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1、第二章培养基及其配制第1页，此课件共35页哦第二章培养基及其配制目的要求：1、了解几种常用培养基的特点；2、掌握培养基的主要成分及其作用；3、掌握培养基的配制方法。第2页，此课件共35页哦培养基培养基(culturemedium)：-是植物组织培养的重要基质。是植物组织培养的重要基质。(土壤土壤+自养条件）自养条件）-不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。因此，因
2、此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功的培养基，培养才有可能成功。第3页，此课件共35页哦一、培养基的种类最早的培养基:是Sacks(1680)和Knop(1681)，根据植物从土中主要是吸收无机盐营养，设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液.第4页，此课件共35页哦常用的培养基及特点常用的培养基及特点如下：(1)MS培养基培养基1962年，年，Murashige和和Skoog，培养烟草细胞。培养烟草细胞。特特点
3、点：无无机机盐盐和和离离子子浓浓度度较较高高，为为较较稳稳定定的的平平衡衡溶溶液液；硝硝酸酸盐盐含含量较其他培养基为高量较其他培养基为高；应用广泛；应用广泛基本培养基基本培养基。(2)B5培养基培养基1968年，年，Gamborg等，培养大豆根细胞。等，培养大豆根细胞。特特点点：含含有有较较低低的的铵铵，对对有有些些植植物物的的生生长长有有抑抑制制作作用用；适适宜宜于于双双子子叶叶植植物特别是木本植物物特别是木本植物。(3)White培养基培养基1943年，年，White，培养番茄根尖。，培养番茄根尖。特点：特点：无机盐数量较低，适于生根培养无机盐数量较低，适于生根培养。（4）N6培养基培养基
4、1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培养。年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培养。特特点点：成成分分较较简简单单，KNO3和和（NH4）2SO4含含量量高高。在在国国内内已已广广泛泛应应用于小麦、水稻及其他植物的用于小麦、水稻及其他植物的花药培养花药培养和其他组织培养。和其他组织培养。(5)KM8P培养基培养基1974年，原生质体培养。年，原生质体培养。特点：特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于，广泛用于原生原生质融合的培养。质融合的培养。第5页，此课件共35页哦二、培养基的成分二、培养基的成分水、无机盐、有机物、天然复合物
5、、水、无机盐、有机物、天然复合物、植物激素、培养体的支持材料、抗生素、植物激素、培养体的支持材料、抗生素、活性炭活性炭等。等。第6页，此课件共35页哦（一）水（一）水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。第7页，此课件共35页哦（二）无机元素(inorganicelement)大量元素：大量元素：指浓度大于指浓度大于0.5mmolL的元素等的元素等。其作用是：(1)N是细
6、胞质、细胞核、生物膜等的组成成分，是生命不可缺少的物质。是细胞质、细胞核、生物膜等的组成成分，是生命不可缺少的物质。供应形式：供应形式：NO3N、NH4N。NH4N对植物生长较为有利。对植物生长较为有利。供应物质：供应物质：KNO3、NH4NO3、K2SO4、氨基酸等氨基酸等。(2)P是磷脂的主要成分。参与生物膜、核酸、ATP、ADP等的组成。供应形式：磷酸二氢根、磷酸氢根供应物质：KH2P04或或NaH2P04等。在植物组织培养过程中，向培养基内添加磷，不仅增加养分、提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。第8页，此课件共35页哦(3)K作作用用：对对碳碳水水化化合合物物
7、合合成成、转转移移、以以及及氮氮素素代代谢谢等等有密切关系。一般为有密切关系。一般为13mgL为好。为好。供应物质供应物质：KCI、KN03等盐类提供。等盐类提供。(4)Mg、S和和CaMg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S-是含是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。氨基酸和蛋白质的组成成分。Ca-是构成细胞壁的一种成分，是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用。膜不受破坏有显著作用。第9页，此课件共35页哦微微量量元元素素指小于0.5mmolL的元素，Fe，B，Mn，Zn、Cu，Mo，Co等。铁铁-是一些氧化
8、酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分；是叶绿素形成的必要条件。对胚的形成、芽的分成成分；是叶绿素形成的必要条件。对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。化和幼苗转绿有促进作用。供应物：鳌合铁（供应物：鳌合铁（FeSO47H20+Na2EDTA）在制做在制做培养基时不用培养基时不用Fe2（SO4）3，和和FeCl3(因其在因其在pH值值52以上，易形成以上，易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀的不溶性沉淀)。B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等等：也是植物组织培养中：也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常不可缺少的元素，
9、缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。现象。第10页，此课件共35页哦（三）有机化合物(organiccompound)培养基中若只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基（basicmedium)。为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主要有以下几类：第11页，此课件共35页哦碳碳水水化化合合物物最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源。麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。蔗蔗糖糖使使用用浓浓度度在在2%5%，常常用用3%，即即配制一升培养基称取配制一升培养基称取30g蔗糖蔗糖。高压灭菌时，一部分糖会发生分解，制定配方时要给予考虑。在大规模生
10、产时，可用食用的绵白糖代替。第12页，此课件共35页哦维生素维生素(vitamin)以各种辅酶的形式参与多以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的促种代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。进作用。VBl(盐酸硫胺素盐酸硫胺素)：对愈伤组织的产生和生对愈伤组织的产生和生活力有重要作用。活力有重要作用。VB6(盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。能促进根的生长。Vpp(烟酸烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定与植物代谢和胚的发育有一定关系。关系。Vc（抗坏血酸）抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。：有防止组织变褐的作用。(酚类物质酚类物质-醌醌)一般用量：一般用量：0110mg
11、L。有时用量有时用量较高。有时还使用生物素、叶酸、较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。等。第13页，此课件共35页哦肌醇肌醇 (myoinosltol)又叫环己六醇作用：作用：能能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用。对细胞壁的形成也有作用。对细胞壁的形成也有作用。使用浓度：使用浓度：一般为lOOmgL，第14页，此课件共35页哦氨基酸氨基酸(almino acide)是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。常用的氨基酸：常用的氨基酸：甘氨酸甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰
12、胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。水解乳蛋白或水解酪蛋白水解乳蛋白或水解酪蛋白：它们是牛乳用酶法等加工的水解产物，是含有约20种氨基酸的混合物，用量在10-1000mgL之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。第15页，此课件共35页哦（四）天然复合物其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。它的成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。第16页，此课件共35页哦1)椰椰乳乳是是椰椰子子的的液液体体胚胚乳乳。它它是是使使用用最最多多、
13、效效果果最最大大的的一一种种天天然然复复合合物物。一一般般使使用用浓浓度度在在10%20%，与与其其果果实实成成熟熟度度及及产产地地关关系系也也很很大大。它它在在愈愈伤伤组组织织和和细细胞胞培培养养中中有有促促进进作作用用。在在马马铃铃薯薯茎茎尖尖分分生生组组织织和和草草莓莓微微茎茎尖尖培培养养中中起起明明显显的的促促进进作作用用，但但茎茎尖尖组组织织的的大大小小若若超超过过1nun时，椰乳就不发生作用。时，椰乳就不发生作用。2)香香蕉蕉用用量量为为150-200mlL。用用黄黄熟熟的的小小香香蕉蕉，加加入入培培养养基基后后变变为为紫紫色色。对对pH值的缓冲作用大。主要在兰花的组织培养中应用，
14、对发育有促进作用。值的缓冲作用大。主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。3)马马铃铃薯薯(potato)去去掉掉皮皮和和芽芽后后，加加水水煮煮30min，再再经经过过过过滤滤，取取其其滤滤液液使使用用。用用量量为为150200gL。对对pH值值缓缓冲冲作作用用也也大大。添添加加后后可可得得到到健健壮的植株。壮的植株。4)水水解解酪酪蛋蛋白白为为蛋蛋白白质质的的水水解解物物，主主要要成成分分为为氨氨基基酸酸，使使用用浓浓度度为为100200mgL。受酸和酶的作用易分解，使用时要注意。受酸和酶的作用易分解，使用时要注意。5)其他其他酵母提取液酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%)，主
15、要成分为氨基酸和维生素类；麦主要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取液芽提取液(0.01%0.5%)、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。遇热较稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。乳等。遇热较稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。第17页，此课件共35页哦（五）植物生长调节物(hormone)植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育细胞分化、分裂、发育，影响到植物的影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、形态建成、开
16、花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发衰老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动。等许许多多的生理生化活动。植物激素的种类：植物激素的种类：促进生长：生长素、细胞分裂素、赤霉素促进生长：生长素、细胞分裂素、赤霉素抑制生长：脱落酸、乙烯抑制生长：脱落酸、乙烯在培养基的各成分中，植物生长调节物是培养基的在培养基的各成分中，植物生长调节物是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用。关键物质，对植物组织培养起着决定性作用。第18页，此课件共35页哦1.生生长长素素类类(auxin)主主要要被被用用于于诱诱导导愈愈伤伤组组织织形形成成，诱诱导导根根的的分化和促进细胞分裂、伸长生长。分化和促进细胞
17、分裂、伸长生长。IAA(indoaceticacid吲吲哚哚乙乙酸酸)是是天天然然存存在在的的生生长长素素，亦亦可可人人工工合合成成，其其活活力力较较低低，是是生生长长素素中中活活力力最最弱弱的的激激素素，对对器器官官形形成成的的副副作作用用小小、，高高温温高高压压易易被被破破坏坏，也也易易被被细细胞胞中中的的1AA分分解解酶酶降降解解，受光也易分解。受光也易分解。NAA(naphthaleneaceticacid萘萘乙乙酸酸)在在组组织织培培养养中中的的起起动动能能力力要要比比IAA高高出出3-4倍倍，且且由由于于可可大大批批量量人人工工合合成成，耐耐高高温温高高压压，不不易易被被分分解解破
18、破坏坏，所所以以应应用用较较普普遍遍。NAA和和IBA广广泛泛用用于于生生根根，并并与与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。IBA(indolebutyriacid吲吲哚哚丁丁酸酸)是是促促进进发发根根能能力力较较强强的的生生长长调调节物质。节物质。2，4D(2，4二二氯氯苯苯氧氧乙乙酸酸)起起动动能能力力比比IAA高高10倍倍，特特别别在在促促进进愈愈伤伤组组织织的的形形成成上上活活力力最最高高，但但它它强强烈烈抑抑制制芽芽的的形形成成，影影响响器器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。第19页，此课件
19、共35页哦2.细胞分裂素类细胞分裂素类(cytokinin)这这类类激激素素是是腺腺嘌嘌吟吟的的衍衍生生物物，包包括括6BA(6苄苄基基腺腺嘌嘌呤呤)、Kt(kinetin激激动动素素)、Zt(zeatin玉玉米米素素)等等。其其中中Zt活活性性最强，但非常昂贵，常用的是最强，但非常昂贵，常用的是6BA。作用作用：诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。促进细胞分裂与扩大。促进细胞分裂与扩大。抑制根的分化。抑制根的分化。因因此此，细细胞胞分分裂裂素素多多用用于于诱诱导导不不定定芽芽的的分分化化和和茎茎、苗苗的的增殖，而在生根培养时使用较少或用量较低。增殖，而在生根培养时使用
20、较少或用量较低。第20页，此课件共35页哦3.GA(gibberellic acid赤霉素赤霉素)作用：作用：促促进进幼幼苗苗茎茎的的伸伸长长生生长长，促促进进不不定定胚胚发发育育成成小植株；小植株；赤赤霉霉素素和和生生长长素素协协同同作作用用，对对形形成成层层的的分分化化有有影影响响。（当当生生长长素素赤赤霉霉素素比比值值高高时时有有利利于于木木质质部部分分化化，比比值值低低时时有利于韧皮部分化）有利于韧皮部分化）赤赤霉霉素素还还用用于于打打破破休休眠眠，促促进进种种子子、块块茎茎、鳞茎等提前萌发。鳞茎等提前萌发。第21页，此课件共35页哦激素配比模式激素配比模式生长素与细胞分裂素的比例决定
21、着发育的方向生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向:高高有利于根的形成和愈伤组织有利于根的形成和愈伤组织的形成的形成生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素适中适中有利于根芽的分化、愈伤组织有利于根芽的分化、愈伤组织低低有利于芽的形成有利于芽的形成生长调节物质的使用甚微，一般用生长调节物质的使用甚微，一般用mgL表示浓度。在组织培养表示浓度。在组织培养中生长调节物质的使用浓度，因植物的种类、部位、时期、内源激素中生长调节物质的使用浓度，因植物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异。等的不同而异。一般一般生长素浓度的使用为生长素浓度的使用为0.05-5mgL，细胞分裂素细胞分裂素0.0510mgL
22、。第22页，此课件共35页哦GrowthmediumisoptimisedforregenerationofplantletsNosucrose(0%)Sucrosereducedto1%Sucroseincreasedto5%Theexplantiscompletelycoveredwithgreenshoots,androotsaredevelopingonthelowersurfaceVeryfewshootshavedevelopedontheexplant.Norootsandnocallus.Shootsdevelopedonedgesofuppersurface,andsomer
23、ootdevelopmenthasoccuredShootshavedevelopedoverthesurfaceoftheexplant,alongwithrootsfromthelowersurface.TheresultiscomparablewiththecontrolmediumtissuecultureintheAfricanViolet第23页，此课件共35页哦NoBABAreducedto0.1mg.l-1NoNAAPoorshootdevelopmentandnoroots.ExtensivecallusgenerationPoorshootdevelopmentandnor
24、ootsNAAreducedto0.1mg.l-1Morebalanceddevelopmentofrootsandshoots.However,undifferentiatedcallusisdevelopingattheedgesoftheexplantProfusedevelopmentofrootsandareducednumberofshoots.Undifferentiatedcallusisdevelopingattheedgesoftheexplant第24页，此课件共35页哦NAAincreasedto5.0mg.l-1Profusedevelopmentofrootsove
25、rtheexplantupperandlowersurface,andfewshoots.SomecallusNoMSsaltsNosignofregenerationfromexplantatall.MSsaltsreducedto0.47g.l-1SomerootgrowthbutreduceddevelopmentofshootsMSsaltsincreasedto9.52g.l-1Shootsdevelopedonuppersurfaceofexplant.Norootsorcallus.第25页，此课件共35页哦（六）培养材料的支持物琼脂琼脂(agar)：是最好的固化剂。是一种由海藻
26、中提取是最好的固化剂。是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水琼脂能溶解在热水(90)中，成为溶胶，冷却至中，成为溶胶，冷却至40即凝固即凝固为固体状凝胶。为固体状凝胶。琼脂的用量琼脂的用量:在在610gL之间之间，若浓度太高，培养基就会，若浓度太高，培养基就会变得很硬，营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度变得很硬，营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度过低，凝固性不好。一般琼脂以颜色浅、透明度好、洁净过低，凝固性不好。一般琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。的为上品。琼脂的凝固能力琼脂的凝固能力:与高压灭菌
27、时的温度、时间、与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。逐渐丧失凝固能力。第26页，此课件共35页哦固体培养基的优点固体培养基的优点：操作简便，易于解决通操作简便，易于解决通气问题，便于经常观察研究气问题，便于经常观察研究固体培养基的缺点：固体培养基的缺点：培养物与培养基的接培养物与培养基的接触触(即吸收即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散面积小，各种养分在
28、琼脂中扩散较慢，影响养分的充分利用，同时培养物排较慢，影响养分的充分利用，同时培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用。织产生毒害作用。其他其他：有玻璃纤维、滤纸桥、海绵、脱脂棉、卡拉胶等，有玻璃纤维、滤纸桥、海绵、脱脂棉、卡拉胶等，总的要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。总的要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。第27页，此课件共35页哦（七）抗生物质(antibiotic)抗抗生生物物质质：青青霉霉素素、链链霉霉素素、庆庆大大霉霉素素等等，用用量量在在520mg/L之间。之间。-对对于于刚刚感感染染的的组组
29、织织材材料料，可可向向培培养养基基中中注注入入5%10%的的抗抗菌菌素素。抗抗生生素素各各有有其其抑抑菌菌谱谱，要要加加以以选选择择试试用用，也也可可两两种种抗抗生素混用。生素混用。注意注意:-抗生素对植物组织的生长也有抑制作用抗生素对植物组织的生长也有抑制作用;-某些植物适宜用青霉素，而另一些植物却不大适应某些植物适宜用青霉素，而另一些植物却不大适应;-在工作中不能以为有了抗菌素，而放松灭菌措施在工作中不能以为有了抗菌素，而放松灭菌措施-在在停停止止抗抗生生素素使使用用后后，往往往往污污染染率率显显著著上上升升，这这可可能能是是原原来来受抑制的菌类又滋生起来造成。受抑制的菌类又滋生起来造成。
30、第28页，此课件共35页哦（八）活性炭(activecarbon)活性炭活性炭木炭粉碎经加工形成的粉沫木炭粉碎经加工形成的粉沫结构，它结构疏松，孔隙大，吸水力强，结构，它结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用。有很强的吸附作用。使用浓度使用浓度：0.5l0gL。第29页，此课件共35页哦活性炭的应用活性炭的应用1、具抑褐作用：、具抑褐作用：可以吸附外植体产生的致死性褐化物，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，其效力优于其效力优于Vc和半胱氨酸；在新梢增殖阶段，活性炭可明显和半胱氨酸；在新梢增殖阶段，活性炭可明显促进新梢的形成和伸长，一般使用浓度为促进新梢的形成和伸长，一般使用浓度为0.1%
31、0.2%，不能，不能超过超过0.2%。2、活性炭对生根培养有明显的促进作用、活性炭对生根培养有明显的促进作用：其机理其机理一般认为与活性炭减弱光照有关，可能是由于根顶端产生促一般认为与活性炭减弱光照有关，可能是由于根顶端产生促进根生长的进根生长的IAA，但但IAA易受可见光的光氧化而破坏，因此易受可见光的光氧化而破坏，因此活性炭的主要作用就在于通过减弱光照保护了活性炭的主要作用就在于通过减弱光照保护了IAA，从而从而间接促进了根的生长，由于根的生长加快，吸收能力增强，间接促进了根的生长，由于根的生长加快，吸收能力增强，反过来又促进茎、叶的生长。反过来又促进茎、叶的生长。3、可可降降低低玻玻璃璃
32、化化苗苗的的产产生生频频率率：在在培培养养基基中中加加入入0.3%活性炭，对防止产生玻璃苗有良好作用。活性炭，对防止产生玻璃苗有良好作用。第30页，此课件共35页哦三培养基的制备（一）、母液（一）、母液(stocksolution)（贮备液）的配制和保存的配制和保存欲配制液的浓缩液。一般母液配成比所需浓度高一般母液配成比所需浓度高10-100倍倍。作用：作用：保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取；保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取；便于低温保藏便于低温保藏。注意：注意：1.离子之间发生沉淀，如离子之间发生沉淀，如Ca2+和和S042+，Ca2+、Mg2+和和PO43-一一起溶解后，会
33、产生沉淀，要充分溶解再放入母液中。起溶解后，会产生沉淀，要充分溶解再放入母液中。2.要用蒸馏水或重蒸馏水。要用蒸馏水或重蒸馏水。3.药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4.母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。等。其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。5.母液配好后放人冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。母液配好后放人冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。第31页，此课件共35页哦母液的配制方法：母液的配制方法：将几类
34、营养成分按配方中的用量扩大一定倍数（将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数（a）称量，分别）称量，分别溶解后，混合在一起，定容到一定体积配成混合母液，浓度可用溶解后，混合在一起，定容到一定体积配成混合母液，浓度可用axmg/L表示，即配制一升培养基吸取该母液表示，即配制一升培养基吸取该母液1000/aml.生长素：生长素：用少量用少量95%酒精助溶。配成酒精助溶。配成1mgml。2，4D：用用0.1molL的的NaOH或或KOH助溶，温水定容。助溶，温水定容。细胞分裂素类：细胞分裂素类：少量少量1N盐酸溶解后，加入温水冷却后定容。盐酸溶解后，加入温水冷却后定容。铁盐铁盐（MS为例）：在装有为
35、例）：在装有400ml蒸馏水的烧杯中加入蒸馏水的烧杯中加入2粒苛性钠，粒苛性钠，溶解后加入溶解后加入3.73gEDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢慢加入慢慢加入2.78gFeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至直至全部溶解，冷却后定容至500ml，置于冰箱中备用。（置于冰箱中备用。（200a）第32页，此课件共35页哦(二)培养基的配制及其灭菌培养基的配制方法培养基的配制方法1.将母液按顺序排列、检查是否失效（沉淀或变色将母液按顺序排列、检查是否失效（沉淀或变色2.在有适量蒸馏水在有适量蒸馏水(3/4)的容器中加入适量琼脂和糖的容器中加入适量琼
36、脂和糖加热溶化加热溶化3.依次吸取各种母液和生长调节物质移到容器中依次吸取各种母液和生长调节物质移到容器中4.用蒸馏水定容用蒸馏水定容5.调节调节pH值值(用用0.1M的的NaOH或或HCl调节调节)6.进行分装（进行分装（20-30ml/瓶）瓶）第33页，此课件共35页哦培养基的灭菌方法：方法：详见第四章（操作技术）第34页，此课件共35页哦思考题1MS固体培养基的主要成分包括哪些？固体培养基的主要成分包括哪些？2根据已知条件，计算配制根据已知条件，计算配制650ml培养基各母液的用量，并写出在实验室配制该培培养基各母液的用量，并写出在实验室配制该培养基的各操作步骤。已知：养基的各操作步骤。
37、已知：.培养基配方：培养基配方：MS+6-BA1.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+0.4%琼脂粉。琼脂粉。.实验室有如下母液实验室有如下母液:10倍的大量元素；倍的大量元素；50倍的微量元素；倍的微量元素；100倍的铁盐；倍的铁盐；100倍的有机物；倍的有机物；1mg/ml的的6-BA；1mg/ml的的2,4-D。.若干琼脂粉和蔗糖。若干琼脂粉和蔗糖。3固体培养与液体培养各有何优缺点？固体培养与液体培养各有何优缺点？4配置培养基时，常用的植物生长调节剂都是哪些？各有何作用。配置培养基时，常用的植物生长调节剂都是哪些？各有何作用。5琼脂有什么作用？琼脂有什么作用？1例例L培养基通常加多少培养基通常加多少g琼脂？琼脂？6常用培养基有哪些？它们各有何特点？举例：非洲紫罗兰嫩叶离体培养的过程。常用培养基有哪些？它们各有何特点？举例：非洲紫罗兰嫩叶离体培养的过程。第35页，此课件共35页哦