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1、课题. DNA重组技术的基本工具一、学习目标1简述基因工程的概念。2简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。3运用所学DNA重组技术的知识模拟制作重组DNA模型二、重点难点1重点DNA重组技术所需三种基本工具的作用。2难点基因工程载体需要具备的条件。三、学习过程（一）基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程 拼接 结果思考：基因工程是否改变了基因？ （二）DNA重组技术的基本工具1“分子手术刀”限制酶思考：什么是限制酶？从哪里可以获得限制酶？这种酶有什么作用特点呢？小组活动：动手找出纸条中的GAATTC序列，并在G和A之间切开。思考：在切割DNA分子时，限制酶切割几个磷酸
2、二酯键，为什么？小组活动：已知Sma限制酶识别的DNA序列是CCCGGG，切割位点在G和C之间；限制酶的识别序列和切点是GGATCC，限制酶的识别序列和切点是GATC，请你在手中的纸条上分别找出并进行切割。思考：切割后的DNA末端有 和 。要获得相同的黏性末端，一定要使用同一种限制酶切割吗？2.“分子缝合针”DNA连接酶阅读教材回答：连接黏性末端和平末端所用DNA连接酶有什么不同呢？连接酶怎样实现连接的？小组活动：利用胶带、剪刀动手模拟制作重组分子思考：将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR酶切，酶切产物用DNA连接酶连接后，由两个DNA片段之间连接形成的产物有 、 和 三种。3. “分子
3、运输车”基因进入受体细胞的载体最常见的载体质粒需具备以下条件：（1）有多个 ，以供 插入。（2）有 基因，以供重组DNA的 。（3）有 能力。注意：天然质粒 直接做基因工程的载体，必须经过 。（四）自主练习1下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步需用到的工具是 （ ）ADNA连接酶和解旋酶 BDNA聚合酶和限制性核酸内切酶C限制性核酸内切酶和DNA连接酶 DDNA聚合酶和RNA聚合酶2依右图有关基因工程的工具酶功能的叙述，不正确的是 （ ） A.切断a处的酶为限制性核酸内切酶 B.连接a处的酶为DNA连接酶C.切断b处的酶为解旋酶 D.切断b处的酶为限制性核酸内切酶3 DNA连接酶的
4、作用是 （ ） A. 使质粒和目的基因的黏性末端之间形成氢键 B. 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 C. 使重组DNA与宿主DNA相连 D. 使单个的脱氧核苷酸连接形成一条链4 下列有关质粒的叙述，正确的是 （ ） A质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNA分子 C质粒只有在侵入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制 D细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的5以下说法正确的是 （ ） A所有的限制酶都只能识别同一种核苷酸序列 B质粒是基因工程中唯一的载体 C运载体必须具备的条件之一是具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 DDN
5、A连接酶与DNA聚合酶都是连接磷酸二酯键的，所以它们的作用是相同的6科学家常选用的细菌质粒往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是 ( )A提高受体细胞在自然环境中的耐热性 B有利于检测目的基因否导入受体细胞C增加质粒分子的相对分子质量 D便于与外源基因连接成DNA的过程。7限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：(1) CTGCA (2) AC (3) GC G TG CG(4) G (5) G (6) GC CTTAA ACGTC CG (7) GT (8) AATTC CA G请用DNA连接酶将它们连接起来:_和_能连接成_;_和_能连接成_;_和_能连接成_;_和_能连接成_。8限制性内切酶的识别序列和切点是GGATCC，限制性内切酶的识别序列和切点是GATC。在质粒上有酶的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶的切点。（1）请画出质粒被限制酶切割后所形成的黏性末端。（2）请画出目的基因两侧被限制酶切割后所形成的黏性末端。（3）在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？