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1、实验三细胞化学成分的显示 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望掌握血涂片及骨髓涂片制作方法。掌握血涂片及骨髓涂片制作方法。掌握碱性蛋白、过氧化物酶及核酸显示的原理。掌握碱性蛋白、过氧化物酶及核酸显示的原理。熟悉上述化学成分在细胞中的分布。熟悉上述化学成分在细胞中的分布。了解上述化学成分显示的方法。了解上述化学成分显示的方法。一、目的要求一、目的要求二、实验内容和实验方法二、实验内容和实验方法 细胞内碱性蛋白的显示细胞内碱性蛋白的显示 DNA和和RNA的显
2、示的显示 过氧化氢酶的显示过氧化氢酶的显示 细胞内碱性蛋白的显示细胞内碱性蛋白的显示 实验原理实验原理 标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同用不同pH值的快绿染液分别染色，使细胞值的快绿染液分别染色，使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。实验方法实验方法 1.临时装片的制备。临时装片的制备。2.固定：固定：70%乙醇，乙醇，10min。3.7090，5%三氯醋酸，三氯醋酸，15分。分。4.清水冲洗。清水冲洗。5.染色：碱性固绿染色染色：碱性固绿染色5min。6.清水冲洗。清水冲洗。7.晾干，镜检。晾干，镜检。DNA和和RNA
3、的显示的显示 实验原理实验原理 利用碱性染料甲基绿和派洛宁处理细利用碱性染料甲基绿和派洛宁处理细胞，可使其中的胞，可使其中的DNA和和RNA呈现出不同呈现出不同的颜色，这种颜色上的差异是由的颜色，这种颜色上的差异是由DNA和和RNA聚合程度的不同所引起。聚合程度的不同所引起。实验方法蟾蜍血涂片实验方法蟾蜍血涂片DNA和和RNA的显示的显示 1.制备蟾蜍血涂片：同上。制备蟾蜍血涂片：同上。2.固定：固定：70%乙醇，乙醇，5min，晾干。，晾干。3.染色：甲基绿染色：甲基绿派洛宁，派洛宁，10min。4.清水冲洗。清水冲洗。5.分化：纯丙酮。分化：纯丙酮。6.镜检。镜检。1.1.临时装片的制备。
4、临时装片的制备。临时装片的制备。临时装片的制备。2.2.固定：固定：固定：固定：70%70%乙醇，乙醇，乙醇，乙醇，10min10min。3.703.709090 ，5%5%三氯醋酸，三氯醋酸，三氯醋酸，三氯醋酸，1515分。分。分。分。4.4.清水冲洗。清水冲洗。清水冲洗。清水冲洗。5.5.染色：碱性固绿染色染色：碱性固绿染色染色：碱性固绿染色染色：碱性固绿染色5min5min。6.6.清水冲洗。清水冲洗。清水冲洗。清水冲洗。7.7.风干，镜检。风干，镜检。风干，镜检。风干，镜检。1.1.制备蟾蜍血涂片：同上。制备蟾蜍血涂片：同上。制备蟾蜍血涂片：同上。制备蟾蜍血涂片：同上。2.2.固定：固
5、定：固定：固定：70%70%乙醇，乙醇，乙醇，乙醇，5min5min，晾干。晾干。晾干。晾干。3.3.染色：甲基绿染色：甲基绿染色：甲基绿染色：甲基绿派洛宁，派洛宁，派洛宁，派洛宁，10min10min。4.4.清水冲洗。清水冲洗。清水冲洗。清水冲洗。5.5.分化：纯丙酮。分化：纯丙酮。分化：纯丙酮。分化：纯丙酮。6.6.镜检。镜检。镜检。镜检。碱性蛋白碱性蛋白 DNA和和RNA 过氧化氢酶的显示过氧化氢酶的显示 实验原理实验原理 过氧化氢酶系能把许多胺类物质氧化为过氧化氢酶系能把许多胺类物质氧化为有色化合物，若用联苯胺混合液处理标本，有色化合物，若用联苯胺混合液处理标本，细胞内的过氧化氢酶能把联苯胺氧化为蓝色细胞内的过氧化氢酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色的联苯胺腙。的联苯胺蓝，进而变为棕色的联苯胺腙。实验方法家兔骨髓细胞中实验方法家兔骨髓细胞中过氧化氢酶的显示过氧化氢酶的显示1.取材。取材。2.2.固定：固定：0.5%硫酸铜，硫酸铜，30s1分钟。分钟。3.氧化：氧化：联苯胺，联苯胺，36分钟。分钟。4.清水冲洗。清水冲洗。5.染色：染色：1%番红，番红，12min。6.清水冲洗。清水冲洗。7.晾干镜检。晾干镜检。