚至灼伤操作者。三三三三.实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌