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1、琼琼 脂脂 糖糖 凝凝 胶胶 电电 泳泳一一 实验目的实验目的学习琼脂糖凝胶电泳分离学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法的原理和方法检测水稻总检测水稻总DNA的纯度与分子量的纯度与分子量检测检测PCR的结果的结果二二 实验原理实验原理电泳是分离和纯化电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术片段的最常用技术琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45 开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度决定于琼脂糖的浓度DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用
2、下向正极泳动下向正极泳动二二 实验原理实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带琼脂糖凝胶电泳法分离琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应，是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系迁移速度与分子量的对数值成反比关系可依据可依据DNA分子的大小使其分离分子的大小使其分离DNA分子在电泳条件下的迁移演示分子在电泳条件下的迁移演示.exeGoodview可与可与DNA分
3、子形成复合物，发射的荧分子形成复合物，发射的荧光强度较游离的光强度较游离的Goodview强度大强度大10倍以上，且倍以上，且荧光强度与荧光强度与DAN含量成正比含量成正比示踪染料和分子量标准参照物示踪染料和分子量标准参照物二二 实验原理实验原理M 1 2 3 4PCR产物的产物的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳三三 实验材料、用具及试剂实验材料、用具及试剂提取的水稻总提取的水稻总DNA和和PCR产物产物电泳仪，电泳槽，电子水平，移液器，枪头，三角电泳仪，电泳槽，电子水平，移液器，枪头，三角瓶、点样板，微波炉等瓶、点样板，微波炉等琼脂糖，琼脂糖，TAE电泳缓冲液，电泳缓冲液，Goodview，载样
4、，载样缓冲缓冲液（液（Loading buffer）四、实验步骤四、实验步骤1 制胶制胶：琼脂糖琼脂糖 三角瓶三角瓶(1/3)煮胶煮胶 溶解，冷却溶解，冷却至至60(不烫手不烫手)，加，加Goodview，倒板，倒板(4-6mm)，室温下充分凝固，竖直拔下梳子室温下充分凝固，竖直拔下梳子 2 点样点样：5l水稻总水稻总DNA+12 loading buffer=7l PCR产物产物+3l loading buffer，混匀，吸取，混匀，吸取10l 10l Mark DNA(DNA-Hind)3 电泳电泳：电压电压3-5V/cm，约，约80-90V，注意电极方向，注意电极方向4 观察观察：紫外透
5、射分析仪下观察，时间不要太久紫外透射分析仪下观察，时间不要太久四、实验步骤四、实验步骤五五 注意事项注意事项1 倒胶时把握好胶的温度，不要高于倒胶时把握好胶的温度，不要高于60，否则温度，否则温度太高会使制板变形太高会使制板变形2 胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏点样孔不要弄坏点样孔3 点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不要太多要太多4 Goodview有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，胶勿乱扔胶勿乱扔5 紫外线照射不要太久紫外线照射不要太久六六 作业作业画出画出电泳图，分析观察到的结果电泳图，分析观察到的结果