《重医大核医学习题集及答案06体外放射分析技术.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《重医大核医学习题集及答案06体外放射分析技术.docx（18页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、第六章体外放射分析技术【学习目标】了解体外分析技术的开展和现状。掌握放射免疫分析的基本原理、基本方法 及质量控制。掌握免疫放射分析的基本原理及与放射免疫分析法的主要区别。了 解非放射免疫分析技术的几种类型，特别是时间分辨荧光免疫分析技术的基本原 理及特点。【内容要点】一、体外分析的开展和现状核医学体外分析技术主要是利用放射分析方法或其派生的相关技术在体外 进行机体内物质种类和含量的检测。主要用来测定患者血清或体液中的激素、生 物活性物质和药物浓度等。它最早是在60年代由Yalow和Berson等偶然观察到 1251标记的胰岛素与胰岛素抗体的结合与体系中存在的非标记胰岛素的量呈一定 的相关性。从
2、而建立了放射免疫分析法。放射免疫分析具有其它方法所不能比较 的特点：灵敏度高；操作简便，本钱低。免疫放射分析属于放射性非竞争结合分析，是在放射免疫分析理论的基础上, 随着单克隆抗体技术的进步，不断开展而来。非放射性标记的免疫分析从上世纪 80年代以来得到快速开展。如荧光酶免疫分析、化学发光酶免疫分析以及时间 分辩荧光免疫分析等方法。二、放射免疫分析（一）基本原理放射免疫分析的基本原理是利用放射性标记的抗原和非标记抗原同时与限 量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反响。这种竞争结合反响可用下式表示： 口 Ag+Ab*Ag-Ab+*AgAg：标记抗原;Ag：标记抗原;Ag-Ab+AgAg：非标记抗原;
3、Ab：特异性抗体;C.免疫活性D.滴度E.比活度15 .恒量RIA准确度的方法有A.回收率B.健全性实验C.交叉反响率D.质量控制样品E.抗体的亲和常数16 . RIA别离方法中，使离心后沉淀中含抗原抗体复合物的别离方法主要有A. PEG沉淀法B.吸附法C.双抗体法D.固相法E.活性炭吸附法17 .放射免疫分析体系中，基本试剂有：A.抗体B.标记抗原C.标准品D.标记抗体E.以上都是18 .免疫放射分析体系中，基本试剂有：A.抗体B.标记抗原C.标准品D.标记抗体E.以上都是五、填空题1. 放射免疫测量中对标记抗原的要求有、2. 免分析的质控指标有、3. RIA的准确度是用、来恒量。4. RI
4、A的别离方法是使与分开。5. 免疫放射分析法是标记，其中是过量的。6. RIA分析中，抗体的质量指标有、7. RIA反响中，加入PEG是使沉淀下来。8. RIA的特异性可用来表示。9. IRMA较RIA具有更佳的稳健性，因为。10. 与RIA比较，IRMA的可测对象更,工作范围更,特异性更，稳健性更O11. 在RIA别离方法中，使离心后沉淀中含抗原抗体复合物的别离方法主要有。12. 时间分辨荧光免疫分析技术用具有长荧光寿命的荧光物质作标记物, 常用的标记物是 螯合物。六、问答题1 .简述体外放射分析技术的定义及特点。2 .简述放射免疫分析法的基本原理。3 .简述RIA法中结合局部（B）和游离局
5、部（F）别离技术的种类4 .放射免疫分析方法的基本操作过程：5 .简述放射免疫分析法与免疫放射分析法在工作原理上的不同之处.第六章体外放射分析技术参考答案、名词解释1 .放射免疫分析法：放射免疫分析法属竞争性放射配体结合分析技术，其基 础是放射性标记的抗原和非标记抗原（标准抗原或被测抗原）同时与限量 的特异性抗体进行的竞争结合反响。有灵敏度高、特异性强、精密度和准 确度高以及广泛应用等特点，是疾病诊断和医学研究的重要方法。2 .免疫放射分析法：本法属非竞争性放射配体结合分析技术，它与以RIA为 代表的竞争性放射配体分析技术的主要区别有两点，其一是用放射性核素 标记抗体去测抗原，而不是像RIA法
6、那样用标记抗原去测抗原；其二是采 用过量抗体,而不是像RIA法那样采用限量抗体。IRMA法与RIA法相比较， 前者提高了检测的灵敏度，并使检测范围增宽，特异性和精确度也得到进 一步提高，故已在临床上推广应用，前景看好。3 .放射受体分析法：本法属竞争性放射配体结合分析技术之一种，其原理与 RIA法相似，所不同者是以组织受体代替RIA中的抗体作为结合剂，本法 的检测对象是配体。4 .受体放射分析法：它的检测对象是受体，可以分析组织中所含某种受体的 种类和数量。本法采用放射性核素标记的配体（如受体的激动剂或阻断剂）, 使之在饱和结合条件下与相应受体形成复合物，根据该复合物的最大放射 性及所用标记配
7、体的比活度即可推算出受体的数量。5 . （RIA的）NSB：不加特异性抗体时，标记抗原与非特异性物质的结合率， 一般要求5限10吼. RIA中的B。：标准抗原为零时标记抗原与抗体的结合率，一般要求在 30%50%。6 .抗体的亲和力：表示抗体与抗原结合的能力，亲和力高，抗原抗体易结合 和结合后不易解离。抗体的亲和力由亲和常数来表示。7 .抗体的特异性：表示抗体与抗原结合类似物不易发生交叉反响的程度，如 果抗体特异性不高，那么抗原类似物也能与抗体结合，成为干扰物质，影响 结果。抗体的特异性由交叉反响率来表示。8 .抗体的滴度：是指抗体实际应用时的稀释倍数，滴度越高，所需的抗血清 量就越少，血清的
8、稀释倍数越高，抗血清中杂质干扰也越少。但通常滴度 高到1:1000以上，血清中干扰物质影响就很小。10 . RIA的特异性：RIA的特异性由抗体的特异性决定，抗体的特异性越高，RIA 的特异性也越高。由交叉反响来表示.时间分辨荧光免疫分析法：时间分辨荧光免疫分析法是一种特殊的荧光分析 法。用具有长荧光寿命的荧光物质作荧光标记物(常用的是锢系元素钠鳌合物)， 测量时，延长荧光测量时间，使短寿命的自然本底荧光完全衰退，所得信号完全 为长寿命翎系鳌合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。另外, 对免疫反响体系加入荧光增强剂，增加荧光信号强度，有利于荧光测量。时间 分辨荧光免疫分析技术,在具
9、备免疫反响的特异性的同时，提高了灵敏性,而且， 一个试剂盒能够同时检测两种或两种以上的待测物。11 .稳定性：指RIA实验批间的重复性，常用以下指标的观测来评价：最大结合率、非特异结合率、标准曲线直线回归的参数、ED25、ED50、ED75等。12 .精密度：是指同一样品重复测定的实测值的离散程度，即复管的重复性。它 是评价随机误差的指标，通常以复管的标准差(SD)和变异系数(CV)表示。13 .灵敏度:就是RIA方法能够测定的用统计学方法能与零剂量相区别的最小量。 灵敏度主要取决于零标准管结合率的标准差。14 .准确度：准确度是指样品的测定值与真值相差的程度。常用的估计准确度的 方法有：质量
10、控制样品，回收率及健全性。15 .健全性：用以评价标准品与待测样品的免疫活性是否一致。常用平行性实验 来评价。16 .核医学体外分析技术：主要是利用放射分析方法或其派生的相关技术在体外 进行机体内物质种类和含量的分析测定。主要用来测定患者血清或其他体液样品 内的激素、其他生物活性物质和药物浓度等。17 .质量控制：就是在实际工作中利用一些客观的指标，经常对分析质量进行检 查，遇有质量异常那么及时采取对策，以保证分析误差控制在可接受范围内。放免 分析的质控包括实验室内部质控和实验室间质控两个方面。前者是实验室内对自 身的测定结果的质量进行检查和评估，后者那么由地区性或全国性机构对各实验室 的结果
11、进行比较。因放射免疫测定是一种超微量分析方法，反响环节多，影响因 素较多，容易引起误差，影响测验结果，故质量控制相当重要。18 .放射免疫分析误差：放射免疫分析误差分为系统误差和随机误差。系统误差 是因发生了某一系统变化，使整批实验样品受到影响，系统误差是可以防止的。 随机误差纯属随机现象，往往由于操作步熟练或偶然的原因引起，只对某一管或 某一局部样品的结果产生影响。二、中英文互译1. 放射免疫分析：radioimmunoassay2. 竞争性蛋白结合分析法：competitine protein binding assay3. 放射性非竞争结合分析：non-competitine radio
12、active binding assay4. 免疫放射分析：immunoradiometric assay5. 酶免疫分析技术：enzyme immuneoassay6. 化学发光免疫分析技术：chemiluminescence immunoassay7. 时间分辨荧光免疫分析技术：time-resolved fluorescence immunoassay8. 标准曲线（校准曲线）：calibration curve9. 亲和力:affinity10. 滴度：titer11. 标I己抗原：labeled antigen12. labeled antibody： 标记抗体13. Standar
13、d：标准品14. Specificity：特异性15. Precision：精密度16. Accuracy：准确度17. Perfectly：健全性18. recovery rate：回收率19. quality control：质量控制20. quality control sample：质量控制样品21. increasing amounts： 梯度浓度22. Hapten：半抗原三、单项选择题1. B2. A3.D4.B5. D6.B6.B7.B8. A9.B10. D四、单项选择题1. ABCD四、单项选择题2. ABCD3. ABC4. ABC5. AB6. ABCD7. ABCD8
14、. ABC9. ABC10. ABCD11. ABCD12. ABC13. ABCD14. ABCD15. ABD16. ABD17. ABCD18. ABC19. CD五、填空题1 .与原抗原生物活性一致、放射性核素的半衰期不能太短、比活度高、放化纯度高2 .灵敏度、精密度、准确度、特异性、稳定性.回收率、健全性实验3 .抗原抗体结合物B、游离局部F.抗体、标记抗体4 .亲和力、特异性、滴度.抗原抗体结合物5 .抗体的交叉反响率.抗体过量6 .灵敏、宽、高、好. PEG沉淀法、吸附法、双抗体法7 .锢系元素六、问答题1 .简述体外放射分析技术的定义及特点。体外放射分析技术的全称是体外放射配体
15、结合分析，是一类以放射性核素标 记的配体为示踪剂，以结合反响为基础，在体外完成的对微量生物活性物质进行 检测的技术的总称。其特点是：（1）灵敏度极高，可测到物质的最小量在毫微 克至微微克水平（1091015g） ； （2）特异性很强，被检物质与其同类物质的交 叉反响小；（3）精密度和准确度均很高；（4）应用广泛，用本技术检测体内各 种微量生物活性物质达300多种，包括激素、抗原、抗体、蛋白质、维生素和药 物等。2 .简述放射免疫分析法的基本原理。放射免疫分析中标记抗原和未标记抗原对抗体都有相同的结合能力，但是当 抗体的量有限时，这种结合就出现相互竞争，彼此抑制。在一定的反响体系中, 某种被测的
16、微量物质（Ag）与标记有放射性核素的该种物质（*Ag）竞争限量的 抗体（Ab） o Ag和*Ag与Ab的结合量决定于两者的浓度比例，即其反响遵循质 量作用定律。标记抗原的结合率将岁未标记抗原量的增加而减少，是负相关关系, 即未标记抗原抑制标记抗原与抗体相结合，反之，标记抗原也抑制未标记抗原与 抗体结合。故放射免疫分析是以竞争性结合反响为基本原理。当反响到达平衡后 *Ag与Ab结合的复合物的量（因变量）与Ag的量（自变量）之间所表现的竞争 性抑制的数量关系是本法定量检测的基础，这种数量关系可由标准竞争抑制曲线 （又称标准曲线）来表示。3 .简述RIA法中结合局部（B）和游离局部（F）别离技术的种
17、类关于RIA法中常用的B和F的别离方法有以下几种：（1）双抗体法：即采用第一抗体（一般用兔抗人某种抗原的抗体）进行竞争结 合反响，当反响到达平衡后再加入第二抗体（一般用羊抗兔Y球蛋白的抗体） 对B和F进行别离。由于第二抗体与含有第一抗体的免疫复合物（B局部）相结 合而形成第二抗体复合物，其分子量比B局部加大而容易用离心方法将该复合物 沉淀下来，到达与F局部别离的目的。（2）沉淀法：本法系采用某种非特异沉淀剂，如常用的聚乙二醇（PEG）或碱金 属中性盐（如饱和硫酸钠、硫酸镂等），这些沉淀剂具有很强的吸水作用，可使 抗原-抗体复合物的蛋白质脱水而产生沉淀，也容易用离心方法到达B与F两部 分别离的目
18、的。（3）固相法：将抗体或抗原通过特殊技术联结在固相载体上（如塑料、纤维素、 聚丙烯等）作为免疫吸附剂，免疫反响在固相载体上完成后，B即依附其上，F 溶于液体中，故二者极易别离。4 .放射免疫分析方法的基本操作过程：1）在试管内加入特异抗体（Ab）和待测样品（待测物Ag或标准抗原Ag）, 给予一定的时间使抗原抗体反响。2）入标记抗原（*Ag）,给予充分的时间使抗原抗体反响。血清样品或标准 品中的Ag能抑制*Ag与Ab的结合。3）离游离抗原（*Ag）和抗原抗体复合物（*Ag-Ab）。4)用丫计数器测定抗原抗体复合物(*Ag-Ab)的放射性B。5)用呈梯度浓度的含量的标准品制作标准曲线。用待测样品
19、的结合率从标准曲线查找或通过计算函数拟合求得待测样品的含量5 .简述放射免疫分析法与免疫放射分析法在工作原理上的不同之处.RIA1RMA竞争性抗原抗体结合反响非竞争性抗原抗体结合反响采用标记抗原采用标记抗体三种主要反响试剂二种主要反响试剂所用抗体是限量的所用抗体是过量的*AgAb的量与待测Ag的量呈负相关Ag*Ab的量与待测Ag的量呈正相关反响到达平衡慢反响到达平衡快非特异结合主要影响高剂量区非特异结合主要影响低剂量区低剂量区有不确定因素低剂量区无不确定因素Ag-Ab：抗原-抗体复合物；*Ag-Ab：标记抗原-抗体复合物*Ag -Ab的量（因变量）与Ag的量（自变量）之间存在的竞争性抑制数量关
20、 系是放射免疫分析的定量基础，这种数量关系可以由标准竞争抑制曲线（简称标 准曲线）来表示。（二）基本试剂放射免疫分析的反响中主要包括三种试剂；抗体、标记抗原、非标记标准抗 原（标准品）。除此之外，现在许多试剂盒还提供别离试剂或材料，缓冲液及质 量控制用品等。1、抗体放射免疫测定，需要选择亲和力大、特异性强、滴度高的使用。2、标记抗原要求用于标记抗原的放射性核素比活度要高，放射化学纯度 要好,还要有很好的免疫活性。主要有您I、七和组。3、标准品 对标准品要求：应与被测物属同一物质，其化学结构和免疫 活性相同； 放射化学纯度高，影响分析的杂质少；定量精确。4、别离方法 别离的目的是放射免疫反响到达
21、平衡后，使抗原抗体复合物 和游离抗原别离，两者别离后才能分别测量其放射性，理想的别离技术应具备既 安全又迅速，不受其它因素干扰，操作简便，重复性好等优点。别离方法主要有： 双抗体法、沉淀法、双抗体法+沉淀法、吸附别离法、固相别离法等。5、放射性测量仪器 如用你1做标记，常用y井型计数器对y射线进行 测量。如用3H或y做标记用液体闪烁计数器对B射线进行测量。（三）质量控制（quality control, QC）放射免疫分析的质量控制包括：实验室内部质量控制和实验室间质量控制。1、实验室内部质量控制主要指标：零标准管结合率、非特异性结合率、 最低浓度管和最高浓度管的结合率之差应大于30%、标准曲
22、线连线回归的参数、 ED25、ED50 ED75和质控图。2、试剂盒质量控制主要指标：精密度、灵敏度、准确度、特异性、稳定 性、健全性。3、实验室外质量控制三、免疫放射分析免疫放射分析是放射免疫分析的变种，是非竞争性的反响。可用下式表示:DAg+*Ab Ag*Ab+*AbAg:待测抗原*Ab：标记抗体原理是以标记抗体，用过量的标记抗体与待测抗原（或标准品）结合。 形成标记抗体-抗原复合物和剩余的标记抗体。待反响平衡后，别离出多余的游 离抗体，测上清液中的放射性，将待测抗原的结合率与标准抗原的标准曲线进行 比较，即得所测样品的含量。目前常用实验方法有抗体夹心法、标记第三抗体法、 双标记抗体法。免
23、疫放射分析具有反响速度快、灵敏度高、特异性强、稳定性好 等优点。但目前还主要限于蛋白质和多肽抗原，很多小分子半抗原和短肽还不能 应用。四、非放射免疫分析1、酶标记免疫分析典型的酶标记免疫分析是酶联免疫吸附法。2、化学发光免疫分析技术主要有：化学发光免疫分析、化学发光酶免疫 分析技术、电化学发光免疫测定。3、时间分辩荧光免疫分析TRFIA是一种特殊的荧光分析法，其原理是用 具有长荧光寿命的物质作为荧光标记物（常用的是稀土元素，即锄系元素）标记 抗原或抗体，通过测定荧光量，定性或定量分析抗原或抗体。该方法具有特异性 强、稳定性好、适用范围宽、样品用量少、自动化高、且速度快等优点。但仪器 主要靠进口
24、，试剂品种少。【习题】一、名词解释1 .放射免疫分析法2 .免疫放射分析法3 .放射受体分析法4 .受体放射分析法5 . （RIA 的）NSB6 . RIA 中的 Bo7 .抗体的亲和力8 .抗体的特异性9 .抗体的滴度10 . RIA的特异性11 .时间分辨荧光免疫分析法12 .稳定性13 .精密度14 .灵敏度15 .准确度16 .健全性17 .核医学体外分析技术18 .质量控制19 .放射免疫分析误差二、中英文互译1 .放射免疫分析2 .竞争性蛋白结合分析法3 .放射性非竞争结合分析4 .免疫放射分析5 .酶免疫分析技术6 .化学发光免疫分析技术7 .时间分辨荧光免疫分析技术8 .标准曲
25、线（校准曲线）9 .亲和力10 .滴度11 .标记抗原12 . labeled antibody13 . Standard14 . Specificity15 . Precision16 . Accuracy17 . Perfectly18 . recovery rate19 . quality control20 . quality control sample21 . increasing amounts22 . Hapten三、单项选择题1 .在放射免疫分析用试剂中，最常用于标记抗原放射性核素是13,1A. 1251C 99lllrpD. 3H32P2 .放射免疫分析法中，所用的标记抗原
26、的放化纯度应大于90%A. 80%70%B. 60%50%3 .放射免疫分析法的基本原理是A.放射标记抗原与过量的特异抗体进行结合反响B.放射标记抗原与限量的特异抗体进行结合反响C.放射标记抗原与限量的特异抗体进行竞争结合反响D.放射标记抗原和非标记抗原与限量的特异抗体进行竞争结合反响E.放射标记抗原和非标记抗原与过量的特异抗体进行竞争结合反响4 . 一般用变异系数（CV值）作指标对放射免疫分析试剂盒进行质量评价, 要求将批间CV值控制在以下范围1%5%A. 5% 10%10%15%B. 15%20%20%25%5 .用回收率来代表体外放射分析技术的准确度，一般对回收率的质控要求是将回收率控制
27、在以下范围A. 90%95%90% 100%B. 90%105%90%110%C. 90%115%6 .放射免疫分析A.是非竞争性体外放射分析技术的代表B.是竞争性体外放射分析技术的代表C.是体外放射分析技术的代表D.以上三者都是E.以上三者都不是7 .放射免疫分析标准品A.与待测样品不一定具有相等免疫活性和亲和能力B.与待测样品有相等免疫活性和亲和能力C.与待测样品无相等免疫活性和亲和能力D.与待测样品有相等免疫活性和无相等亲和能力E.与待测样品无相等免疫活性和有相等亲和能力8 .免疫放射分析A.是非竞争性体外放射分析技术的代表B.是竞争性体外放射分析技术的代表C.是体外放射分析技术的代表D
28、.以上三者都是E.以上三者都不是9 . RIA的特异性可用什么来表示。A.抗原的免疫活性B.抗体的交叉反响率C.抗体的亲和力D.抗体的滴度E.抗体的分子量10.免疫放射分析法的基本原理是A.放射标记抗原与过量的特异抗体进行结合反响B.放射标记抗原与限量的特异抗体进行结合反响C.抗原与限量的特异抗体进行结合反响D.抗原与过量的特异标记抗体进行结合反响E.放射标记抗原和非标记抗原与限量的特异抗体进行竞争结合反响 四、多项选择题1 .对放射免疫分析标准曲线的质量控制指标有以下要求A.最高结合率(B%)要求在30%50%B.非特异结合率(NSB%)要求小于5% 10%C.标准曲线的相关系数(y值)要求
29、大于0.99D.标准曲线的以下参数要求保持稳定：截距a,斜率b, ED50E.以上都不是2 .竞争放射分析技术包括多种方法，它们具有以下几个共同特点A.都能对生物活性物质进行超微量(10一9克ICTs克)定量分析B.特异性强，与同类待测物质交叉反响小C.灵敏度高，标本用量少，0. 1毫升血清标本足够用D.检测范围比免疫放射分析法宽E.以上都是3 .免疫放射分析法是典型的非竞争性体外放射分析的代表，在反响体系中 加入以下物质A.过量的抗体B.待测物(或标准品)C.放射标记抗体D.限量的抗体E.放射标记抗原4 .以抗原与抗体间的免疫反响为基础的分析技术有A.放射免疫分析法(Radio immuno
30、assay, RIA)B.免疫放射分析法(Immunoradiometric assay, IRMA)C.放射受体分析法(Radio releptor assay, RRA)D.放射酶分析法(Radio enzyme assay, REA)E.化学发光免疫分析法(Chemiluminescence immunoassay, CLIA)5 .放射免疫分析用标准品A.与待测样品属于同一物质B.与待测样品有相等免疫活性和亲合能力C.高纯度，不含有任何可以影响分析的物质D.精确定量，一般选用经数次提纯的抗原中免疫活性最高的来定量E.比活度和放化纯度足够高6 .用您I和3H来进行标记，要求标记物A.标记
31、物用量应低于或等于被测物的最小量，定量范围一般在10.910小 克水平B.标记物要有较高的比活度C.标记物的放射化学纯度在95%以上D.保证抗原抗体结合的免疫活性在标记过程中不被破坏E.对标记物注意保存过程中发生的变化，如：辐射自分解等7 .对特异性抗体的要求A.要有较高的滴度8 .在较长时间使用同一批抗体，可减少批间误差C.稀释倍数加大可提高精确度D.稀释倍数减少，可减少批间误差E.要有较高的亲和力和特异性8.免疫放射分析法是典型的非竞争性体外放射分析的代表，以标记抗体作 为示踪剂在反响体系中加入A.过量的抗体8 .用标记抗体作示踪剂C.加宽检测范围D.用标记抗原作示踪剂E.限量的抗体9 .
32、以抗原与抗体间的免疫反响为基础的分析技术有A.放射免疫分析法B.免疫放射分析法C.化学发光免疫分析法D.时间分辨荧光免疫分析法E.酶标记免疫分析技术10.常用的质量控制指标中，零标准管结合率（B。%）的影响因素为A. 一抗效价降低或失活B.标记的放射性核素脱落C.缓冲液浓度及pH值不适D.温育时间不合适E.温育温度不合适11 .体外放射免疫分析技术基本类型有A.以配体与受体间的结合反响为基础的分析技术B.以酶与底物间的酶促反响为基础的分析技术C.免疫放射分析法D.竞争性蛋白结合分析E.以上都不是12 .体外放射免疫分析基本步骤有A.加样B.温育反响C.结合物与游离物别离D.放射性测量E.数据处理13.在放射免疫测量中对标记抗原的要求有A.与原抗原生物活性一致B.放射性核素的半衰期不能太短C.比活度足够高D.放化纯度足够高E.高亲和力、高特异性、高滴度14. RIA分析中，抗体的质量指标有A.亲和力B.特异性