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1、微生物的分离培养和接种技术微生物的分离培养和接种技术实验目的、要求实验目的、要求（1 1）学学习习并并掌掌握握细细菌菌、放放线线菌菌、霉霉菌菌和和酵酵母母菌菌等等四四大大类类微微生物的稀释分离、划线分离等技术。生物的稀释分离、划线分离等技术。（2 2）学习从样品中分离、纯化出所需菌株。）学习从样品中分离、纯化出所需菌株。（3 3）了解四大类微生物的培养条件和培养时间。）了解四大类微生物的培养条件和培养时间。（4 4）学习平板菌落计数法）学习平板菌落计数法（下次实验）（下次实验）。以细菌为例以细菌为例以细菌为例以细菌为例菌落计数规则：菌落计数规则：选择平均菌落数在选择平均菌落数在30300间的平
2、板间的平板1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告；以稀释倍数报告；2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值）：菌落数除以低稀释度的菌落数的值）：1）若）若0.5比值比值22，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。得的值的均值报告。2）若）若2比值或比值比值或比值0.5，则取其中较少的菌落总数进，则取其中较少的菌落总数进行报告。行报告。3、若所有稀释度的菌落平均数均大于、若所有稀释度的菌落平均数均大于3
3、00，则按稀释倍数，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；4、若所有稀释度的菌落平均数均小于、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；所有菌落数均不在所有菌落数均不在30300间间以最接近以最接近30或或300的平均菌落数乘稀释倍数的平均菌落数乘稀释倍数6、挑菌划线分离挑菌划线分离挑取单个菌落（细菌菌落），分别在平板上做分区和挑取单个菌落（细菌菌落），分别在平板上做分区和连续划线。连续划线。370C培养培养48h检查菌落是否单纯。检查菌落是否单纯。划线方法：详见实
4、验指导书划线方法：详见实验指导书P72、P237q无菌操作（无菌操作（近火焰处操作）：近火焰处操作）：q接种环灼烧灭菌、冷却接种环灼烧灭菌、冷却左手取涂布分离左手取涂布分离培养后平板培养后平板右手用接种环挑取涂布分离培养右手用接种环挑取涂布分离培养的平板中的目的单菌落的平板中的目的单菌落用已经粘有菌体的接种用已经粘有菌体的接种环环于另一新的空白平板中划线于另一新的空白平板中划线q分区划线法：灼烧、冷却、取菌分区划线法：灼烧、冷却、取菌区区1划线划线灼烧、冷却灼烧、冷却区区2划线划线区区3划线划线灼灼烧、冷却烧、冷却区区4划线划线完毕、灼烧完毕、灼烧q连续划线法：灼烧、冷却、取菌连续划线法：灼烧、冷却、取菌连续划线连续划线完毕、灼烧完毕、灼烧结果与讨论结果与讨论计算含菌样品中的所含活菌总数计算含菌样品中的所含活菌总数在恒温箱中培养微生物时为何要倒置？在恒温箱中培养微生物时为何要倒置？7、斜面接种、斜面接种 选择分离效果较好，认为已经纯化的单菌落，挑选一个，选择分离效果较好，认为已经纯化的单菌落，挑选一个，用接种环接种斜面。贴好标签。用接种环接种斜面。贴好标签。8、培养、培养 置置370C恒温箱中培养恒温箱中培养24h，置冰箱保藏。，置冰箱保藏。结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！12