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1、常见的酶类药物及治疗作用常见酶类药物1 1、L-L-天门冬酰胺酶工艺路线天门冬酰胺酶工艺路线L-天门冬酰胺酶工艺说明天门冬酰胺酶工艺说明 菌种培养菌种培养 大肠杆菌大肠杆菌37培养培养24h普通牛肉培养普通牛肉培养基基;种子培养种子培养 16玉米浆,接种量玉米浆,接种量 1 1.5,37,通气搅拌培养,通气搅拌培养 48h;发酵罐培养发酵罐培养 玉米浆培养基,接种量玉米浆培养基,接种量 8,37通气搅拌培养通气搅拌培养 6 8h,离心分离发酵液,得菌体,离心分离发酵液,得菌体,加加2倍量丙酮搅拌,压滤,滤饼过筛,自然风干成倍量丙酮搅拌,压滤,滤饼过筛,自然风干成菌体干粉菌体干粉;提取、沉淀、热
2、处理每千克菌体干粉加入提取、沉淀、热处理每千克菌体干粉加入0.01 mol/LpH8的硼酸缓冲液的硼酸缓冲液10L37h,308mol/L醋酸调节,压滤,滤液加入醋酸调节,压滤,滤液加入2倍体倍体积的丙酮,放置积的丙酮,放置34h过滤,收集沉淀,自然过滤,收集沉淀,自然风干,得干粗酶。风干,得干粗酶。取粗制酶,加入取粗制酶,加入03甘氨酸,调节甘氨酸,调节h离心,上清离心,上清液液6030minmol/L,pH8磷酸缓冲液溶解,磷酸缓冲液溶解,离心得上清酶溶液。离心得上清酶溶液。精制、冻干精制、冻干 调节离心弃去沉淀,清液再调节离心弃去沉淀,清液再调调 加入加入50聚乙二醇,浓度达到聚乙二醇,
3、浓度达到 16。2 5放置放置 4 5天,离心得沉淀。蒸馏水天,离心得沉淀。蒸馏水溶解加溶解加 4倍量的丙酮沉淀,同法反复倍量的丙酮沉淀,同法反复 1次,次,磷酸缓冲液溶解,磷酸缓冲液溶解,50聚乙二醇处理聚乙二醇处理 1次,次,即得无热原的即得无热原的 Lmol/L磷酸缓冲液,在无菌磷酸缓冲液,在无菌条件下用条件下用 6号垂熔漏斗过滤,分装,冷冻干号垂熔漏斗过滤,分装,冷冻干燥制得注射用燥制得注射用 L一天门冬酸胺酶成品,每一天门冬酸胺酶成品,每I支支 1万或万或 2万单位。万单位。二、细胞色素二、细胞色素C生产工艺生产工艺临床上主要用于组织缺氧的急救和辅助治疗药物,临床上主要用于组织缺氧的
4、急救和辅助治疗药物,适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切症状。症状。工艺过程绞碎、提取、压滤绞碎、提取、压滤 取新鲜或冷冻猪心,去血块、脂肪和肌健等,绞肉机取新鲜或冷冻猪心,去血块、脂肪和肌健等,绞肉机中绞碎。称取心肌碎肉,加中绞碎。称取心肌碎肉,加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀,倍量蒸馏水搅拌均匀,用硫酸调用硫酸调pH4左右,常温搅拌提取压滤,滤液用氨水调左右,常温搅拌提取压滤,滤液用氨水调节节pH6.2,离心得提取液。心渣再加等量蒸馏水同上法离心得提取液。心渣再加等量蒸馏水同上法重复提取重复提取1次,合并两次提取液。次,合并两次提取液。中和、吸
5、附、洗脱中和、吸附、洗脱提取液加氨水中和至提取液加氨水中和至pH7.5,在冰箱中静止沉淀杂蛋白,在冰箱中静止沉淀杂蛋白,吸取上层清液,每升提取液加入吸取上层清液,每升提取液加入10g人造沸石,搅拌吸人造沸石,搅拌吸附附40min,静置倾去上层清液。收集吸附细胞色素静置倾去上层清液。收集吸附细胞色素 C的的人造沸石,用蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤,然后装人造沸石,用蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤,然后装柱,用柱,用 25硫酸氨溶液洗脱,得洗脱液。硫酸氨溶液洗脱,得洗脱液。盐析、浓缩、透析盐析、浓缩、透析 洗脱液加入固体硫洗脱液加入固体硫酸镀达到酸镀达到 45饱和度,使杂蛋白析出,饱和度,使杂蛋白析出,
6、过滤。收集透明滤液,缓缓加入过滤。收集透明滤液,缓缓加入 20三氯醋酸,边加边搅拌使细胞色素三氯醋酸,边加边搅拌使细胞色素 C沉淀析出,离心收集沉淀。再将沉淀沉淀析出,离心收集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水,装入透析袋中,透析至溶于蒸馏水,装入透析袋中,透析至无硫酸根为止,过滤得细胞色素无硫酸根为止,过滤得细胞色素C粗品粗品溶液。溶液。吸附、洗脱、透析吸附、洗脱、透析粗品溶液通过处理好的粗品溶液通过处理好的 Amberite IRC50(NH4)树树脂柱吸附,然后将树脂移入大烧杯中,水洗至澄清为止,脂柱吸附,然后将树脂移入大烧杯中,水洗至澄清为止,再分别上柱,用再分别上柱,用06mol/Lmol/L氯化钠混合液洗脱,洗氯化钠混合液洗脱,洗脱液用蒸馏水透析去氯离子,得细胞色素脱液用蒸馏水透析去氯离子,得细胞色素C精品溶液。精品溶液。制剂制剂g的细胞色素的细胞色素C精品液,加精品液,加200mgg混合均匀,用氢氧化混合均匀,用氢氧化钠调节左右,加注射用水钠调节左右,加注射用水100ml,过滤除热原,过滤除热原,6号垂号垂溶漏斗过滤,测含量,灌注,冷冻干燥,即得每支含溶漏斗过滤,测含量,灌注,冷冻干燥,即得每支含15mg细胞色素细胞色素C的制剂。的制剂。