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1、实验六植物可溶性糖测定第1页，本讲稿共11页一、实验目的 w学习可溶性糖测定的蒽酮比色法第2页，本讲稿共11页二、实验原理二、实验原理w植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。第3页，本讲稿共11页三、仪器药品 721型分光光度计 分析天平 研钵 恒
2、温水浴锅 烧杯 刻度试管 大试管 活性炭 移液管 漏斗 酒精（80%）第4页，本讲稿共11页葡萄糖标准溶液：称取已在80烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200g的标准溶液。蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓 硫 酸（比 重 1.84）稀 释 成1000mL而成。第5页，本讲稿共11页四、操作步骤四、操作步骤1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的
3、刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。第6页，本讲稿共11页2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。第7页，本讲稿共11页3.绘制标准曲线 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80g
4、。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。第8页，本讲稿共11页 试剂（ml)管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度（ul/ml)0 10 20 40 60 80 第9页，本讲稿共11页4.计算样品中含糖量设V为植物样品稀释后的体积（m L）C为提取液的含糖量(g/m L)W为植物组织鲜重(g)则得计算式如下：可溶性糖含量可溶性糖含量(C(CV)/(WV)/(W10106 6)100%100%第10页，本讲稿共11页注意事项w蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心w离心时要平衡w在蒽酮反应前稀释样品10-20倍 返回第11页，本讲稿共11页