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1、北京中医药大学马长华高效液相色谱法的建立 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实用高效液相色谱法的建立n1 绪论*9 常规样品分离n2分离的基础*10 计算机辅助方法n3检测灵敏度与选择性 11生化样品n4样品的制备 12手性分离n5色谱柱*13制备分离n6中性样品*14定量n7离子样品*15完善方法n8梯度洗脱*第一章 绪论n1-1 开始前应知道n1-1-1样品的性质n 所含化合物的数目n 化合物的结构或官能团n 化合物的分子量n 化合物的pKan 化
2、合物的uv光谱图n 化合物的浓度范围n 样品的溶解度n1-1-2分离的目的n 主要目的是定量分析？共存物（杂质）的检出？未知样品组分的确认？制备性的分离？n 是否有必要解析出样品中的所有成分？n 定量分析的准确度和精密度需要多大？n 方法的普适性？n 实验室的状况如何？1-2 建立分离方法n1-2-1 选择HPLC分离模式与起始条件n 假设为一般样品（分子量2000）n 选择HPLC分离模式(图1-3)n1-2-2开始方法建立n1-2-3改善分离n1-2-4可重现的分离n1-2-5完善方法主要HPLC方法的特性n反相HPLC流动相：水-有机溶剂(A%-B%)色谱柱：C18、C8、苯基、三甲基硅
3、烷、氰基适合的样品 能溶于水-有机混合液的大多数样品，尤其是中性或非离子性化合物的首选。主要HPLC方法的特性n离子对HPLC流动相：水-有机溶剂，控制PH的缓冲溶液和离子对试剂 色谱柱：C18、C8、氰基适合的样品 离子或可电离的化合物，尤其是碱或阳离子样品的良好选择。主要HPLC方法的特性n正相HPLC流动相：有机溶剂混合液 色谱柱：氰基、氨基、二醇基、硅胶适合的样品 当反相或离子对HPLC无效是的第二个良好选择；不溶于水-有机混合液的亲脂样品的首选；异构体混合物。1-2-2开始方法建立n首次HPLC分离较好的实验条件n色谱柱 C18、C8 5m 150.46cmn流动相 水或缓冲溶液-乙氰(80-100%)缓冲溶液 25mmol磷酸钾 2.03.0 添加剂 胺改性剂、离子对试剂（开始不用）流速 1.52.0ml/min 温度 3545 样品量 体积25L 重量 100 gn为了避免漏检样品中可能存在的化合物,建议用洗脱能力非常强的流动相,做第一次预实验,然后按照一定速度(20%)降低强溶剂的比例,如例（图1-4）所示.n当样品中存在对纯乙氰或纯甲醇强保留的组分时可以考虑用非水反相色谱NARP或者是正相色谱nHPLC方法建立的目标（表1-5）