实验五微生物计数法精品文稿.ppt

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1、实验五微生物计数法第1页,本讲稿共16页目的要求目的要求n了解血球计数板的构造、计数原理和计了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法,掌握显微镜下直接计数的技能。数方法,掌握显微镜下直接计数的技能。第2页,本讲稿共16页实验材料实验材料活材料:活材料:酿酒酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae)培养液。)培养液。其他器材:其他器材:显微镜、显微镜、血球计数板血球计数板、盖玻片、吸水纸、盖玻片、吸水纸、计计数器数器、滴管、擦镜纸。、滴管、擦镜纸。第3页,本讲稿共16页v显微镜直接计数法显微镜直接计数法是将小量待测样品的是将

2、小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上,于显微镜下直接计数容积的载玻片上,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。的一种简便、快速、直观的方法。直接计数法优缺点直接计数法优缺点v优点:直观、快速、操作简单。优点:直观、快速、操作简单。v缺点:缺点:不能区分死菌与活菌,所得为总数;不能区分死菌与活菌,所得为总数;不适于对运动细菌的计数。不适于对运动细菌的计数。实验原理实验原理第4页,本讲稿共16页常用计菌器常用计菌器v常用计数器有血球计数板常用计数器有血球计数板(血细胞计数板血细胞计数板)、Petroff-HauserPetrof

3、f-Hauser计菌器以及计菌器以及HawksleyHawksley计菌计菌器等。器等。v各种计数板的计数原理相同,只是血球计各种计数板的计数原理相同,只是血球计数板较厚,不能使用油镜观察,只能计数数板较厚,不能使用油镜观察,只能计数较大的霉菌孢子和酵母菌;而后两种计菌较大的霉菌孢子和酵母菌;而后两种计菌器细菌,可以使用油镜观察,因此可以直器细菌,可以使用油镜观察,因此可以直接计数细菌。接计数细菌。第5页,本讲稿共16页 血球计数板血球计数板 Petroff-Hauser Petroff-Hauser计菌器计菌器HawksleyHawksley计菌器计菌器第6页,本讲稿共16页血血球球计计数数

4、板板是是一一块块特特制制的的载载玻玻片片,其其上上由由四四条条槽槽构构成成三三个个平平台台;中中间间较较宽宽的的平平台台又又被被一一短短横横槽槽隔隔成成两两半半,每每一一边边的平台上各列有一个方格网。的平台上各列有一个方格网。血球计数板的构造血球计数板的构造第7页,本讲稿共16页v每个方格网共分为九个大方格,中间的每个方格网共分为九个大方格,中间的大方格即为计数室。大方格即为计数室。v计数室的刻度一般有两种规格:一种计数室的刻度一般有两种规格:一种是一个大方格分成是一个大方格分成2525个中方格,而每个中方格,而每个中方格又分成个中方格又分成1616个小方格;另一种个小方格;另一种是一个大方格

5、分成是一个大方格分成1616个中方格,而每个个中方格,而每个中方格又分成中方格又分成2525个小方格。个小方格。v无论是哪一种规格的计数板,大方格(计数室)中的小方格无论是哪一种规格的计数板,大方格(计数室)中的小方格都是都是400400个。大方格边长为个。大方格边长为lmmlmm,则每一个大方格的面积为,则每一个大方格的面积为lmmlmm2 2,盖上盖玻片后,盖玻片与载玻片之间的高度为,盖上盖玻片后,盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm0.lmm,所以计,所以计数室的容积为数室的容积为0.lmm0.lmm3 3(万分之一毫升万分之一毫升)。A.25中格X16小格B.16中格X25小格第8页,

6、本讲稿共16页计数方法计数方法v使用血球计数板计数时,通常使用血球计数板计数时,通常数数5 5个中方格个中方格的总菌数,然后的总菌数,然后求每个中方格的平均值,再求每个中方格的平均值,再乘上大方格(计数室)中方乘上大方格(计数室)中方格的数量,就得出一个大方格的数量,就得出一个大方格中的总菌数。数两个大方格中的总菌数。数两个大方格总菌数,平均后,再换算格总菌数,平均后,再换算成每毫升菌液中微生物细胞成每毫升菌液中微生物细胞的数量。的数量。第9页,本讲稿共16页酵酵母母个个体体形形态态第10页,本讲稿共16页制制备备适适当当浓浓度度的的菌菌悬悬液液取取洁洁净净的的血血球球计计数数板板盖盖上上盖盖

7、玻玻片片静静置置3至至5分分钟钟低低倍倍镜镜观观察察找找到到位位置置加加样样品品用用高高倍倍镜镜计计数数设设5个中方格的总菌数为个中方格的总菌数为A,菌液稀释倍数为,菌液稀释倍数为B计数板为计数板为25个中方格个中方格(本次试验本次试验):1ml菌液的总菌数菌液的总菌数=A/525104B计数板为计数板为16个中方格:个中方格:1ml菌液的总菌数菌液的总菌数=A/516104B实验步骤:酵母菌细胞总数的测定实验步骤:酵母菌细胞总数的测定用滴管由盖玻片边缘滴一小滴用滴管由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多不宜过多),则菌液自行渗,则菌液自行渗入,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。入,并用吸水纸吸去

8、沟槽中流出的多余菌悬液。第11页,本讲稿共16页 注意事项注意事项n取样时先要摇匀菌液;取样时先要摇匀菌液;n加样时计数室不可有气泡;加样时计数室不可有气泡;n一般样品稀释度要求每小格内约有一般样品稀释度要求每小格内约有5-105-10个菌个菌体为宜;体为宜;n每个计数室选每个计数室选5 5个中格(个中格(4 4个角和中央)计数;个角和中央)计数;n位于格线上的菌体一般数上不数下,数右不位于格线上的菌体一般数上不数下,数右不数左;数左;n若芽体大小达到母细胞的一半,则作为两个若芽体大小达到母细胞的一半,则作为两个菌体计数。菌体计数。n血球计数板使用完毕,用水冲洗干净,切勿血球计数板使用完毕,用

9、水冲洗干净,切勿用硬物洗刷,以免损坏网格刻度;洗净后自用硬物洗刷,以免损坏网格刻度;洗净后自行晾干或吹风机吹干。行晾干或吹风机吹干。第12页,本讲稿共16页1ml菌液中的总菌数菌液中的总菌数=?答案:答案:(3+4+4+3+2)525104=8105个个/ml25中格中格X16小格小格第13页,本讲稿共16页第14页,本讲稿共16页思考题思考题n根据你的体会,说明用血细胞计数板计数的误根据你的体会,说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差、差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差、力求准确?力求准确?第15页,本讲稿共16页第五组值日生值日第五组值日生值日血球计数板清洗干净血球计数板清洗干净n下次实验:下次实验:n微生物的分离纯化与平板菌落计数微生物的分离纯化与平板菌落计数(一)(一)培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌第16页,本讲稿共16页

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