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1、血清成分分析第1页，本讲稿共20页血清胆固醇的定量测定血清清蛋白与-球蛋白的分离与鉴定血清谷丙转氨酶活性的鉴定及活力测定第2页，本讲稿共20页血清胆固醇的定量测定（邻苯二甲醛法）胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生的紫红色物质对550nm波长的光有最大吸收。100ml样品中胆固醇含量在400mg之内与吸光度呈良好线性关系。第3页，本讲稿共20页 实验数据编号01 234吸光度值00.1770.4050.6040.745对照家鸡血清对照乌鸡血清吸光度值00.03700.053第4页，本讲稿共20页第5页，本讲稿共20页实验结果 标准曲线：y=0.0019x 家鸡的血清总胆固醇含量：19
2、.47mg/100ml 乌鸡的血清总胆固醇含量：27.89mg/ml 查资料得：鸡的血清胆固醇含量在51196mg/100ml之间是在可信范围。第6页，本讲稿共20页分析与讨论 实验所得的数据偏低，可能的原因：1.试管未干燥，沾有较多的水分，使得标准胆固醇应用液被稀释，浓度偏低。2.此次所用的血清本身胆固醇含量比一般的个体偏低。3.取血清的过程中，有些残留在试管壁上。第7页，本讲稿共20页血清清蛋白与-球蛋白的盐析、透析与浓缩 上清液（主要是清蛋白 ）离心 血清离心 取沉淀 沉淀（主要是-球蛋白）离心取 沉淀 将得到的样品装入透析袋中，置于烧杯中，用流水冲刷一小时。第8页，本讲稿共20页血清清
3、蛋白与-球蛋白的鉴定（醋酸纤维素薄膜电泳法）醋酸纤维素薄膜是用二乙酸纤维素制成的，它具有均一的泡沫样的结构，厚度仅为120m，有强渗透性，对分子移动无阻力。浸泡点样电泳染色漂洗第9页，本讲稿共20页实验结果（家鸡血清电泳图谱）第10页，本讲稿共20页分析与讨论 查资料得：电泳图谱中，清蛋白与点样线的距离比球蛋白远。1.条带的颜色较深，是因为漂洗不够彻底。2.全血清条带有多条重叠，是因为血清中有多种蛋白。3.血清清蛋白条带出现两条线，可能是因为盐析时，球蛋白中掺有其它蛋白。第11页，本讲稿共20页谷丙转氨酶活性的鉴定 观察肝脏中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产
4、物丙氨酸的生成。第12页，本讲稿共20页实验结果（家鸡肝脏）第13页，本讲稿共20页分析与讨论 酶液处有两个条带，离圆心较近的为谷氨酸，较远的为丙氨酸，而且与另一端的谷氨酸相比，量较少。煮沸的酶液只有一个条带，是因为谷丙转氨酶已失活，无法将谷氨酸转换为丙氨酸。条带附近还是有浅色的痕迹，可能是因为点样时，不小心碰到了别处。第14页，本讲稿共20页血清谷丙转氨酶活力单位测定 本实验用丙氨酸和-酮戊二酸为底物，经转氨作用生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物质碱性条件下呈棕红色，其颜色的深浅与丙酮酸的含量成正比，可用比色法进行定量测定。通过与标准溶液的比较，即可计算出酶的活力单位数。第15页，本讲稿共20页实验数据012345吸光度值00.4250.6510.6220.7170.866家鸡对照管乌鸡对照管吸光度值0.01900.0300第16页，本讲稿共20页第17页，本讲稿共20页实验结果 标准曲线：y=0.0019x 家鸡的GPT活力单位数：10 乌鸡的GPT活力单位数：30 第18页，本讲稿共20页分析与讨论 查资料知道实验所得的数据偏低，可能的原因：1.试管未干燥，导致待测液浓度降低。2.静置前，未将待测液充分摇匀，导致待测 液浓度分布不均。3.可能保温时间不够，导致反应不够充分。第19页，本讲稿共20页第20页，本讲稿共20页