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1、实验2植物组织可溶性糖含量测定,蒽酮法测定P103-104,糖是光合作用的产物，与植物产品的品质密切相关；植物为了适应逆境条件，如干旱、低温，也会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化。糖类的种类繁多，其性质各不相同，因而测定方法也不同。蒽酮比色法测定可溶性糖苯酚法测定可溶性糖3.5-二硝基水杨酸法测定还原糖斐林试剂比色法测定还原糖,实验目的,熟悉可溶性总糖的测定方法,实验原理,糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛。,糠醛,羟甲基糠醛,戊糖,己糖,实验原理,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内,颜色深浅与糖含量成正比，故可
2、用于糖的定量。,羟甲基糠醛,蒽酮,糠醛衍生物（绿色）,糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为625nm，故在此波长下进行比色葸酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，必须在反应后立即在同一时间内比色。,该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，包括：戊糖、已糖、寡糖类、多糖（淀粉、纤维素），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总糖，有特殊的应用价值。,特别注意,样品中未溶解的残渣，如细胞壁中的纤维素、半纤维素也能被浓硫酸降解，而与蒽酮试剂发生反应，增加测定误差。不同糖类与蒽酮试剂的显色程度不
3、同，次序为：果糖葡萄糖半乳糖甘露糖戊糖，所以不同材料会因不同糖类的比例不同而产生误差，但如是单一糖类，则误差可以避免。,器材与试剂,1.实验仪器：分光光度计，恒温水浴，分析天平，烘箱，刻度试管，漏斗2.实验试剂：活性炭，乙醇，葡萄糖标准液，葸酮试剂（0.1%浓度，分析纯蒽酮1g，溶解于1000mL稀硫酸760mL相对密度为1.84的浓硫酸用dH2O稀释成1000mL）3.实验材料：植物叶片,实验步骤,1标准曲线的制作,3显色测定：,2可溶性糖的提取：,过滤，得滤液进行测定,0.3g甘蓝叶,研磨成匀浆,dH2O冲洗转入三角瓶,加dH2O80mL左右,冷却后滴加几滴醋酸铅,转入100mL容量瓶并定
4、容,过滤于装有0.3g草酸钠的三角瓶,滤液1mL,加5mL蒽酮试剂,充分混匀,沸水浴中反应10分钟,取出，立即用水冷却至室温,625nm波长下比色测定,70-80水浴30min,4.对照管：dH2O1mL，加5mL蒽酮试剂，充分混匀，沸水浴中反应10分钟，取出，立即用水冷却至室温。5计算可溶性糖的含量(gmL-1)：依回归方程计算样品叶的糖浓度A=0.0061C+0.0048,C回归方程求得糖量(gmL-1)；V提取液量(100ml)；W组织重量（g）。,可溶性糖含量（%）=,注意事项：,1.充分研磨、水浴提取2.反应后要迅速冷却，操作一定要注意控制时间尽可能一致3.反应混合液一定要混合均匀，反应温度一定要注意控制在1004.蒽酮试剂要注意避光保存。配置好的蒽酮试剂也应注意避光，当天配制好的当天使用。5.试管要保证干燥清洁，无残留水滴。6.比色测定要操作规范。,作业,1.测定并计算实验材料的可溶性糖含量。2.分析影响实验结果的因素,并结合实验进行讨论。3、应用葸酮法测得的糖包括那些类型？4、你知道还有哪些方法可以测定糖类？,