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1、实验一血涂片的制作及免疫细胞的形态观察 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望一、实验目的一、实验目的 学习掌握血涂片制备和染色方法学习掌握血涂片制备和染色方法;比较观察各种免疫细胞的形态。比较观察各种免疫细胞的形态。二、实验原理二、实验原理 血涂片是血液学研究中的最基本技术。将血血涂片是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本。为观察细胞内部液样品制成单层细胞的涂片标本。为观察细胞内部结构，识别各种细胞，血涂片必须进行染色。血涂结构，识
2、别各种细胞，血涂片必须进行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏（片的各种染色方法大多是罗氏（WrightWright）染色法衍）染色法衍变来的。目前常用瑞特氏染色法。变来的。目前常用瑞特氏染色法。瑞氏染料是由瑞氏染料是由酸性染料伊红酸性染料伊红和和碱性染料亚甲蓝碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。细胞的染色既有组成有复合染料。细胞的染色既有物理的吸附物理的吸附作用，作用，又有又有化学的亲和作用化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。各种染料的亲和力也不一样。因此，经瑞氏染液染色后，不同免疫细胞中的因此，经瑞氏染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以
3、呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色颜色、大小及多少大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。就可以将免疫细胞进行分类计数。三、实验用品三、实验用品l实验材料：实验材料：酒精棉球、载玻片、眼科镊、眼科剪等。酒精棉球、载玻片、眼科镊、眼科剪等。l试剂：试剂：瑞氏（瑞氏（WrightWright）染液。）染液。四、实验步骤四、实验步骤.准备洁净玻片两张，一张用于推片，另一张用于准备洁净玻片两张，一张用于推片，另一张用于固定标本。固定标本。.剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血，迅速在玻片剪断小鼠尾巴取
4、血或小鼠眼球取血，迅速在玻片上涂血膜制备血涂片，自然干燥。上涂血膜制备血涂片，自然干燥。涂片涂片 将一滴血置于载玻片的一端，再取另一张将一滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以开成线状，两玻片的角度以30-4030-40度为宜（角度度为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（如图），推玻片向前推进，即涂成血液薄膜（如图），推进时速度要一致，否
5、则血膜成波浪形，厚薄不进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀。匀。3 3瑞氏瑞氏染色染色l待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴瑞氏染液待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴瑞氏染液盖满血膜为止，染色盖满血膜为止，染色1min1min。l染染1 1分分钟钟后后，再再加加等等量量的的缓缓冲冲液液或或蒸蒸馏馏水水于于染染色色液上，吹匀液上，吹匀,浸染约浸染约8-108-10分钟。分钟。l用用蒸蒸馏馏水水迅迅速速冲冲洗洗。待待自自然然干干燥燥后后或或用用吸吸水水纸纸吸吸干干,即可置血涂片于显微镜下进行镜检即可置血涂片于显微镜下进行镜检l脱色：用20%盐酸甲醇脱色，肉眼观察玻片呈粉红色为宜，显微镜下观察结
6、果。（省略）4 4观察观察分别用低倍、高倍镜观察血涂片，分辨不同的分别用低倍、高倍镜观察血涂片，分辨不同的血细胞类型。血细胞类型。淋巴细胞淋巴细胞 颗粒细胞（嗜酸性、嗜碱性、嗜中性）颗粒细胞（嗜酸性、嗜碱性、嗜中性）单核细胞单核细胞 红细胞与血小板红细胞与血小板五、实验结果五、实验结果绘图并比较几种免疫细胞的形态特征。绘图并比较几种免疫细胞的形态特征。红细胞血小板未成熟中性粒细胞大淋巴细胞成熟的中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞单核细胞血涂片血红蛋白、嗜酸性颗粒血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质与酸性染料伊红结合染为碱性蛋白质与酸性染料伊红结合染粉红色粉红色称为称为酸性酸性物质；物质；细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合与碱性染料美蓝或天青结合,染染蓝色蓝色或紫色称为或紫色称为嗜碱嗜碱性物质；性物质；中性颗粒成等电状态与伊红和中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝美蓝均可结合均可结合,染染紫红色紫红色称中性物质称中性物质neutrophils lymphocytes monocytes Basophils,eosinophil