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1、血涂片及骨髓片的制血涂片及骨髓片的制备及瑞氏染色备及瑞氏染色一、目的一、目的n n掌握血涂片、骨髓涂片的制作及染色技术。鉴别外周血中各种白细胞的形态特点及分类计数方法。二、原理二、原理n n瑞氏染液是由伊红美兰所组成的复合物，经物理吸附及化学作用对细胞进行染色。三、材料三、材料n n血针、玻片、酒精棉光学显微镜、香柏油、二甲苯、一次性采血针 四、方法四、方法n n 血涂片的制作血涂片的制作n n 采血：每组两个同学，练习耳垂采血（包括消采血：每组两个同学，练习耳垂采血（包括消毒、扎针、挤压、取血），用推片取血液一滴，毒、扎针、挤压、取血），用推片取血液一滴，于玻片右端，从其右侧接触血液，使之成
2、于玻片右端，从其右侧接触血液，使之成4040度角，度角，均匀平稳地向左侧推进，至血滴推尽为止，其均匀平稳地向左侧推进，至血滴推尽为止，其厚度要适中，且有头体尾之分。厚度要适中，且有头体尾之分。n n 待血片干后，滴加瑞氏染液数滴（盖住血膜），待血片干后，滴加瑞氏染液数滴（盖住血膜），静置静置40 40 秒，加缓冲液等量混匀，染秒，加缓冲液等量混匀，染10201020分钟，分钟，用水冲洗，干燥后镜检。用水冲洗，干燥后镜检。n n 镜检计数：在血膜头尾交界处，计数镜检计数：在血膜头尾交界处，计数100100个白个白细胞，并对其进行分类。细胞，并对其进行分类。骨髓片的制备骨髓片的制备 n n 将临床
3、医生所取骨髓至玻片高端（在准备涂片将临床医生所取骨髓至玻片高端（在准备涂片时，将两玻片倾斜放置），使过多血液流下。时，将两玻片倾斜放置），使过多血液流下。n n 蘸取骨髓适量（选择骨髓小粒部分），以蘸取骨髓适量（选择骨髓小粒部分），以30453045度角，用力推开，速度适宜。然后将玻片于度角，用力推开，速度适宜。然后将玻片于空中挥动，使之干燥，以免细胞缩小或细胞皱缩。空中挥动，使之干燥，以免细胞缩小或细胞皱缩。n n 骨髓片制备好后，用标记笔在膜的头部注明病骨髓片制备好后，用标记笔在膜的头部注明病人的姓名、取材部位及穿刺部位。人的姓名、取材部位及穿刺部位。五、结果五、结果n n杆状核粒细胞杆状
4、核粒细胞(Stab Granulocyte)n n细胞呈圆形，直径1015um。n n胞核狭长，弯曲呈带状，两端钝圆。核染色质粗糙呈块状，染深紫红色。n n胞质中含特异性颗粒的不同，也可分为中性、嗜酸性、嗜碱性杆状核粒细胞三种，颗粒特点同中幼粒细胞。n n中性分叶核细胞中性分叶核细胞n n细胞呈圆形，直径1015um。n n胞核常分为25叶，以分3叶者多见，叶与叶之间有细丝状相连或完全断开，核染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。n n胞质丰富，呈淡红色，布满细小紫红色的中性颗粒。n n嗜酸粒细胞嗜酸粒细胞n n嗜酸粒细胞胞体直径1116um，n n胞核多分为近似对称的两叶。n n胞质中充密集粗大
5、、大小均匀的桔红色嗜酸性颗粒。n n嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞n n嗜碱性粒细胞胞体直径10-12umn n胞核分叶不明显，或融合呈堆集状。n n胞质中有稀疏的大小不一、分布不均、呈紫黑色的嗜碱性颗粒，颗粒常掩盖在核上，致使核的轮廓和结构模糊不清。n n大淋巴细胞大淋巴细胞n n呈圆形，直径13-18um。n n胞核圆形或椭圆形，偏于一侧或着边。染色质常质密呈块状，排列均匀，深染呈深紫红色。n n胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而稀疏的嗜天青颗粒。小淋巴细胞小淋巴细胞呈圆形或椭圆形，直径6-10um胞核圆形或椭圆形，或有切迹，核着边，染色质粗糙致密，呈大块状，染深紫红色。胞质量极少，仅在核的一
6、侧见到少量淡蓝色胞质，有时几乎不见而似裸核，一般无颗粒。单核细胞(Monocyte)圆形或不规则形，直径12-20um，边缘常见伪足突出。胞核形状不规则，常呈肾形、马蹄形、笔架形、“S”形等，并有明显扭曲折叠。染色质疏松细致，呈淡紫红色丝网状。胞质丰富，呈淡灰蓝色或淡粉红色，可见多数细小、分布均匀、细尘样淡紫红色颗粒。血血 小小 板板 直径直径2-5um，约为成熟红细胞的，约为成熟红细胞的1/4-3/4，类圆形，星形与不规则形，淡红色，无核。，类圆形，星形与不规则形，淡红色，无核。成熟红细胞成熟红细胞 正常形态呈双凹盘形，直径，瑞氏染色为红色正常形态呈双凹盘形，直径，瑞氏染色为红色中心稍淡染中心稍淡染